布鲁菌VirB12基因的分泌表达及鉴定

布鲁菌VirB12基因的分泌表达及鉴定

论文摘要

为获得高纯度易纯化的布鲁菌VirB12蛋白,根据GenBank中的VirB12的基因序列设计引物并进行扩增,将其连接pBIC质粒后转化到短小芽孢杆菌中,得到了VirB12蛋白的分泌型表达菌株。诱导后对其进行了PAGE和Western Blotting鉴定。结果表明,成功构建了VirB12的分泌表达菌株,诱导后在培养上清中大量表达,蛋白含量高达80%,其能与布鲁菌标准阳性血清、6×His单克隆抗体发生反应,与A19-ΔVirB12菌株免疫血清不发生反应,有望用来作为抗原建立区分野毒感染血清和A19-ΔVirB12免疫血清的检测方法,更好地进行布病的防控。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 载体及菌株
  •   1.3 抗体及试剂
  •   1.4 方法
  •     1.4.1 引物的设计与合成
  •     1.4.2 VirB12基因的PCR扩增及回收
  •     1.4.3 重组表达质粒的构建及鉴定
  •     1.4.4 重组阳性菌的诱导表达
  •     1.4.5 重组蛋白的鉴定
  • 2 结果
  •   2.1 VirB12基因的扩增
  •   2.2 重组表达质粒鉴定
  •   2.3 VirB12蛋白的诱导表达
  •   2.4 VirB12蛋白的鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张婷婷,刘梦志,冯生,孙创业,陈泽良,刘宝山,沈国顺

    关键词: 布鲁菌,基因,分泌表达

    来源: 中国兽医杂志 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 沈阳农业大学畜牧兽医学院

    基金: 国家重点研发计划(2017YFD0500900),沈阳市科学技术局重点科技研发计划(17-161-3-00)

    分类号: S852.614

    页码: 31-34

    总页数: 4

    文件大小: 451K

    下载量: 53

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