贝类中GII型诺如病毒的微滴式数字PCR定量检测方法

贝类中GII型诺如病毒的微滴式数字PCR定量检测方法

论文摘要

采用微滴数字PCR(ddPCR)技术,建立RT-ddPCR快速定量检测GⅡ型诺如病毒的方法。反应条件的退火温度为55℃,反应体系引物探针浓度分别为1、 0.25μM。建立的GII型诺如病毒RT-ddPCR方法的特异性和稳定性好;在单位体积内拷贝数20~60 000区间内呈现良好的线性关系, R2=0.997。本方法可以对单位体积拷贝数为20的样品进行稳定的定量检测,对单位体积拷贝数为6.6的样品进行稳定检测。精密度结果表明, 4组浓度的样品所得到的组内RSD值为2.86%~23.59%之间,均<25%;对23个贝类样品的检测结果与荧光PCR检测结果一致。本研究建立的GⅡ型诺如病毒的RT-ddPCR定量检测方法可用于贝类样品诺如病毒的快速定量检测。

论文目录

  • 一、实验材料
  •   (一)实验用诺如病毒标准品
  •   (二)主要试剂
  •   (三)主要仪器
  • 二、实验方法
  •   (一)引物探针
  •   (二)RNA提取及浓度测定
  •   (三)反应体系与反应条件
  •   (四)特异性验证实验
  •   (五)阳性样品以及扩增稳定性验证
  •   (六)线性范围验证
  •   (七)灵敏度检测
  •   (八)精密度验证
  • 三、结果与分析
  •   (一)数字PCR引物探针特异性验证
  •   (二) 诺如病毒数字PCR的阳性样品以及扩增稳定性验证
  •   (三)诺如病毒数字PCR线性范围验证
  •   (四) 诺如病毒数字PCR的定量检测限和检测限的验证
  •   (五) 诺如病毒数字PCR标准的精密度实验
  •   (六)贝类样品的检测
  • 四、讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 姚丽锋,王小玉,蔡教英,游淑珠,丁琦,符家忍

    关键词: 贝类,型诺如病毒,微滴式数字,定量分析

    来源: 农产品质量与安全 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 经济与管理科学,农业科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 轻工业手工业

    单位: 拱北海关技术中心

    基金: 中国拱北海关科技项目(ZH2016-15)

    分类号: TS254.7

    页码: 20-25

    总页数: 6

    文件大小: 325K

    下载量: 131

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