张秀莉1张琦2
（1吉林省白山市江源区石人镇中心卫生院134707）
（2吉林省白山市江源区江源社区卫生服务中心134700）
【摘要】目的建立川贝母生物碱含量的高效液相色谱检测方法并探讨其临床应用。方法采用HPLC-ELSD法检测川贝母的生物碱含量，流动相为乙腈:水:NH4HCO3，结果贝母甲素在1.05-3.78μg范围内与峰面积线性关系良好，样品回收率为99.12%，RSD为1.37%，贝母乙素在0.87-4.12μg范围内与峰面积线性关系良好，样品回收率为98.27%，RSD为1.19%。结论HPLC-ELSD法检测川贝母的两种生物碱含量灵敏度高、专属性强、线性关系良好，适用于川贝母的生物碱测定及质量控制。
【关键词】川贝母生物碱高效液相色谱法含量测定
【中图分类号】R97【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）31-0113-02
川贝母是贝母家族中按照产地分类的专有名词，野生川贝母主要生长于海拔3000米以上的高寒地区，生长地土壤一般较湿润，现今主要分布于四川西南部、云南西北部和西藏南部等地区，受生长环境限制其产量较低，是润肺止咳的名贵中药材，其不仅具有良好的止咳化痰功效，而且能养肺阴、宣肺、润肺而清肺热，因此常用于治疗急性气管炎、支气管炎、肺结核等病症[1]；川贝母的主要有效成为为贝母类生物碱，此类生物碱多为异甾体生物碱，无明显的紫外吸收，为此检测此类生物碱多采用波层色谱或是柱前衍生高效液相色谱法，本文将HPLC-ELSD法用于检测川贝母的生物碱含量，取得了满意的效果，现报告如下：
1材料与方法
1.1仪器与试剂采用岛津LC-2900型高效液相色谱仪，联合ELSD检测器，流动相为乙腈-水-NH4HCO3，用浓氨水将流动相pH调至10.0-11.0之间，流速控制在0.8-1.0ml/min，温度控制在40℃左右，每次进样10μl，检测器漂移温度控制在90℃，N2压力控制在0.12MPa，乙腈、碳酸氢钠、浓氨水等均购自上海化学试剂有限公司，均为分析纯，贝母甲素及贝母乙素购自中国药品生物制品检定所，贝母甲素的批号为201210289，贝母乙素的批号为201205664，川贝母药材购自亳州中药材市场。
1.2样品及对照品溶液制备取适量川贝母干燥粉末过80目筛，精密称取2g后加氨水80ml，氨水浸泡60min后，加入50ml氯仿80℃水浴回流3h，滤过取25ml后挥干，过滤所得残渣用氯仿5ml溶解后过滤，将过滤液再次挥干后一并加入容量瓶中，加入5ml氯仿溶解备用。精密称取贝母甲素和贝母乙素对照品，加氯仿制成每1ml含0.300mg贝母甲素和0.400mg贝母乙素的对照品溶液。
1.3检测方法取贝母甲素和贝母乙素对照品溶液建立标准曲线，并获得线性关系良好的回归方程，随后进行稳定性、重复性、精密性及加样回收率实验，进行系统适应性和方法学考察。
2结果
2.1线性关系考察精密称取贝母甲素和贝母乙素的对照品，加氯仿制成每1ml含0.300mg贝母甲素和0.400mg贝母乙素的对照品溶液。对照品溶液按照5、10、15μl依次递增进样，采用外标法对两种生物碱对照品峰面积(y)与进样量(x)做线性回归处理，得回归方程见表1。
表1两种生物碱线性回归方程
2.2重现性和精密度试验取样品溶液按照10μl进样，贝母甲素的含量为0.0316%，RSD为1.32%，贝母乙素的含量为0.0146%，RSD为1.71%；取对照品溶液每次进样10μl，重复进样5次，贝母甲素峰面积积分值RSD为1.29%，贝母乙素的峰面积积分值RSD为1.56%；由此可见，HPLC-ELSD法检测川贝母的贝母甲素和贝母乙素的重现性和精密度良好。
2.3回收率实验精密称取已知含贝母甲素0.0316%和贝母乙素0.0146%的样品溶液，加入含贝母甲素1.0mg/ml和贝母乙素1.5mg/ml的对照品溶液，将对照品和样品溶液混匀后进样10μl，检测含量并计算回收率，贝母甲素的回收率为99.12%，RSD为1.37%，贝母乙素的回收率为98.27%，RSD为1.19%。
3讨论
川贝母中主要的有效成为为生物碱，其中最为常见的为贝母甲素和贝母乙素，以上两种生物碱均为异甾体生物碱，紫外吸收不明显，传统的紫外检测器造成的误差大，因此要检测川贝母中生物碱含量多采用波层色谱法，或是柱前衍生高效液相色谱法，薄层色谱法检测精度不足，柱前衍生法操作繁琐[2]，为此本文将近年来应用广泛的HPLC-ELSD法应用于检测中，从实验结果看，该检测方法线性关系良好，重现性、精密度及回收率均符合检测要求，是一种较为适宜的川贝母质量控制检测手段，值得推广应用。
参考文献:
[1]张培培，周勤梅，秦波，等.川贝母栽培品瓦布贝母与松贝母的总生物碱对比研究[J].成都中医药大学学报，2011,34(1):70-72.
[2]段宝忠，王丽芝，黄林芳，等.川贝母新资源太白贝母中生物碱类成分含量测定[J].中国药学杂志，2011,46(5):382-384.