导读:本文包含了多克隆抗体制备论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,蛋白,免疫,印迹,纤毛,分枝,免疫学。
多克隆抗体制备论文文献综述
杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜[1]（2019）在《结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的在大肠埃希菌(E. coli)中表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)Rv0674蛋白,纯化后制备多克隆抗体,并检测抗体效价。方法用PCR技术从MTB H37Rv基因组中扩增Rv0674基因,克隆至p EASYBlunt E1表达载体后,转化入E. coli BL21(DE3)中,用优化后的IPTG诱导表达条件表达Rv0674蛋白,His trap TM HP亲和层析柱纯化目的蛋白;将纯化的蛋白腹腔注射BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体效价及特异性。结果成功获得了Rv0674序列正确的重组质粒p EASY-E1-Rv0674,挑选出了高表达Rv0674基因的菌株,确定的最适表达条件为1. 0 mmol/L IPTG 28℃诱导表达8 h,获得了相对分子质量约26 500的可溶性蛋白;免疫BALB/c小鼠后,能刺激小鼠产生多克隆抗体,获得的抗血清具有良好的抗原结合特性,且效价大于1∶51 200。结论成功获得了高纯度的Rv0674蛋白,并首次制备出小鼠抗Rv0674蛋白的多克隆抗体,为进一步研究Rv0674蛋白的功能和临床诊断结核病(tuberculosis,TB)的应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年12期）
张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯[2]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年11期）
魏晓雷,叶汉梅,罗智[3]（2019）在《黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体,分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白;以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白, PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高,在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述,研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体,为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。(本文来源于《水生生物学报》期刊2019年06期）
卓严玲,吕其壮,邓家华,梁小梅,梁小妹[4]（2019）在《猪P58~(IPK)蛋白多克隆抗体的制备》一文中研究指出P58IPK(58 kD inhibitor of PKR)作为宿主细胞分子伴侣蛋白,在调节机体抗病毒反应和免疫应答方面发挥着重要作用。本研究拟克隆猪(Sus scrofa) P58IPK基因CDS序列并构建其原核表达载体,纯化P58IPK蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,以期为后续研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)与宿主之间的互作关系提供基础材料。根据猪P58IPK全基因序列(GenBank No. HQ287801.1)设计引物,以反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法扩增P58IPK基因CDS序列(去除信号肽序列),经NdeⅠ/XbaⅠ双酶切后定向克隆至原核表达载体pCzn1;将其转化Arctic-Express TM大肠杆菌(Escherichia coli)进行诱导表达;表达产物经变性、复性及His-Band Ni+层析柱亲和纯化,将纯化产物HisP58IPK重组蛋白作为抗原免疫兔子(Oryctolagus cuniculus)制备多克隆抗体。抗体纯化后,分别利用间接ELISA和Western blot方法对其效价和特异性进行检测。结果显示,克隆所得的猪P58IPK基因CDS序列长度为1 425 bp,表达产物His-P58IPK重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子量约为54.44 kD;由此蛋白制备的多抗效价在1∶512 000以上,能够特异性识别目标蛋白(包括重组蛋白His-P58IPK和猪P58IPK蛋白)。本研究成功克隆了猪P58IPK多克隆抗体,可为深入研究猪P58IPK蛋白功能和PCV2病毒与宿主之间的互作机制提供基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年11期）
周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川[5]（2019）在《莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C. reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2019年06期）
王璐,查浩浩,江志钢[6]（2019）在《利用DNA免疫技术制备果蝇GBB多克隆抗体及其表达模式的分析》一文中研究指出TGF-β信号家族在生物体生命活动中具有多种发育和生理功能。研究该信号家族在生物体内的表达模式具有重要的意义。gbb是TGF-β信号成员bmp7的果蝇同源基因,为了进一步研究gbb对胚胎发育的影响,本文采用DNA免疫技术制备得到果蝇GBB多克隆抗体。首先提取果蝇总RNA,反转录得到cDNA文库,以该文库为模板克隆出gbb基因编码区序列,构建成真核表达质粒pCAGGS-P7/gbb。采用DNA免疫技术免疫BALB/c小鼠,取心血分离血清制备了GBB多克隆抗体。免疫印迹试验表明制备的GBB多克隆抗体有效,果蝇胚胎免疫荧光分析表明GBB在果蝇胚胎发育0～9 h无明显表达,9 h之后开始高效表达。(本文来源于《激光生物学报》期刊2019年05期）
周萌,柴晓利[7]（2019）在《施氏假单胞菌胞内NapA/NapB蛋白的多克隆抗体制备及蛋白免疫印迹分析》一文中研究指出旨在探究利用蛋白免疫印迹手段测定施氏假单胞菌胞内关键酶NapA和NapB表达量的可行性。选取多肽片段合成免疫抗原,并用其免疫兔子获得相应的多克隆抗体。ELISA检测第叁次免疫后两周的兔抗血清的效价,并将最终免疫产生的抗体用于施氏假单胞菌样品的蛋白免疫印迹分析。制备的多肽抗原具有良好的免疫原性,NapB免疫原效果甚佳,血清效价大于1∶160000,NapA的效价也可达到1∶14000。免疫印迹试验结果的发光图像中内参条带清晰整齐,在目标蛋白条带区域也可以看到明显反应带。本研究制备出的抗体可用于施氏假单胞菌胞内NapA和NapB蛋白的免疫印迹分析,后续还可以改变实验条件通过内参蛋白进行半定量。(本文来源于《山东化工》期刊2019年20期）
田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠[8]（2019）在《蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出蛋白质谷氨酰胺酶(Protein-glutaminase,简称PG)是一种新型蛋白质脱酰胺酶,在蛋白质改性领域具有广阔的应用前景。但是,目前关于蛋白质谷氨酰胺酶的测定方法主要是通过苯酚-次氯酸盐反应测定铵离子含量指示蛋白质谷氨酰胺酶的酶活,该方法精确度和灵敏度有限。因此,利用原核表达系统表达解朊金黄杆菌(Chryseobacterium proteolyticum)分泌的蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg,纯化后制备其多克隆抗体用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶的含量。首先以解朊金黄杆菌基因组为模板扩增出成熟肽基因mpg,将其与pET32a载体连接构建重组质粒pET32a-mpg,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。在25℃条件下,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,目的蛋白表达量最高、呈可溶性蛋白。通过Ni-NTA柱纯化的重组蛋白mPG-His_6,将其作为抗原,免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。间接酶联免疫法检测其效价,所得抗体效价为1∶5 000。蛋白质免疫印迹实验结果说明,该多克隆抗体特异性良好。最后使用该多克隆抗体对解朊金黄杆菌的发酵上清液进行蛋白质免疫印迹反应,检测天然蛋白质谷氨酰胺酶,结果表明该抗体特异性良好,可用于检测解朊金黄杆菌分泌的蛋白质谷氨酰胺酶,为深入研究蛋白质谷氨酰胺酶的生物学功能、建立蛋白质谷氨酰胺酶高产菌株的高通量筛选方法奠定了基础。(本文来源于《工业微生物》期刊2019年05期）
赵畅,张江,范子玲,白云龙,孙书函[9]（2019）在《牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立》一文中研究指出目的制备牛对氧磷酶-1(paraoxonase-1,PON-1)蛋白多克隆抗体,并建立PON-1的双抗夹心ELISA检测方法。方法将重组牛PON-1蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,经AKTA蛋白纯化系统纯化抗体。以获得的多克隆抗体为捕获抗体,牛PON-1单克隆抗体为检测抗体,HRP标记的山羊抗小鼠IgG为二抗,构建牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测法,并对多克隆抗体(1∶100、1∶200、1∶400、1∶800、1∶1 600、1∶3 200、1∶6 400、1∶12 800)及单克隆抗体浓度(0. 2、0. 4、0. 8、1. 6、3. 2、6. 4 mg/mL)、包被条件(37℃孵育2 h、4℃孵育过夜)、封闭液(1%脱脂奶粉、5%脱脂奶粉、0. 5 mol/L氯化铵)、封闭条件(37℃2 h、37℃4 h、4℃过夜)进行优化,同时验证方法的线性及准确度。采用该方法及市售试剂盒同时检测酮病组及对照组奶牛血清中的PON-1含量。结果建立的双抗夹心ELISA法最适检测条件为:单克隆抗体浓度为3. 2 mg/mL,多克隆抗体工作浓度为1∶800稀释,封闭液为5%脱脂奶粉,包被及封闭条件均为4℃过夜。牛PON-1蛋白标准品浓度在90～3 125 ng/mL浓度范围内,与A_(450)值呈良好的线性关系,标准曲线方程为y=0. 618 6 x-0. 753 6,R~2=0. 981 3;5份样品检测结果均值为764. 21 ng/mL,回收率为97. 97%。市售试剂盒和本实验建立方法检测酮病组奶牛体内PON-1含量均显着低于对照组(P <0. 001)。结论成功获得了抗牛PON-1蛋白的多克隆抗体,并建立了牛PON-1蛋白的双抗夹心ELISA检测方法,且该方法具有良好的线性及准确度。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年10期）
郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁[10]（2019）在《禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出自2015年以来,国内鸡(Gallus domesticus)群因禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)感染引起的包涵体肝炎、心包积液的病例呈逐年上升趋势。为制备反应原性良好的FAdV-4血清学诊断抗原,本研究根据密码子优化后的FAdV-4 Fiber2全基因合成序列进行了体外扩增,再将其克隆入p Cold表达载体,构建原核表达载体pCold-Fiber2。pCold-Fiber2重组质粒转化至大肠杆菌(Escherichia coli) PGTf2感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-thiogalac toside, IPTG)诱导表达后纯化Fiber2蛋白,用该蛋白免疫家兔(Oryctolagus cuniculus),成功制备了抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体。Western blot和间接免疫荧光试验(indirected immunofluorescence assay, IFA)结果表明,抗FAdV-4 Fiber2蛋白多克隆抗体纯化后可与Fiber2蛋白和FAdV-4发生特异性反应,证明Fiber2蛋白具有良好的免疫原性。建立的FAdV-4抗体间接ELISA检测方法显示该方法检测灵敏性为96%,特异性为100%。本研究成功制备了具有良好Western blot和IFA反应原性的多克隆抗体,建立了FAdV-4抗体间接ELISA检测方法,该方法反应特异性好、灵敏度高、操作简单、反应结果稳定可靠,适用于鸡群抗体水平的监测、评估和发现早期隐性感染,为研制FAdV-4的血清学诊断技术和防控该病提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年10期）
多克隆抗体制备论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
多克隆抗体制备论文参考文献
[1].杨延辉,董利军,梁忠喆,刘通,张炜.结核分枝杆菌Rv0674蛋白的表达及其多克隆抗体的制备[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯.牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].浙江农业学报.2019
[3].魏晓雷,叶汉梅,罗智.黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备[J].水生生物学报.2019
[4].卓严玲,吕其壮,邓家华,梁小梅,梁小妹.猪P58~(IPK)蛋白多克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报.2019
[5].周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川.莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].国际药学研究杂志.2019
[6].王璐,查浩浩,江志钢.利用DNA免疫技术制备果蝇GBB多克隆抗体及其表达模式的分析[J].激光生物学报.2019
[7].周萌,柴晓利.施氏假单胞菌胞内NapA/NapB蛋白的多克隆抗体制备及蛋白免疫印迹分析[J].山东化工.2019
[8].田敏,曲瑞丹,刘英杰,陈浩喆,林青楠.蛋白质谷氨酰胺酶成熟肽基因mpg原核表达及其多克隆抗体的制备[J].工业微生物.2019
[9].赵畅,张江,范子玲,白云龙,孙书函.牛对氧磷酶-1蛋白多克隆抗体的制备及其双抗夹心ELISA检测方法的建立[J].中国生物制品学杂志.2019
[10].郭浩然,贾艳娥,吉艳红,李郁.禽腺病毒4型Fiber2蛋白表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].农业生物技术学报.2019
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