重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型Cap蛋白及其免疫特性分析

论文摘要

目的利用重组杆状病毒高效表达猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2,PCV2）Cap蛋白,并分析该蛋白的免疫特性。方法将PCV2 Cap基因克隆至转移载体pFastBacⅠ,转化感受态E.coli DH10Bac细胞,获得重组杆粒r Bacmid-Cap,转染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot法检测重组杆状病毒,并于High Five（H5）细胞中进行高效表达。将小鼠随机分为PBS对照组、杆状病毒组、重组杆状病毒组及疫苗对照组,均经小鼠肌内注射,100μL/只,分别于第0和14天进行免疫,于首免后第21、28、35及42天经小鼠眼眶静脉丛采血,分离血清,ELISA法进行检测。结果 PCR和测序分析结果表明,重组转移质粒和重组杆粒构建正确。重组PCV2 Cap蛋白的相对分子质量约28 000,可与抗His标签单克隆抗体及抗PCV2 Cap多克隆抗体发生特异性结合。重组杆状病毒按MOI=5及1感染H5细胞约72 h,PCV2 Cap蛋白表达量最高,表达产量约150μg/mL。首免后第21、28、35及42天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于PBS对照组及杆状病毒组（P <0. 001）;首免后第21、28、35天,重组杆状病毒组小鼠血清抗体水平明显高于疫苗对照组（P <0. 05）,首免后第42天,两组差异无统计学意义（P> 0. 05）。结论成功利用杆状病毒表达系统高效表达了PCV2 Cap,重组蛋白可诱导小鼠产生较高水平抗体,本研究为PCV疫苗的研制奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张艳艳,张静远,缪发明,陈腾,杨金金,阮晓凤,张守峰,扈荣良

关键词: 重组杆状病毒,猪圆环病毒型,蛋白,高效表达,免疫特性

来源: 中国生物制品学杂志 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学,军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室

分类号: S852.651

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002438

页码: 40-45

总页数: 6

文件大小: 369K

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