黄锦莲（福建省沙县医院365500）
【摘要】目的探讨HBV血清标志物ELISA法与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）荧光定量检测的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA含量，同时用ELISA法检测HBV血清标志物。结果HBsAgHBeAgHBcAb阳性组患者血清中HBV-DNA阳性率要明显高于HBsAgHBeAbHBcAb阳性组患者，HBeAg与HBV-DNA拷贝数有显著性差异（P<0.05）。结论血清中HBV-DNA含量与乙肝免疫标志物之间存在密切的关系，在各种HBV模式中，以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高。ELISA法不能直接反应乙肝患者血清中的病毒含量，PCR检测可以体现病毒的复制情况，对乙肝的早期诊断、制定治疗方案、尤其是对抗病毒治疗的疗效观察有重要的治疗意义。
【关键词】HBV聚合酶链反应HBV-DNA血清标志物
【中图分类号】R446.11【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）35-0163-01
乙型肝炎病毒的感染可引起一系列疾病的发生，是世界上最常见的传染病之一，可从无症状的病毒携带者或隐形感染者到急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌。在我国60%的人受过HBV感染，在现患慢性肝炎患者中约80%以上为慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群患原发性肝癌的危险性相对增高。所以，加强对HBV的防治显得十分重要。
当前，临床上HBV感染的诊断主要来源于HBV血清免疫标志物ELISA法与HBV-DNA荧光定量检测。HBV血清免疫标志物（HBVM）反映的是机体对HBV的免疫反应强度，HBV-DNA是血清中HBV存在与复制的直接标志。本文通过对306例乙型肝炎患者HBV血清免疫标志物表达情况以及HBV-DNA含量来研究机体针对HBV的免疫反应强度、HBV复制程度之间的关系，帮助临床医生更准确诊断HBV的感染，对判断患者的病情、预后及抗病毒治疗有重要的指导作用。
1材料与方法
1.1检测对象
306例乙型肝炎患者为我院的住院及门诊病人。年龄8岁～75岁，平均44.5岁，其中男性210例，女性96例。
1.2方法
1.2.1HBV-DNA荧光定量PCR检测
采用厦门安普利公司Amplly2400型扩增仪进行PCR扩增。PCR诊断试剂盒购自厦门安普利HBV-DNA原装配套试剂。（1）HBV-DNA模板提取：取血清样本50ul，加入裂解液100ul，裂解液使用前应振摇混悬，然后分别加入待测标本或标准品50ul，混悬，室温静置10min；10000g离心25s，去上清；加入150ul洗涤液，混悬，10000g离心25s，去上清；加入150ul重复洗涤液，混悬，10000g离心25s，去上清备用。（2）加样：步骤（1）制备的沉淀分别用反应缓冲液30ul混悬，取25ul加入反应管中，混匀，稍微离心，置入荧光PCR扩增仪内。（3）上机检测：38℃5min，95℃10min；进入以下循环：95℃15s，58℃50s（30s后读荧光），40循环。以每毫升DNA拷贝数表示HBV-DNA含量。
1.2.2血清标志物侧定
采用ELISA方法检测HBV标志物。ELISA试剂盒购自厦门英科新创有限公司，操作按说明书。
2结果
306例血清标本根据HBVM的模式情况及HBV-DNA检出的结果不同，进行分组，其结果见表1。
表1HBV-DNA定量结果与ELISA法检测结果的比较
HBVM类型例数HBV-DNA阳性数HBV-DNA阳性率(%)
1、HBsAgHBeAgHBcAb阳性组1019695.1
2、HBsAgHBeAbHBcAb阳性组1236754.5
3、HBsAgHBcAb阳性组794658.2
4、HBcAb阳性组30
3讨论
本文对306例乙型肝炎患者进行血清免疫标志物和HBV-DNA荧光定量PCR检测，结果发现HBV血清标志物阳性不同的模式中存在不同的病毒复制，HBsAgHBeAgHBcAb阳性组HBV-DNA荧光定量PCR检出率95.1%，其HBV-DNA拷贝数显著高于其他组（P<0.05），说明这种乙肝病毒血清标志物模式阳性者具有很强的传染性，HBVM中HBeAg阳性乙肝患者HBV均处于大量复制阶段，提示患者具有高度传染性，与文献[1]报道一致，这也从基因水平证实了HBeAg是HBV复制和传染性的良好指标。虽然在HBeAg阳性组中，有近4.9%的病人HBV-DNA阴性，但这些患者中多数人是由于正在使用抗病毒药物治疗或治疗后的患者血清；在HBsAgHBeAbHBcAb阳性组中阳性率54.5%，HBsAgHBcAb阳性组阳性率58.2%，HBV-DNA拷贝数差异很大，说明ELISA检测结果相同的病人，其体内HBV-DNA复制情况存在很大差异。一般认为HBeAb持续阳性提示HBV复制处于较低水平，其DNA阳性率低，拷贝数也较低。这证明了HBeAb的出现，是病毒复制由活跃转为相对静止，与相关文献报道一致[2]。
综上所述，HBV-DNA作为HBV感染的分子生物学标志，可较好地反映患者体内HBV病毒含量及复制状况，ELISA反映的是人体对HBV的免疫反应状态，只能表明有无HBV的存在，不能提供病毒的数量，因此，HBV感染患者应进一步做血清HBV-DNA含量检测，这样对乙肝的早期诊断、治疗方案的制定，尤其对抗病毒药物治疗的疗效观察具有重要的临床意义。
参考文献
[1]张复春、吴婉芬、董惠卿等.定量聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA及其临床应用.中华传染病杂志，1997,15,24-27.
[2]王添章、张宜俊、刘树人等.慢性HBV感染者血清中的HBV-DNA与HBVeAg量的关系及其临床意义检验医学，2004,19,71-72.