大黄素通过靶向miR-29a-5p/MDM2通路调控高糖诱导的小鼠足细胞损伤机制研究

论文摘要

目的:研究大黄素对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及分子作用机制。方法:将分化成熟的小鼠足细胞分为正常对照组（D-葡萄糖5 mmol/L）、模型组（D-葡萄糖30 mmol/L）、大黄素组（D-葡萄糖30 mmol/L+大黄素30μg/mL）。qRT-PCR检测MDM2、podocin、nephrin mRNA及miR-29a-5p的表达,Western blot检测MDM2、podocin、nephrin蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果:大黄素能促进高糖诱导下小鼠足细胞中podocin、nephrin的表达,抑制高糖引起的小鼠足细胞损伤及凋亡;大黄素可促进高糖诱导下小鼠足细胞中miR-29a-5p的表达,抑制MDM2的表达;双荧光素酶报告系统结果表明miR-29a-5p靶向负调控MDM2的表达;过表达miR-29a-5p可促进高糖诱导下小鼠足细胞中podocin和nephrin蛋白的表达,并抑制细胞凋亡;抑制miR-29a-5p表达则使podocin和nephrin蛋白表达显著降低,MDM2蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,逆转了大黄素对高糖诱导小鼠足细胞损伤的作用。结论:大黄素能通过靶向miR-29a-5p/MDM2通路减轻高糖诱导的小鼠足细胞损伤,抑制细胞凋亡。

论文目录

1 材料与仪器

1.1 细胞株

1.2 药物与试剂

1.3 主要仪器

2 方法

2.1 细胞培养、分化和分组[6]

2.1.1 细胞传代:

2.1.2 细胞分化:

2.1.3 实验分组:

2.1.4 双荧光素酶报告系统验证miR-29a-5p与MDM2之间的关系:

2.1.5 过表达miR-29a-5p对高糖诱导的小鼠足细胞的影响:

2.1.6 抑制miR-29a-5p表达对高糖诱导的小鼠足细胞的影响:

2.2 细胞转染

2.3 Real-time PCR检测mRNA的表达

2.4 流式细胞术测定细胞凋亡率

2.5 Western blot检测蛋白表达

2.6 统计学处理

3 结果

3.1 大黄素对高糖损伤小鼠足细胞凋亡的影响

3.2 大黄素对高糖损伤小鼠足细胞podocin、nephrin、MDM2 mRNA及miR-29a-5p表达的影响

3.3 大黄素对高糖损伤小鼠足细胞podocin、nephrin、MDM2蛋白表达的影响

3.4 miR-29a-5p对MDM2表达的靶向调控作用

3.5 过表达miR-29a-5p对高糖诱导下小鼠足细胞中miR-29a-5p表达及细胞凋亡的影响

3.6 过表达miR-29a-5p对高糖诱导下小鼠足细胞中podocin、nephrin蛋白表达的影响

3.7 抑制miR-29a-5p表达后大黄素对高糖诱导下小鼠足细胞中miR-29a-5p表达及细胞凋亡的影响

3.8 抑制miR-29a-5p表达后大黄素对高糖诱导下小鼠足细胞中MDM2、podocin、nephrin蛋白表达的影响

4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 何媛,郭剑超

关键词: 大黄素,高糖,小鼠足细胞损伤,凋亡

来源: 中药材 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 天津医科大学第二医院内分泌科

分类号: R285.5

DOI: 10.13863/j.issn1001-4454.2019.07.042

页码: 1664-1669

总页数: 6

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大黄素通过靶向miR-29a-5p/MDM2通路调控高糖诱导的小鼠足细胞损伤机制研究

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