小桐子JcCIPK2基因的克隆与表达分析

小桐子JcCIPK2基因的克隆与表达分析

论文摘要

钙调磷酸酶B类似蛋白互作蛋白激酶(CBL-interacting protein kinase, CIPK)是一类植物中特有的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,参与多种生物和非生物胁迫响应过程。该实验通过RT-PCR克隆了小桐子(Jatropha curcas L.)JcCIPK2基因cDNA全长序列,采用荧光定量qRT-PCR分析JcCIPK2基因在不同组织及不同处理(12℃和1℃低温、42℃高温、30%PEG、250 mmol/L NaCl、150μmol/L ABA)下的表达模式。结果显示:(1)小桐子JcCIPK2基因开放阅读框全长1 398 bp,编码465个氨基酸,相对分子量为52.95 kD,等电点为8.89。(2)蛋白质结构分析表明,JcCIPK2的N端含有位于第11~265个氨基酸之间的丝氨酸/苏氨酸激酶蔗糖非发酵-1型相关蛋白激酶3催化域STKcSnRK3,在激酶结构域内还具有激活环(Activation Loop);C端含有位于第316~430个氨基酸之间的CIPK蛋白激酶调控域CIPKC,其调控域中含有CIPK家族典型的能与CBL特异性结合的NAF结构域,位于第314~369个氨基酸之间。(3)系统进化分析显示,小桐子JcCIPK2蛋白与同属于大戟科的木薯(Manihot esculenta Crantz.)同源关系最近,序列一致性达87%。(4)qRT-PCR分析表明,JcCIPK2基因在小桐子根、茎、叶中均有表达,经12℃和1℃低温处理后,叶片中JcCIPK2基因的表达都呈现先上调后下调表达的趋势,且都在低温处理24 h的表达量最高,与对照相比分别上调了6.0倍和16.72倍;小桐子JcCIPK2基因在42℃高温、30%PEG、150μmol/L ABA、250 mmol/L NaCl处理下也受到不同程度的诱导表达。研究推测,JcCIPK2基因在小桐子对逆境的响应与适应中起重要作用。

论文目录

  • 1 材料和方法
  •   1.1 植物材料培养及处理
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
  •     1.2.2 JcCIPK2基因cDNA片段的克隆
  •     1.2.3 JcCIPK2基因的生物信息学分析
  •     1.2.4 JcCIPK2基因的实时荧光定量表达分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 小桐子JcCIPK2基因的克隆
  •   2.2 JcCIPK2氨基酸序列及蛋白质结构分析
  •   2.3 JcCIPK2基因同源性及进化分析
  •   2.4 小桐子JcCIPK2基因在不同处理下的表达分析
  • 3 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 杨宇,陈永坤,孔春艳,龚明

    关键词: 小桐子,基因克隆,非生物胁迫,表达分析

    来源: 西北植物学报 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 林业

    单位: 云南师范大学生命科学学院生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南省生物质能与环境生物技术重点实验室

    基金: 国家自然科学基金(31860062,31460059)

    分类号: S794.9

    页码: 2123-2131

    总页数: 9

    文件大小: 2432K

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