论文摘要
目的探讨鞘氨醇激酶-1（SphK1）对热联合内毒素（LPS）打击小鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）通透性的影响。方法分离培养并鉴定PMVECs,建立热联合LPS双重打击PMVECs模型。将PMVECs细胞分为对照组、热打击组（HS组）、内毒素打击组（LPS组）及热联合内毒素打击组（HS+LPS组）,采用Westernblotting检测各组细胞2种鞘氨醇激酶亚型（SphK1/2）、3种1-磷酸鞘氨醇膜受体（S1PR1/2/3）,以及相关紧密连接蛋白如闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO-1）的表达,荧光定量PCR检测SphK及S1PRmRNA的表达。将细胞分为对照组、HS+LPS组及DMS预处理热联合内毒素打击组（HS+LPS+DMS组）,采用SphK活性检测试剂盒检测酶活性,CCK-8试剂盒检测细胞活力,EVOM跨膜电阻测量仪检测细胞跨上皮电阻（TEER）,并观察特异性抑制SphK1表达对细胞活力和通透性的影响。结果热联合内毒素打击后,细胞SphK1和S1PR3蛋白、mRNA表达及酶活性水平与正常对照组比较明显上升（P<0.01）,细胞活力、TEER值、紧密连接蛋白（ZO-1、occludin）表达较对照组下降;采用SphK1特异性抑制剂DMS预处理PMVECs细胞后,明显提升了细胞活力[63.3%±7.1%vs. 41.3%±4.5%,P<0.05]、TEER值[（154.3±16.0）（Ω·cm2）vs.（84.7±9.6）（Ω·cm2）],以及紧密连接蛋白的表达（P<0.05）。结论 SphK1的激活可以促进热联合LPS打击小鼠PMVECs通透性的增加,主要参与的下游1-磷酸鞘氨醇（S1P）细胞膜表面受体可能为S1PR3,特异性抑制SphK1表达可减轻PMVECs损伤。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 易万华,古正涛,文强,苏磊
关键词: 重症中暑,肺损伤,通透性
来源: 解放军医学杂志 2019年12期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 基础医学,内分泌腺及全身性疾病,急救医学
单位: 广东药科大学研究生院,南方医科大学附属第三医院创伤中心,南部战区总医院重症医学科/全军热区创伤救治与组织修复重点实验室
基金: 军事医学创新工程专项(17CXZ008),广东省自然科学基金(2014A 030313599)~~
分类号: R594.12;R-332
页码: 1018-1023
总页数: 6
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