导读:本文包含了原生质体分离论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:质体,正交,组合,花椒,山丹,叶肉,细胞系。
原生质体分离论文文献综述
王珺华,王凯琪,王凯,孙志宏,曹园[1]（2019）在《山丹原生质体的分离条件探究》一文中研究指出本研究旨在建立山丹高效原生质体分离体系,为山丹种质资源的有效利用提供科学依据。以山丹鳞茎胚性愈伤组织为材料,通过酶解法获得山丹原生质体,进一步采用3因素4水平L16(34)正交试验,对原生质体分离条件进行优化研究。结果表明:(1)在预处理条件下(0.015 g/mL纤维素酶+0.005 g/mL果胶酶+0.65 mol/L甘露醇)得出最佳酶解时间为6 h,产量为3.47×106个/g。(2)对正交试验结果进行极差分析,确定原生质体产量主次因素为纤维素酶浓度>果胶酶浓度>甘露醇浓度,同时得到最佳酶组合为0.02 g/mL纤维素酶、0.008 g/mL果胶酶,最佳渗透压浓度为0.6 mol/L甘露醇,原生质体产量最高为3.47×106个/g,活性为60.32%。(3)在最佳酶组合处理下,采用暗处理可将原生质体活性提高到76.15%;在15 min、1000 r/min时,原生质体产量最高,为3.51×106个/g;在10 min、800 r/min时,原生质体活性最高,为61.2%。试验获得了山丹原生质体最佳分离条件,建立原生质体分离体系,可为山丹种质资源的有效利用提供参考。(本文来源于《中国农学通报》期刊2019年34期）
陈越,王玲仙,付坚,陈玲,肖素勤[2]（2019）在《云南疣粒野生稻原生质体高效分离培养体系的建立》一文中研究指出【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。(本文来源于《西南农业学报》期刊2019年10期）
牛瑜菲,彭建营[3]（2019）在《酸枣花粉原生质体的分离条件研究》一文中研究指出旨在为酸枣倍性育种、细胞融合提供材料,为枣品种杂交培育、品种更新开辟新径。以酸枣四分体时期的花粉为材料,采用酶解法分离原生质体,血球计数器计算原生质体产量以及FDA测定原生质体的活力。试验结果表明,甘露醇作为渗透压调节剂,在1%蜗牛酶+0.5%纤维素酶的混合酶液中,静止酶解4 h,四分体时期的花粉原生质体分离率最高,达到4.8×105个/mL,且通过0.01%的FDA活力检测,四分体花粉原生质体的活力为21.1%;不同浓度的甘露醇影响花粉原生质体的分离,试验得出,在0.3 mol/L的甘露醇中,四分体时期的花粉原生质体分离率达到3.8×105个/mL,且活力为27.3%。四分体时期花粉原生质体的成功分离为后续叁倍体育种提供了材料,为酸枣花粉其他时期的原生质体分离提供了实践基础。(本文来源于《中国农学通报》期刊2019年32期）
张天[4]（2019）在《国槐叶肉细胞原生质体分离研究》一文中研究指出国槐(Sophora japonica L.),原产于我国北方,是一种集食用、药用、用材、城市园林绿化、观赏于一体的树种。植物原生质体是仅由原生质膜包裹的裸露的活细胞,由于没有细胞壁的阻碍,且具备细胞的全能性,个体间相互独立,均匀程度较高的特点,所以被广泛用在基础生命科学与作物育种改良中。目前尚未有国槐原生质体分离方面的研究报道,本研究通过对原生质体分离流程及叶片最佳分离时期、酶液组合浓度的优化和分离条件的确定,建立起国槐叶肉细胞原生质体分离体系,为国槐后续深入进行基因学及其他分子生物学研究提供依据。主要研究结果如下:1.原生质体分离流程及叶片最佳分离时期的确定通过参考不同植物叶肉原生质体分离方法,本研究以国槐叶片为材料进行原生质体分离,根据分离效果对分离流程加以改良,最终确定了适宜国槐叶肉原生质体分离的配制酶液、原生质体分离与纯化和原生质体计数与活力测定的方法。在温室播种培育国槐幼苗,选取不同叶龄叶片进行分离试验,其结果表明:10~15d的叶片分离得到的原生质体产量与活力均较高,且这些叶龄之间的分离效果没有显着差别;叶龄大于15d,国槐原生质体产量显着下降,并且出现细胞壁无法降解的带壁单个细胞,因此10~15d叶龄国槐实生苗叶片为最佳分离时期。2.酶液组合浓度的优化在2018年9月、2019年3月和4月叁个时期在温室播种培育国槐幼苗进行分离试验。以纤维素酶R-10(1.0%、1.5%、2.0%和2.5%)、果胶酶Y-23(0.2%、0.3%、0.4%和0.5%)和离析酶R-10(0.8%、1.0%、1.2%和1.4%)为基础,进行正交试验L_(16)(4~5)。最终确定优化后的酶液组合浓度为:2018年9月,2.0%纤维素酶R-10+0.5%果胶酶Y-23+1.0%离析酶R-10;2019年3月,1.5%纤维素酶R-10+0.3%果胶酶Y-23+0.8%离析酶R-10;2019年4月,1.5%纤维素酶R-10+0.4%果胶酶Y-23+1.4%离析酶R-10。3.原生质体分离条件的遴选通过对酶液渗透压、酶解时间、酶解温度、酶液酸碱度和材料预处理进行单因素实验,最终确定不同试验时期国槐叶肉原生质体分离条件及其对应结果为:2018年9月,在含有0.5M甘露醇的CPW洗液中质壁分离1小时后,置于2.0%纤维素酶R-10+0.5%果胶酶Y-23+1.0%离析酶R-10,0.4mol/L甘露醇,pH为5.7的酶液中,在26℃条件下酶解2.5h,其原生质体产量与活力分别为8.02×10~6gFW~(-1)和84.1%。2019年3月,在含有0.5M甘露醇的CPW洗液中质壁分离1小时后,置于1.5%纤维素酶R-10+0.3%果胶酶Y-23+0.8%离析酶R-10,0.4mol/L甘露醇,pH为5.7的酶液中,在26℃条件下酶解3h,其原生质体产量与活力分别为8.48×10~6gFW~(-1)和84.4%。2019年4月,在0.5M甘露醇渗透压质壁分离处理1h后,置于1.5%纤维素酶R-10+0.4%果胶酶Y-23+1.4%离析酶R-10,0.4mol/L甘露醇,pH为5.7的酶液中,在26℃条件下酶解3h,其原生质体产量与活力分别为8.37×10~6gFW~(-1)和83.1%。4.不同生长季国槐原生质体分离酶液组合浓度及分离条件试验结果的差异,原因是试验期间温度与光照条件的不同导致植物细胞生理状况、植物细胞壁成分不同。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
于相丽,李勇慧,郭小妞[5]（2019）在《油麦菜原生质体分离条件的优化研究》一文中研究指出文章以油麦菜叶为材料,分析了各种因素对油麦菜原生质体分离的影响.结果表明,油麦菜叶片原生质体分离最佳条件为暗处理48 h;在30℃下、pH值为5.9、以9%甘露醇、3%纤维素酶、0.5%离析酶、0.1%果胶酶的条件下原生质体数量可达2.1×104个/mL,原生质体活率为93.1%,纯化速度以1 300 r/min效果最好.(本文来源于《农业科学研究》期刊2019年01期）
孔瑶,冯娇娇,张政权,李思璐,宋志伟[6]（2018）在《玉米根尖组织原生质体的分离和流式分析》一文中研究指出为探究基因表达对根尖细胞命运决定的影响,需将根部不同类型细胞分群,以进行更深入的分析。本研究通过酶解法获取玉米(Zea mays)幼嫩根尖组织的原生质体,利用荧光染色和流式细胞术进行分析和分选。实验结果显示,对于4～5 d的幼嫩玉米根尖组织,酶解获取原生质体的最优方案为:酶处理组合为1.0%纤维素酶和0.3%果胶酶,最适渗透压条件为10%甘露醇,最适酶解时间为4 h,最适p H值为5.8。对于上述最佳条件下提取的原生质体进行纯化,原生质体悬浮液中的细胞碎片等杂质得到有效清除。以荧光染料碘化丙啶(propidium iodide, PI)和荧光素双醋酸酯(fluorescein diacetate, FDA)对纯化的原生质体进行染色,荧光显微镜下观察显示,原生质体活性较高;为了进一步进行流式分选,对于不同荧光染料进行染色效果分析显示,Hoechst33342对活性原生质体的染色效果优于4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI),可使体系中大部分原生质体染色,且分辨率高;同时,Hoechst33342最佳染色温度为38℃,最佳染色pH值为11.59。本研究为深入探讨植物根尖细胞的相关研究提供了实验依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2018年12期）
李南,杨秀平,周正君,邓鹏[7]（2018）在《花椒原生质体分离与培养研究》一文中研究指出以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显着影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6～0.7mol·L~(-1)时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7mol·L~(-1)甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×105个·g~(-1)和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6mol·L~(-1)甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12～14h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×105个·g~(-1)、59.15%和53.87×105个·g~(-1)、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×105个·mL~(-1),培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3～5次,原生质体28d后形成微细胞团,培养60d后可形成2mm左右的愈伤组织。(本文来源于《西北林学院学报》期刊2018年06期）
周一鹏,何丽,罗丽,许晓玲,徐小勇[8]（2018）在《不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响》一文中研究指出以椪柑愈伤组织和试管苗叶片为试验材料,采用纤维素酶R-10+离析酶R-10的酶液组合Ⅰ和纤维素酶Worthington+离析酶R-10的酶液组合Ⅱ进行原生质体的分离,比较这2种酶液组合对原生质体的酶解时间、产量及活性氧含量的影响。结果表明,酶液组合Ⅱ所需的酶解时间均短于酶液组合Ⅰ;酶液组合Ⅱ所获得的原生质体产量均高于酶液组合Ⅰ,在愈伤组织中前者产量是后者的9. 09倍,在叶片中前者产量是后者的5. 29倍,差异显着;酶液组合Ⅰ的愈伤组织原生质体的活性氧水平是酶液组合Ⅱ的1. 96倍,且差异显着,而对于叶肉原生质体,2种酶液组合之间的差异不显着。因此可见,酶液组合Ⅱ更适合用于椪柑原生质体的分离。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2018年21期）
石雪珺,陈俊通,钟剑,张腾旬,钟艺[9]（2018）在《东方百合‘索邦’原生质体分离与纯化》一文中研究指出以东方百合'索邦'的叶片和花瓣为材料,分析了高渗溶液处理和黑暗处理对百合原生质体制备的影响,并利用正交试验优化原生质体制备的参数,探讨不同酶浓度、酶解时间、取材部位等因素对原生质体产量的影响。结果表明,13%的甘露醇处理30min以及黑暗处理叶片48h、黑暗处理花瓣72h均可显着提升原生质体产量。叶片在2%纤维素酶、1%离析酶、酶解时间7h、取上部新叶时酶解效果最好,花瓣在2%纤维素酶、0.5%离析酶、酶解时间10h、取初开期的花被片时原生质体产量最高(本文来源于《中国观赏园艺研究进展2018》期刊2018-07-25）
李南[10]（2018）在《花椒原生质体分离与培养》一文中研究指出花椒是我国重要的经济树种之一,具有巨大的经济价值和药用价值,由于人们对生活水平高质量的追求,花椒产品逐步多样化,这促使了花椒产业结构不断的升级,花椒在市场销售的品种已经难以满足当前市场发展的需要,花椒种质资源创新和良种繁育是解决该问题的重要途径之一。目前花椒的遗传改良以传统的自然选育和杂交为主,但由于花椒属于无融合生殖植物,导致花椒种质创新的工作周期长且效率低。体细胞杂交技术能扩大遗传重组范围,提高种质创新的工作效率,在应用于育种的实践中具有很大的应用价值。体细胞杂交的应用必须以高效的原生质体培养为前提。原生质体培养技术不仅能创造新的种质材料,而且在促进体细胞杂交在花椒的遗传改良中的应用具有重要意义。为了开展花椒原生质体培养技术的研究,本文以韩城大红袍花椒为材料,开展了3方面研究工作:第一,花椒成熟种胚离体培养的初步探究;第二,花椒原生质体分离技术的优化;第叁,花椒原生质体培养技术体系的研究。主要研究结果如下:1.成熟种胚离体培养的初步探究以韩城大红袍花椒成熟种胚为试验材料,研究了花椒成熟种胚离体培养条件。采用75%酒精消毒30s和0.1%升汞消毒7min是花椒最适的消毒时间组合,无菌种胚获得率最高可达到75.22%。由愈伤组织诱导不定芽的分化培养基为MS+1.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.1mg·L~(-1) NAA,诱导率最高达到65.44%。不定芽的增殖培养基为MS+0.1 mg·L~(-1) IBA+0.5mg·L~(-1) 6-BA,平均苗高达3.1cm,增殖系数为3.6。生根培养基为0.5mg·L~(-1) IBA+1/4MS,生根率最高可达92%。2.花椒原生质体的分离与纯化以韩城大红袍花椒叶片为试验材料,利用酶解法分离原生质体,通过试验分别研究预处理、叶龄和叶片位置及苗龄对花椒原生质体分离的影响。结果表明:低温预处理后原生质体剥离的效果要优于没有预处理或者其他预处理方法,叶龄在15d至60d之间的无菌苗叶片均适合于制备原生质体,原生质体产量均可达1×10~6个·mL~(-1),活力可达80%以上。苗龄在35d的无菌苗最适于花椒原生质体分离。3.花椒原生质体的培养以花椒叶片分离出的原生质体为试验材料,研究了培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明:分离纯化后的花椒原生质体在WPM+0.5mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA培养效果较好,最适花椒原生质体培养方式是液体培养方式,最佳的培养密度为1×10~5个·mL~(-1),培养第3天原生质体第一次分裂,2周分裂3-5次,原生质体在28天后形成微细胞团,培养60天后可形成了直径为2mm左右的愈伤组织,此次试验共获得2316个直径为2mm的愈伤组织。在愈伤组织增殖培养上,2316个直径为2mm愈伤组织仅有22个增殖到直径5mm,转入到在MS+1.0 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1) NAA分化培养基中,培养40d后有4个愈伤组织分化出不定芽,每个愈伤组织都分化出1个不定芽,总共分化出4个不定芽,其中2个不定芽是畸形的,没有叶的分化。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-05-01）
原生质体分离论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】为云南疣粒野生稻原生质体的培养、细胞融合、细胞再分化成植株奠定基础。【方法】测定不同酶解组合及浓度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度下云南疣粒野生稻原生质体的产量和活力,同时筛选云南疣粒野生稻原生质体分离和培养的较优条件。【结果】优化后建立云南疣粒野生稻胚性悬浮细胞系的周期可缩短至45～60 d;在纤维素酶1.5%+果胶酶0.3%+甘露醇0.6 M+MES 5 mM+CaCl_(2 ) 5 mM条件下酶解2 h,云南疣粒野生稻原生质的产量为1.45×10~(6 )个/g·FW,活力达到90.17%,制备出的原生质体在固液培养下得到云南疣粒野生稻原生质体再生植株。【结论】建立了一套快速高效分离培养云南疣粒野生稻原生质体的体系,对研究重要植物资源、种质创新和发掘其优良基因具有重要意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原生质体分离论文参考文献
[1].王珺华,王凯琪,王凯,孙志宏,曹园.山丹原生质体的分离条件探究[J].中国农学通报.2019
[2].陈越,王玲仙,付坚,陈玲,肖素勤.云南疣粒野生稻原生质体高效分离培养体系的建立[J].西南农业学报.2019
[3].牛瑜菲,彭建营.酸枣花粉原生质体的分离条件研究[J].中国农学通报.2019
[4].张天.国槐叶肉细胞原生质体分离研究[D].西北农林科技大学.2019
[5].于相丽,李勇慧,郭小妞.油麦菜原生质体分离条件的优化研究[J].农业科学研究.2019
[6].孔瑶,冯娇娇,张政权,李思璐,宋志伟.玉米根尖组织原生质体的分离和流式分析[J].农业生物技术学报.2018
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[8].周一鹏,何丽,罗丽,许晓玲,徐小勇.不同酶液组合对椪柑原生质体分离的影响[J].江苏农业科学.2018
[9].石雪珺,陈俊通,钟剑,张腾旬,钟艺.东方百合‘索邦’原生质体分离与纯化[C].中国观赏园艺研究进展2018.2018
[10].李南.花椒原生质体分离与培养[D].西北农林科技大学.2018
论文知识图
