中华鳖il21和il22 cDNA的克隆及急性冷胁迫对部分细胞因子表达的影响

论文摘要

为了研究急性冷胁迫对中华鳖部分细胞因子表达的影响,本论文首先采用cDNA末端快速扩增技术克隆了中华鳖il21和il22的cDNA并进行了生物信息学分析,其次对il21和il22进行了组织表达模式分析,并从体外以LPS、ConA和poly I:C等免疫刺激剂刺激中华鳖脾脏原代细胞后,检测了il21和il22的表达情况,最后研究了中华鳖在急性冷胁迫以及嗜水气单胞菌胁迫的条件下,脾脏和肠道中的il1β、tnfα、il8、il21、il22和il23a等细胞因子在mRNA水平的应答情况。实验结果如下:1.中华鳖il21和il22 cDNA克隆及生物信息学分析克隆得到的中华鳖il21基因cDNA长为874 bp,ORF长为408 bp,编码135个氨基酸。二级结构主要包括α螺旋、延伸链、无规则卷曲和β转角,三级结构包括信号肽和IL15结构域(IL15家族成员)。系统进化分析表明其与鸟类首先聚类,其次为哺乳类。中华鳖il22 cDNA长度为2263 bp,ORF长度为624 bp,编码207个氨基酸,二级结构也主要包括α螺旋、延伸链、无规则卷曲和β转角,三级结构包括信号肽、跨膜结构域和IL22结构域(IL10家族成员),系统进化分析表明其与其他爬行类首先聚类,其次为鸟类。2.中华鳖il21和il22的组织分布图式及原代免疫细胞经免疫刺激后表达情况研究组织表达图式分析显示il21和il22均在在中华鳖脾脏内有较高表达水平,其中il21在脑及肠道也有较高水平的表达,而il22在脑及肠道表达水平较低。脾脏细胞在ConA刺激后的3h(p=0.0022)、6h(p=0.0022)、12h(p=0.0022)和24h(p=0.0043)会极显著上调il21的表达,且il21在3h的表达最高;脾脏细胞在ConA刺激后的6h(p=0.0043)、12h(p=0.0152)和24h(p=0.043)会极显著下调il22的表达。3.急性冷胁迫对中华鳖部分细胞因子在免疫应答中表达的影响常温嗜水气单胞菌组的肠道il22 mRNA水平呈现先升高后降低的趋势,在24h表达最高,冷胁迫嗜水气单胞菌组的肠道il22 mRNA水平呈现逐渐升高的趋势,在72h表达最高。冷胁迫嗜水气单胞菌组的脾脏il23a mRNA水平呈现先逐渐降低再升高的趋势,在攻毒后的12h表达最高,而在常温组中,il23a mRNA升高后降低,再次升高,并在攻毒后的72h表达最高。在急性冷胁迫早期,肠道和脾脏细胞因子(il1β、tnfα和il8)的表达与常温组相比有所降低,后期肠道的il1β、il8和tnfα在冷胁迫后24h的表达升高,脾脏的il1β和il8在冷胁迫后12h、tnfα在冷胁迫后24h的表达升高。综合以上研究结果,得出如下结论:1.通过cDNA末端快速扩增技术克隆得到了中华鳖il21和il22 cDNA序列,从生物信息学分析可知我们获得序列为中华鳖il21和il22 cDNA,为深入研究中华鳖IL21和IL22及相关通路奠定了基础。2.免疫刺激剂ConA显著增强了il21在脾脏细胞的表达,显著减弱了il22在脾脏细胞的表达。il21和il22都参与ConA介导的T细胞免疫应答,具体功能有待进一步研究。3.急性冷胁迫对中华鳖细胞因子应对嗜水气单胞菌的免疫应答造成影响,总体表现为“应答延迟”。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 范勇

导师: 张左兵,王兰

关键词: 中华鳖,白细胞介素,急性冷胁迫,免疫刺激剂,嗜水气单胞菌

来源: 山西大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,水产和渔业

单位: 山西大学

分类号: Q78;S917.4

DOI: 10.27284/d.cnki.gsxiu.2019.000420

总页数: 82

文件大小: 6601K

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