论文摘要
核小体是真核生物染色质的基本组成单元。核小体的解聚可以动态调控诸如DNA复制、转录、重组等以DNA为模板的生物学过程。特定荧光探针分子与蛋白质疏水残基结合后可被激发荧光信号。荧光热漂移（fluorescence thermal shift,FTS）是一种利用该原理检测温度上升时蛋白质变性过程的方法。本文以Widom 601序列为DNA模板,盐透析法体外装配核小体;分别在实时荧光定量PCR仪的VIC和TAMRA通道激发下,利用FTS检测了核小体在Tris-NaCl（TN）缓冲液和HEPES缓冲液中的解聚状态。研究结果发现,DNA对照序列在TN缓冲液中产生的背景噪声较大,VIC通道激发下组蛋白八聚体产生的荧光信号相对较强。FTS检测核小体的结果显示,随着温度的上升核小体的解聚过程分为2个阶段,～71℃和～84℃是核小体解聚速度最快的温度范围,而75℃～80℃是降解速度较慢的阶段。基于FTS基本原理,本研究发展了一种新颖的可用于检测核小体结构稳定性的方法,为核小体与染色质结构相关问题的研究奠定了一定的技术基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 郭明欣,张凤慧,邵学勤,赵秀娟,蔡禄,赵宏宇
关键词: 核小体解聚,荧光热漂移,蛋白质疏水结构域,染色质结构
来源: 中国生物化学与分子生物学报 2019年09期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学
单位: 内蒙古科技大学生命科学与技术学院
基金: 国家自然科学基金项目(No.31760247,No.61671256),内蒙古自然科学基金项目(No.2017MS0303)~~
分类号: Q343.2
DOI: 10.13865/j.cnki.cjbmb.2019.09.13
页码: 1021-1028
总页数: 8
文件大小: 426K
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标签：核小体解聚论文; 荧光热漂移论文; 蛋白质疏水结构域论文; 染色质结构论文;