黎家华（三峡大学医学院病理学教研室湖北宜昌443002）
【中图分类号】R817.33【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）24-0213-02
在组织切片特殊染色制作的过程中,因受很多不确定因素的影响，容易导致组织片从载玻片上脱落，而致染色失败,尤其是嗜银染色过程中,因组织要经过不同试剂的处理,再用蒸馏水或缓冲液反复冲洗,组织脱片的概率就更大。从而造成材料和工时的浪费，笔者总结多年嗜银染色的实践经验，就嗜银染色过程中的防脱片处理做一下介绍。
1材料和方法
1.1材料
临床肾穿刺活检采取的活体肾组织、实验动物的肝、肾组织等，网状纤维染色银氨液和肾小球基膜六胺银染色液等系列染色试剂、载玻片、清洁液(浓硫酸:蒸馏水:重铬酸钾=5:5:1)、防脱片剂(APES；氨醛三已氧基硅烷，福洲迈新生物技术开发有限公司提供)、蛋白甘油、树脂胶即白色乳胶、甘油明胶液等。
1.2方法
1.2.1载玻片的防脱片处理载玻片放入加有洗衣粉的清水中煮沸,认真擦洗,用超声波清洗机超声30分钟，清水冲洗干净，清洁液浸泡24小时，清水彻底冲洗，蒸馏水洗3次,95%酒精浸泡24小时,蒸馏水洗30分钟×3次,150℃烘干,涂防脱片剂(APES,用丙酮1:50稀释),将洁净的载玻片放入其中30秒取出，片刻后入丙酮洗2次,再蒸馏水洗2次,洗去多余的APES,晾干备用。
1.2.2肝、肾组织处理中性甲醛液固定24小时,常规石蜡包埋切片,厚度3um，60～75℃烤片4小时。
1.2.3嗜银染色切片常规脱蜡至水,分别作（1）网状纤维嗜银染色：高锰酸钾液氧化5分钟,水洗,1%草酸水溶液漂白1～2分钟,蒸馏水洗，2.5%硫酸铁铵水溶液媒染15分钟,蒸馏水洗2次,银氨溶液10～20分钟,蒸馏水洗3次,10%福尔马林液还原1分钟,流水冲洗5～10分钟,蒸馏水洗,0.2%氯化金调色5分钟,蒸馏水洗,5%硫代硫酸钠固定3分钟,蒸馏水洗,核固红染色液染色10分钟,蒸馏水洗,常规酒精脱水、透明、封固；（2）肾小球基膜六胺银染色：0.5%高碘酸氧化20分钟,蒸馏水洗3次后,入六胺银工作液中1～2小时、恒温58℃,蒸馏水中洗2次,0.2%氯化金调色1分钟,蒸馏水洗,核固红染色15分钟,马休黄染色1分钟左右,无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。
2结果
在嗜银染色过程中,没有出现脱片现象。网状纤维染色和肾小球基膜六胺银染色清晰。
3讨论
为防止嗜银染色过程中脱片，我们先后使用过蛋白甘油、树脂胶即白色乳胶、甘油明胶液等作粘片剂[1],均匀涂抹于载玻片上,虽然具有一定防脱片效果,但还是不能完全避免脱片。蛋白甘油是实验室常用的一种粘片剂：用鸡蛋清和甘油1:1混合配制,适用于常规染色和一般的特染；树脂胶即白色乳胶是用白色乳胶与水以1%～2%的比例配制使用；甘油明胶液是用1%明胶100ml加甘油12ml,在常规的制片中都很常用。由于粘片剂中含有的甘油、明胶、乳胶是水溶性的,切片经氧化剂处理、草酸漂白、高温染色等过程,易被水溶解而减轻或失去了粘附作用,组织容易脱片。在网状纤维嗜银染色过程中，有以下步骤易脱片：切片经过高锰酸钾氧化、1%草酸漂白后水洗、铁明矾媒染、浸氨银液后水洗易脱片[2]；在肾小球基膜嗜银染色过程中,经过高碘酸氧化、高温六胺银染色时和蒸馏水洗时切片易脱片。
APES(氨醛三已氧基硅烷)是被用于免疫组化染色的防脱片剂,其防脱片效果明显,我们将这一技术用于嗜银染色中,其防脱片结果令人非常满意,没有发生脱片。要达到这一目的,载玻片的防脱片的前期处理非常关键；用洗衣粉擦洗时要戴上手套,用左手母指和中指捏住载玻片两头,右手母指和食指拿作纱布（放上少许洗衣粉)夹在载玻片的两面,来回擦载玻片3～5次,入清水中来回擦3～5次,用超声波清洗机超声30分钟(此后就不能让裸手接触载玻片的两面,每次操作时只能拿载玻片的两侧,防止手指上的油脂沾在载玻片上),小心捞出,逐片插在玻片架上,流水冲洗干净,沥干后将载玻片放入清洁液浸泡24小时,清水洗净清洁液,蒸馏水洗,95%酒精浸泡24小时,蒸馏水洗净烘干备用。
摊片时要选择平坦完整、无气泡的组织贴在防脱载玻片上,应一步到位,不能让组织与载玻片之间存有水份和空气。有折叠、有气泡组织局部不能牢固黏附在载玻片上,在染色时易使局部浮起或脱落。入60℃烤箱烤片4小时以上或过夜,使切片组织充分的粘附在载玻片上。经过以上认真处理,在嗜银染色过程中,能承受蒸馏水冲洗,极少发生脱片。
参考文献
[1]刘彦仿主编.免疫组织化学.北京:人民卫生出版社，1990，4，53.
[2]曹阳，罗虹，罗人滋.网状纤维染色中脱片的解决方法.广西医科大学学报，2003，20(6)，975.