导读:本文包含了心肌样细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:视黄醛脱氢酶(Raldh),视黄酸,心肌样细胞,细胞分化
心肌样细胞论文文献综述
张雅雯,杨倩,王凤,张立凤[1]（2019）在《Raldh2沉默对P19细胞向心肌样细胞分化的影响（英文）》一文中研究指出目的深入心脏发育相关基因表达层面,研究视黄酸代谢中的关键基因视黄醛脱氢酶2 (retinaldehyde dehydrogenase 2,Raldh2)在P19细胞中的表达并探讨对其心肌样分化的影响机制。方法构建miRNA干扰质粒转染P19细胞以使Raldh2表达降低,qPCR检测miRNA对Raldh2在P19细胞中的敲低效率,利用杀稻瘟菌素筛选出稳定低表达Raldh2的细胞株,加入二甲基亚砜以诱导P19细胞分化为心肌样细胞,qPCR检测心肌发育相关基因在心肌样分化各时期的表达水平。结果成功构建Raldh2低表达的稳定P19细胞株MiRaldh2,敲低效率达91%(t=25.52,P<0.000 1,95%CI:0.81～1.01);在整个分化过程中,MiRaldh2组部分心脏相关转录因子的mRNA水平普遍低于P19组,尤其在第7天,MiRaldh2组Gata 4、Tef-1、N-myc、α-mhc和Ctnt的相对表达率分别为P19组的0.16±0.01 (t=17.29,P<0.000 1)、0.51±0.02 (t=3.564,P=0.023 5)、0.23±0.01 (t=13.17,P=0.000 2)、0.20±0.02 (t=17.76,P<0.000 1)和0.59±0.06 (t=3.642,P=0.021 9),然而对于Nkx2.5和Hand2的mRNA水平,MiRaldh2组在第2～7天显着升高,第7天的表达率分别为P19组的2.25±0.35 (t=3.526,P=0.024 3)和3.58±0.20 (t=9.214,P=0.011 6)。结论敲低Raldh2基因可抑制P19细胞向心肌样细胞的分化,Raldh2可能对心脏早期发育具有重要作用,其低表达可能是维甲酸缺乏引起心脏畸形的原因之一。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2019年06期）
刘洋,吕洋,王浩宇,李娇,任君旭[2]（2019）在《1,25-维生素-D_3体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的最适浓度》一文中研究指出目的探讨1,25-维生素D_3(1,25-vitamin-D_3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D_3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。5.Real-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D_3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。(本文来源于《解剖学报》期刊2019年05期）
赵星阳,谈佳岩,李翰耕,叶蓉蓉,秦存兰[3]（2019）在《淫羊藿苷对小鼠皮肤成纤维细胞重编程为心肌样细胞的作用》一文中研究指出目的研究小鼠成纤维细胞重编程为心肌样细胞(induced cardiomyocytes,iCMs)过程中淫羊藿苷(icariin,ICA)的作用及心血管发育中胚层相关蛋白1(mesoderm posterior 1,Mesp1)的表达。方法 MTT法筛选ICA的最佳药物浓度。GMT转染小鼠皮肤成纤维细胞,建立重编程心肌样细胞模型。qRT-PCR检测转染后重编程细胞中肌球蛋白重链6(myosin heavy chain 6, Myh6)的mRNA表达,免疫荧光细胞化学方法检测心肌肌钙蛋白I (cardiac troponinI, cTnI)及Mesp1的表达情况。结果 ICA最佳药物浓度为10-7mol/L。ICA组诱导iCMs高表达cTnI,是GMT组的1.3倍。Myh6 mRNA在重编程第3周达到高峰,且ICA组显着高于GMT组(P<0.01)。Mesp1与c TnI的表达趋势正好相反。结论 ICA可以提高成纤维细胞重编程为心肌样细胞的效率;Mesp1参与促进成纤维细胞重编程的过程。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2019年05期）
李娇[4]（2019）在《FGF-2转染诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究》一文中研究指出由于成体心肌细胞是终末分化细胞,缺血性心脏病引起的心肌损伤不能通过自身再生来修复,因此挽救梗死的心肌组织,恢复其原有的功能是治疗缺血性心脏病的关键。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是常见的"种子细胞"。BMSCs在一定条件的诱导下,可以向多个方向分化,如成脂肪、骨、肌肉、神经、心肌、内皮等多类细胞组织,BMSCs还可以作为根源细胞来延缓衰老和修复疾病损伤的组织及器官。将诱导分化为心肌细胞样细胞的骨髓间充质干细胞,植入受损的心肌组织,对修复心肌损伤具有一定的作用。成纤维细胞生长因-2(Fibroblastgrowthfactor-2,FGF-2)是广泛分布于体内各种组织中的多功能生长因子。它具有刺激各类干细胞的迁移、增殖、分化,促进新生血管形成和保护心脏的作用。随着转基因技术的不断发展,通过基因转染的方式改造干细胞已成为干细胞研究领域的热点。在基因修饰中,慢病毒载体是应用最广泛的基因载体,与质粒、腺病毒等载体相比,它具有转染效率高、细胞毒性低、目的基因表达时间长等优势。本研究通过构建慢病毒载体将FGF-2基因转染到BMSCs中,转染BMSCs过表达FGF-2基因。探究FGF-2在BMSCs向心肌样细胞分化过程中的作用,比较基因转染是否优于直接诱导。期待借此提升细胞的分化效率,为临床通过心肌细胞移植治疗缺血性心脏病提供优良的细胞来源。为探讨慢病毒介导FGF-2转染诱导BMSCs向心肌样细胞分化的效率是否优于FGF-2直接诱导,本实验首先采用全骨髓贴壁法体外无菌条件下分离、培养BMSCs,对扩增纯化后的细胞进行形态学观察,结果显示,BMSC在6h后开始粘附并在24h后附着,此时细胞呈圆形并且具有较强的折光性;2d后,大部分细胞已经贴壁,大多数是短纺锤形,也有少部分细胞呈不规则形;4d后,细胞体积开始变大,球形细胞逐渐减少;7d后细胞体积逐渐变大并开始向周围扩散,细胞大致呈平行排列。利用流式细胞技术对培养至第4代BMSCs进行鉴定,结果表明,CD45的阳性表达率为4.6%;CD29的阳性表达率为98.2%,CD90的阳性表达率为91.8%,符合BMSCs的特征。经鉴定,培养至第4代的细胞为纯化的BMSCs。诱导前,对FGF-2直接诱导的最佳诱导浓度和慢病毒转染诱导的最适病毒MOI值进行筛选,通过预实验得知,FGF-2的最佳诱导浓度可能为1ng/ml,Lenti-FGF-2-GFP慢病毒最适转染MOI值为150和Lenti-对照-GFP慢病毒最适转染MOI值为100。对培养至第2代的细胞加入诱导剂,诱导72h后进行换液,更换为不含诱导剂的IMDM培养基继续培养。根据加入诱导剂的不同分为以下4组:A组(BMSCs空白对照组)、B组(FGF-2诱导组)、C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)、D组(Lenti-对照-GFP慢病毒转染组)。诱导前通过预实验确定最佳细胞诱导密度、最佳诱导浓度、最佳诱导时间。Real-timePCR检测心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2.5的表达,实验结果表明,GATA-4、Nkx2.5在各组细胞中均有表达。GAPDH作为内参对照,利用相对定量分析判断GATA-4、Nkx2.5基因的表达情况。结果显示,与A组(BMSCs空白对照组)相比,B组(FGF-2诱导组)、C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)诱导4W后GATA-4、Nkx2.5基因的表达增强。其中,C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)的GATA-4及Nkx2.5基因的相对表达量在各时间点均高于其他实验组。免疫细胞化学染色法及免疫荧光化学染色法检测心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、间隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)、结蛋白(Desmin)、原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)的表达情况,结果显示,诱导4W后,cTnI、cTnT、Cx43、Desmin、Tm在各组细胞的胞质中可见阳性表达。统计分析显示,C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)中标记物的积分光密度(IOD)值最强。A组(BMSCs空白对照组)D组(Lenti-对照-GFP慢病毒转染组)的Cx43和cTnI呈弱阳性或阴性表达。各诱导组间各标记物的阳性表达存在显着性差异。Western blot检测原肌球蛋白(Tropomyosin,Tm)及结蛋白(Desmin)的表达情况,结果显示,诱导4W后A组(BMSCs空白对照组)、B组(FGF-2诱导组)、C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)、D组(Lenti-对照-GFP慢病毒转染组)中Tm及Desmin均有表达,其中C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)的Desmin阳性表达率高于其他实验组,B组(FGF-2诱导组)、C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)Tm的表达高于A组(BMSCs空白对照组)和D组(Lenti-对照-GFP慢病毒转染组)。统计分析,各实验组Desmin的阳性表达差异均有统计学意义,B组(FGF-2诱导组)、C组(Lenti-FGF-2-GFP慢病毒转染组)Tm的表达无显着差异。透射电镜结果显示,经FGF-2慢病毒转染诱导后的BMSCs细胞核呈卵圆形,位于细胞的中央,细胞质内可见肌丝、粗面内质网、线粒体、核糖体等细胞器。符合心肌细胞发育过程中的结构特征。由此实验可知:(1)FGF-2可转染诱导BMSCs向心肌样细胞分化。(2)慢病毒介导FGF-2转染诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的效率优于FGF-2直接诱导。(本文来源于《河北北方学院》期刊2019-06-01）
黄月[5]（2019）在《Islet-1诱导C3H10T1/2心肌样细胞分化中Akt参与干性维系的研究》一文中研究指出第一部分Islet-1诱导C3H10T1/2心肌样分化过程Akt参与干性维持的作用研究目的:探究在Islet-1诱导的C3H10T1/2心肌样细胞分化过程中Akt与干性因子的表达调控是否相关。方法:在C3细胞中转染过表达Islet-1的慢病毒,构建心肌样细胞分化模型,通过反转录定量PCR(RT-qPCR)检测蛋白激酶(Akt)及干性因子Sox2,Nanog的基因表达;western blotting检测Akt及干性因子的蛋白表达;免疫荧光检测干性因子及Akt的定位改变。采用Akt激活剂SC79与抑制剂MK2206分别作用于C3细胞,western blotting检测p-Akt表达情况以摸索出药物最佳浓度;以两种药物的最佳浓度分别作用于C3细胞后,RT-qPCR检测干性因子基因表达,western blotting检测干性因子蛋白表达,免疫荧光检测干性因子定位改变。结果:转入Islet-1后C3发生了心肌样细胞分化,分化过程中Akt活性及入核量降低,但干性因子的基因表达、蛋白表达、细胞定位均未发生改变;摸索出的SC79最佳作用浓度为4ug/ml,MK2206最佳作用浓度为1umol/L。激活及抑制Akt后,干性因子的mRNA表达、蛋白表达及核定位均未产生改变。结论:在Islet-1诱导的C3心肌样细胞分化模型中,未发现Akt直接参与干性因子表达调控的证据,其间的发生机制有待进一步探究。第二部分刺五加苷诱导间充质干细胞成骨分化过程中Akt与干性维系的作用研究目的:探讨刺五加苷(Acanthopanax)诱导间充质干细胞(BMSCs)成骨分化过程中Akt是否通过干性调控而发挥作用。方法:提取SD大鼠的BMSCs,在培养第3代后采用流式细胞术鉴定表面抗原CD45,CD29,CD90;在经典成骨诱导培养基中加入刺五加苷使之浓度为1×10-8mol/L,称刺五加苷组。采用含刺五加苷组及经典成骨组的成骨诱导液作用于MSCs诱导培养12天,RT-q PCR检测成骨分化相关基因的基因水平,Western blotting检测p-Akt,Akt,Sox2,Nanog的蛋白表达水平;培养21天行矿化钙结节茜素红染色。结果:第3代BMSCs表面抗原符合干细胞鉴定标准;RT-q PCR检测结果显示,诱导12天后,刺五加苷组成骨分化相关基因BSP,OSX,OCN表达量高于不含刺五加苷的经典成骨组及阴性对照,P<0.05;RUNX表达量虽高于阴性对照组,却低于经典成骨组,P<0.05。茜素红染色结果显示刺五加苷组矿化钙结节多于经典成骨组,提示该浓度刺五加苷成骨诱导效果较经典成骨组更佳。Western blotting结果显示,成骨诱导后p-Akt显着增强,干性因子却无变化。提示Akt可能促进BMSCs的成骨分化,但该作用并不是依赖于调控干性因子的表达而实现。结论:刺五加苷能协同地塞米松促进BMSCs成骨分化,其作用可能与Akt通路活化有关,但其作用并不直接通过调控干性因子的表达而实现。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2019-05-01）
李艳君,唐艳红,陈元秀,杨媚[6]（2019）在《TBX18腺病毒使成鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的研究》一文中研究指出目的研究TBX18腺病毒能否转染成鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),并诱导其向心肌样细胞分化。方法实验于2015年5月—2016年10月在武汉大学心血管病研究所/心血管病湖北省重点实验室进行。全骨髓贴壁法分离培养BMSCs,采用流式细胞仪分析细胞纯度,随机数字表法分为实验组(TBX18组)、空白病毒对照组(GFP组)和空白对照组(B组),用TBX18或GFP重组腺病毒载体分别转染BMSCs,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测α-SMA基因的表达,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测α-SMA和cTnI蛋白的表达。结果通过全骨髓贴壁法可分离获得纯度较高的BMSCs(97%～99%)。TBX18组的α-SMA mRNA表达(2. 66±0. 08)明显高于GFP组(1.49±0.09)和B组(1.00±0.00),差异均有统计学意义(t=16. 743、36. 813,P <0. 01); TBX18组α-SMA蛋白的表达(0.66±0.00)明显高于GFP组(0.36±0.08)和B组(0. 17±0.03),差异均有统计学意义(t=6. 751、23.761,P<0.01);cTnI蛋白的表达(0.57±0.12)明显高于GFP组(0.32±0.04)和B组(0.09±0.00),差异均有统计学意义(t=3.298、6.660,P<0.01)。结论 TBX18腺病毒能成功转入骨髓间充质干细胞,并在细胞内稳定表达;TBX18可诱导成鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞。(本文来源于《疑难病杂志》期刊2019年01期）
麦丽萍,杨翔宇,吴岳恒,何国东,李晓红[7]（2019）在《心脏转录因子Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用》一文中研究指出背景:大多数研究通过使用小分子物质或病毒等方式诱导获取心肌样细胞,而关于重组蛋白用于细胞重编程获得心肌样细胞的报道较少。目的:探讨Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用。方法:构建Nkx2.5原核表达载体,不同时间点诱导Nkx2.5重组蛋白表达和分离纯化。使用纳米转导试剂包裹Nkx2.5形成纳米-蛋白复合体,转染人骨髓间充质干细胞,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测心肌细胞特异性标志MHC的表达,观察人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转化情况。结果与结论:(1)28℃ IPTG诱导培养4 h获取的蛋白表达量更高;(2)纳米-Nkx2.5复合体可成功转染人骨髓间充质干细胞并诱导其向心肌样细胞转化;(3)结果表明,重组蛋白能被高效转导到细胞内,并能促使人骨髓间充质干细胞重编程为心肌样细胞,但细胞转分化效率尚待提高。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2019年05期）
邢玉洁,朱火兰,朱舜明,张荣怀,崔倩卫[8]（2018）在《血管紧张素Ⅱ体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞心肌样细胞分化研究》一文中研究指出目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)在体外将大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)诱导为心肌样细胞的作用。方法:将第3代培养的BMMSCs分为AngⅡ组(终浓度为0.1μmol/L)和空白对照组进行诱导,两组诱导24h之后吸弃诱导液,用完全培养液继续培养4周。分别用倒置相差显微镜、MTT法、流式细胞仪、免疫荧光染色法、透射电镜检测细胞的形态学变化、增殖能力、分化率、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达以及超微结构。结果:BMMSCs原代培养时呈现多种形态,经过传代体积增大,AngⅡ诱导后呈长梭形且均匀一致生长。MTT法显示AngⅡ组细胞的增殖能力高于对照组。流式细胞检测示:AngⅡ组诱导分化率为(25.3±2.2)%。免疫荧光染色显示AngⅡ诱导后的BMMSCs中cTnI呈阳性表达。透射电镜观察到Z线样物质和肌丝。结论:血管紧张素Ⅱ能够体外使大鼠BMMSCs诱导分化为心肌样细胞。(本文来源于《陕西医学杂志》期刊2018年10期）
王红丽,李志强,周贤惠,李耀东,汤宝鹏[9]（2018）在《体外诱导心肌样细胞中HCN4过表达对起搏电流特性的影响》一文中研究指出目的体外构建具有表达功能性的起搏心肌样细胞,并检测起搏心肌样细胞中起搏电流的特性。方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞。构建携带人HCN4基因的重组腺病毒载体(rAd/GFP/HCN4)和绿色荧光蛋白的腺病毒载体(rAd/GFP),转染至心肌样细胞分为rAd/GFP/HCN4组和rAd/GFP组,不做任何处理作为对照组。Western blot检测各组HCN4蛋白表达,全细胞膜片钳技术记录各组中起搏电流情况。结果荧光显微镜观察到长梭形心肌样细胞,PCR鉴定重组腺病毒载体rAd/GFP/HCN4和rAd/GFP构建成功;rAd/GFP/HCN4组HCN4蛋白相对表达量(1.31±0.02)高于rAd/GFP组(0.55±0.02)和对照组(0.52±0.03)(P<0.05),rAd/GFP组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);膜片钳实验在转基因细胞中检测到起搏电流,而rAd/GFP组和对照组中未检测到起搏电流。结论 rAd/GFP/HCN4转染到心肌样细胞中,心肌样细胞中HCN4蛋白表达增加且可检测到起搏电流,从而使心肌样细胞具有自主搏动,为体外构建生物起搏器提供研究基础。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2018年10期）
邢玉洁,祝领,朱火兰,赵娜,徐晶[10]（2018）在《心肌样细胞和聚乳酸-聚乙醇酸共聚物在体内构建工程化心肌组织》一文中研究指出目的探索以骨髓间充质干细胞(BMMSCs)诱导分化的心肌样细胞为种子细胞、以聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)作为支架材料,在大鼠体内构建工程化心肌组织的可实施性。方法分离培养大鼠BMMSCs,取第3代细胞用5-氮胞苷和血管紧张素Ⅱ联合诱导24 h继续培养3周,将诱导分化的心肌样细胞种植到PLGA支架上形成移植物,在孵箱里孵育3 d,然后将其移植到预先制备好的大鼠腹膜腔囊袋之中。4周以后,取出移植物并采用HE染色观察心肌样细胞的形态特征、用免疫组织化学染色法检测工程化心肌细胞肌钙蛋白(c Tn) I的表达、透射电镜下观察心肌样细胞的形态和结构。结果 HE染色结果显示,在PLGA支架上可见到梭形的细胞核,且心肌样细胞分布均一;免疫组织化学染色结果显示PLGA-心肌样细胞组绝大多数移植细胞表达心肌特异性蛋白c Tn I;透射电镜观察显示,在体内构建的工程化心肌组织中,可以看到肌丝沿细胞的长轴平行排列,胞浆中富含大量的线粒体和内质网,以及桥粒结构、缝隙连接和Z线样物质。结论成功的建立了在大鼠体内构建工程化心肌组织的方法。这种体内微环境有助于移植组织或细胞的存活,在大鼠体内构建的工程化心肌组织具有与天然心肌组织相似的结构。(本文来源于《心脏杂志》期刊2018年06期）
心肌样细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨1,25-维生素D_3(1,25-vitamin-D_3)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的最适浓度。方法采用全骨髓贴壁法结合密度梯度离心法分离培养SD大鼠BMSCs,应用3、6、12、24 nmol/L 1,25-vitamin-D_3对第2代BMSCs进行定向诱导,倒置相差显微镜下动态观察细胞生长状况。运用流式细胞仪对BMSCs进行鉴定。应用免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测诱导后4周的BMSCs原肌球蛋白(TPM)、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)的表达情况。运用透射电子显微镜观察分化细胞与心肌细胞类似的超微结构。在诱导后1、2和4周这3个时间点,以Real-time PCR法检测细胞心肌早期转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)、Nkx2.5的表达。结果 1.倒置相差显微镜下观察,原代细胞培养72 h后,大部分细胞呈短梭形;培养1周后,细胞呈现出多样化的形态;诱导4周的BMSCs,相邻细胞间联系紧密,排列具有明显的方向性。不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导后的BMSCs,其数量及形态存在差异。2.流式细胞术的鉴定结果显示,CD29、CD45、CD90的阳性表达率分别为97.4%、3.3%和91.4%。3.免疫细胞化学、免疫荧光及Western blotting法检测不同浓度1,25-vitamin-D_3诱导4周后的BMSCs均可见TPM、Cx43及cTnT的阳性表达,其中6 nmol/L组的表达均最高,而未诱导组细胞呈弱阳性或阴性表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.透射电子显微镜观察,细胞诱导培养至4周,胞质内可见较多平行排列的肌丝及线粒体、核糖体、粗面内质网等细胞器。5.Real-time PCR检测结果显示,GATA4及Nkx2.5基因于诱导后1周表达增强,2周表达减弱,4周表达增强;4个诱导组相比较,6 nmol/L组明显优于其他3组(P<0.05)。结论 1,25-vitamin-D_3可以诱导BMSCs获得心肌分化表型,其诱导分化最适浓度为6 nmol/L。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
心肌样细胞论文参考文献
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标签：视黄醛脱氢酶(Raldh); 视黄酸; 心肌样细胞; 细胞分化;