导读:本文包含了羧肽酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:肽酶,酵母,高效,基因,支气管哮喘,抑制剂,宫颈癌。
羧肽酶论文文献综述
刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中[1]（2019）在《羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化》一文中研究指出根据Gen Bank上公布的Latexin基因核酸序列设计并合成引物,用RT-PCR方法扩增出Latexin基因,并将其克隆到T载体,转化构建到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-Latexin。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,并进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果表明:所得重组蛋白大小约32 ku,以可溶形式存在,且该蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。(本文来源于《上海农业学报》期刊2019年05期）
熊科,支慧伟,王小艺,赵峙尧,柳佳芸[2]（2019）在《黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化》一文中研究指出黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28℃,诱导时间20 h。粗酶液经镍柱纯化后得到解毒能力达30.03μg/mg的电泳级重组羧肽酶。之后,采用AB-8大孔树脂作为吸附载体,戊二醛为交联剂对酶进行复合固定化,得到最优固定化条件为吸附时间12 h、吸附温度37℃、戊二醛质量分数0.35%、交联时间1 h、交联温度25℃。固定化酶与游离酶相比,酶对底物的亲和力虽有所下降,但酶促反应最大速度(Vmax)没有显着下降,催化效率基本一致,表明对该酶进行吸附-交联复合固定化效果良好。对固定化前、后酶的二级结构的研究表明:酶经固定化后,α螺旋和无规则卷曲的含量有所上升,β折叠显著下降,β转角变化不明显。这说明酶经固定化后,部分β折叠链内氢键断裂,转变成为无规则结构或α螺旋结构,导致固定化酶对底物的亲和力较之前有所下降,而其Vmax与游离态酶基本一致,因此固定化酶与游离态酶的催化效率基本一致。本研究为羧肽酶降解OTA在工业上的固定化应用奠定了基础。(本文来源于《中国食品学报》期刊2019年05期）
李晶,张慧敏,李书良[3]（2018）在《羧肽酶E在胃癌组织中的表达及临床意义》一文中研究指出目的探讨羧肽酶E(CPE)在胃癌组织中表达及其临床意义。方法选择2010年1月至2011年12月在焦作煤业集团责任有限公司中央医院择期行手术治疗的胃癌患者76例,留取胃癌及癌旁正常组织,免疫组织化学检测胃癌及癌旁正常组织中CPE蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌及癌旁正常组织中CPE mRNA表达,利用Kaplan-Meier法对胃癌组织中CPE表达与患者生存时间的关系进行分析。结果胃癌组织和癌旁正常组织中CPE蛋白阳性表达率分别为80. 3%(61/76)和36. 8%(28/76),胃癌组织中CPE蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织(χ~2=37. 112,P <0. 05)。胃癌组织和癌旁正常组织中CPE mRNA相对表达量分别为2. 07±0. 18和1. 39±0. 14,胃癌组织中CPE mRNA相对表达量显着高于癌旁正常组织(t=25. 981,P <0. 05)。胃癌组织中CPE mRNA相对表达量与TNM分期、淋巴结转移、浆膜浸润、血管侵犯、远处转移有关(P <0. 05)。Kaplan-Meier生存分析显示,低表达组患者平均生存时间为(48. 9±3. 6)个月,总生存率为57. 9%;高表达组患者平均生存时间为(34. 7±2. 7)个月,总生存率为35. 1%;低表达组患者总生存率高于高表达组(χ~2=4. 171,P <0. 05)。结论胃癌组织中CPE呈高表达,其与胃癌发生、发展及不良预后有关,可作为判定患者预后的潜在指标。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2018年12期）
钱希逸,朱斐[4]（2018）在《拟穴青蟹羧肽酶B基因在先天性抗病免疫中的作用机理》一文中研究指出羧肽酶B(Carboxypeptidase B,CPB)是竣肽酶的一种,它是含锌的外分泌蛋白,能切多肽羧基末端的赖氨酸或精氨酸。但还没有在虾蟹类甲壳动物中研究羧肽酶B的作用及作用机理。本研究克隆了一条在拟穴青蟹(Scylla Paramamosain)肝胰腺中特异表达的竣肽酶B(Carboxypeptidase B,CPB)基因,研究了拟穴青蟹在感染白斑综合征病毒(White spot syndrome virus,WSSV)或溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)时,CPB基因所发挥的免疫功能。羧肽酶B的cDNA序列全长为2316bp,软件分析显示该基因的开放阅读框大小为1302bp,编码一个含有434个氨基酸残基的蛋白,蛋白质的相对分子质量为48.514 kDa,pI为8.494。氨基酸序列比对和进化树分析显示CPB基因主要存在于甲壳动物中,其中在拟穴青蟹中发现的CPB基因与端足虫(Hyalella azteca)亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测结果显示,CPB基因在肝胰腺中的表达最高,而在血淋巴、鳃、肌肉、肠、心等组织内表达量较低。利用double-strand RNA(dsRNA)干扰技术成功地抑制CPB基因的表达,而在CPB基因被沉默后,拟穴青蟹的多个免疫基因受到影响,如Janus Kinase(JAK)、Signal transducers and activators of transcription(STAT)、C-type lectin、crustin antimicrobial peptid(CAP)、Tolllike receptor(TLR)、(prophenoloxidase)proPO、myosinⅡessential light chain-like protein(MELCLP)基因的表达显着下调。免疫活性指标检测试验显示,在抑制了CPB基因的表达后,青蟹血细胞总数上升,酚氧化酶(PO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性增强。进一步研究发现,在感染溶藻弧菌后,CPB基因的表达明显下调。在感染WSSV后,CPB基因的表达也明显下调。WSSV拷贝数试验结果显示在CPB基因被敲除后,拟穴青蟹体内WSSV拷贝数显着降低。抑制CPB基因的表达后,凋亡试验显示拟穴青蟹血细胞的凋亡率显着降低。结果说明拟穴青蟹CPB基因可以诱导细胞凋亡,而WSSV有可能通过抑制CPB基因的表达来刺激细胞凋亡。本文首次揭示了CPB在拟穴青蟹病毒感染中有着重要作用,为研究拟穴青蟹的先天性免疫和WSSV感染宿主的机制提供了重要的理论依据。(本文来源于《浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会论文汇编》期刊2018-11-16）
齐红,朴金霞,吴春娇,刘彦玲,刘玉侠[5]（2018）在《羧肽酶E蛋白CPE△N在人宫颈癌中的表达及相关性研究》一文中研究指出目的探讨羧肽酶E蛋白CPE△N在人宫颈癌中的表达及相关性,评估其作为肿瘤预后标志物的可能性,为肿瘤的个体化治疗提供相应指南。方法应用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测分析CPE△N在35例宫颈癌患者瘤组织中的表达水平,并对35例宫颈癌患者CPE△N高表达与肿瘤两年内复发和淋巴结转移进行相关性比较。结果 CPE△N在宫颈癌组织中呈高表达,35例患者肿瘤组织中CPE△N mRNA/18sRNA平均比值为2.01±0.65显着高于远瘤区的正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);同时其表达情况与肿瘤复发及淋巴结转移呈正相关性(P<0.05)。结论 CPE△N的高表达是宫颈癌患者一个独立的预后因素,极有可能作为宫颈癌患者预后评价的潜在生物标志物。(本文来源于《中国妇幼保健》期刊2018年17期）
张欢欢[6]（2018）在《在毕赤酵母中过量表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y》一文中研究指出羧肽酶是一类从肽链的羧基端降解氨基酸残基的外肽酶,有广泛的底物特异性。与其它羧肽酶相比,羧肽酶Y不含有金属离子,对于其它羧肽酶难以降解的脯氨酸残基也表现出活性。羧肽酶Y在多肽链氨基酸测序、质谱分析、蛋白水解物的脱苦等领域有着广泛的应用。目前研究的比较充分是来源于酿酒酵母的羧肽酶Y,对于其它物种特别是来源于丝状真菌的羧肽酶Y研究较少。本实验室从雅致放射毛霉基因组中调取得到一种新型羧肽酶Y基因,成功在毕赤酵母中实现了分泌表达,但是表达量较低。本文通过选择合适的启动子、构建双质粒整合菌株、共表达分泌促进因子的方法实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中高效分泌表达,并且成功在体外用蛋白酶K实现了对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活。主要研究成果包括:(1)分别构建含有AOX1启动子和GAP启动子的雅致放射毛霉羧肽酶Y表达重组菌,通过提高抗生素浓度的筛选方法,筛选得到高效表达重组菌Zα-600-1,经甲醇诱导后胞外总蛋白的含量达到了275±20 mg·L~(-1)。(2)在得到的高效表达重组菌Zα-600-1基础的上,构建双质粒整合菌株Zα-600-1+9K和Zα-600-1+GAP,通过提高抗生素浓度筛选重组菌,得到的高效表达重组菌分别将雅致放射毛霉羧肽酶Y的分泌表达量提高到重组菌Zα-600-1的1.51倍和1.47倍。(3)在高拷贝数的重组菌株中共表达分泌促进因子BIP(Binding protein)、PDI(Protein disulfide isomerase)、ERO1(Endoplasmic oxidoreductin 1),将雅致放射羧肽酶Y酶原的分泌表达量分别提高到重组菌Zα-600-1的1.87倍、1.76倍、1.26倍,其中分泌效果最佳的重组菌经甲醇诱导后,胞外总蛋白的分泌量达到了525±15 mg·L~(-1)。(4)成功在体外用蛋白酶K对雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原进行了激活,找到了一种新的雅致放射毛霉羧肽酶Y酶原的激活方式。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
单雨瑶[7]（2018）在《羧肽酶Y的酵母异源表达及其在固相酶法肽合成中的应用》一文中研究指出本文将酶法与化学法有机地结合起来,通过对制备条件的优化,开发出一种兼具两方面优点的多肽合成新方法。首先利用基因工程技术构建毕赤酵母工程菌,发酵得到重组羧肽酶Y。再利用液相酶法合成二肽前体的反应,摸索酶催化最佳反应条件,建立相应的动力学模型。最后,创新性地采用固相酶法合成模型二肽,并利用液相色谱、质谱等多种手段进行表征,扩大了酶在肽合成领域的应用范围。主要结论如下:(1)米曲霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的表达:利用分子生物学技术,将米曲霉RIB40的羧肽酶Y基因转化入毕赤酵母GS115菌株中并进行诱导表达,纯化后测定酶活为90.379 U/mg。通过考察不同发酵条件对工程菌发酵后的OD_(600)值和酶活的影响,得到最佳摇瓶发酵条件为:甲醇浓度为1.0%,摇床转速250rpm,pH 6.0,温度28℃,添加葡萄糖至终浓度4mg/mL。最终能够得到最大OD_(600)值为39.65,酶活为89.53 U/mL,比优化前分别提高了56.72%和56.03%。(2)液相体系中酶促合成二肽前体BOC-Tyr-Ala:羧肽酶Y催化合成活性二肽前体,对反应参数进行单因素优化,得到最优反应条件如下:30oC,pH9.5,有机相(甲醇)/水相(v/v)=1:20,反应物BOC-Tyr-OMe浓度0.05 mol/L,Ala 0.5 mol/L,加酶量1 mL,同时添加电解质KCl至终浓度0.1 mol/L,反应时间12 h。最高收率为49.84%。根据反应机理和实验数据建立了动力学模型,符合米-曼氏方程的经典形式,双倒数曲线作图,R~2=0.9960,得到表观米氏常数K_m~(app)=2.9946′10~(-2)mol/L,表观最大反应速率常数r_(max)~(app)=2.0406′10~(-2)mmol/(mL×h)(3)固相酶法合成活性抗氧化二肽Tyr-Ala:固相酶法成功合成了活性抗氧化二肽Tyr-Ala,并以产品收率为考察指标,得到最优反应条件如下:1.8 g Boc-Tyr(Wang Resin)-OMe,0.8 mol/L Ala溶液,液相/固相比例为8 mL/g,温度30oC,pH 9.5,反应时间30 h。产物最大收率为77.92%,纯度达到90.97%。经测试,Tyr-Ala的抗氧化活性要强于传统的抗氧化剂GSH。(本文来源于《天津大学》期刊2018-05-01）
郭强[8]（2018）在《血清肥大细胞羧肽酶与支气管哮喘的相关性研究》一文中研究指出目的通过检测支气管哮喘患者外周血MC-CP的含量,研究其与支气管哮喘患者肺功能、免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,IgE)、呼气一氧化氮(Fractional Exhaled Nitric Oxide,FENO)的关系,探讨MC-CP在支气管哮喘发病机制中的作用。方法选择于吉林大学第一医院治疗的70例明确诊断为支气管哮喘患者作为实验组,均给予布地奈德混悬液2mg~+沙丁胺醇0.4mg~+异丙托溴铵2.5ml雾化吸入(每8小时1次)、多索茶碱0.3g,2次/日,静脉滴注治疗,同时给予孟鲁司特钠片10mg,1次/日晚20点口服,治疗时长为1周,出院后继续雾化吸入布地奈德福莫特罗粉吸入剂160微克/4.5微克/吸,2次/日,联合雾化吸入噻托溴铵1吸(18微克),1次/日晚8点吸入,上述治疗维持3个月,于门诊复查肺功能及血清MC-CP水平。另外,将实验组患者按照血清IgE的水平分为IgE正常组(n=23)和IgE升高组(n=47)。选取于我院体检健康者21名作为对照组,采用ELISA法检测受试者血清MC-CP水平。支气管哮喘患者急性发作期及临床缓解期均需要检测血清MC-CP、肺功能、FENO,从而比较健康对照组与实验组(包括急性发作期与临床缓解期)患者血清MC-CP的水平,及MC-CP与肺功能和FENO的相关性。结果1、病例组支气管哮喘患者在临床缓解期其MC-CP、FENO水平明显低于急性发作期(P<0.05),而高于健康对照组(P<0.05);而FEV1水平在临床缓解期明显优于急性发作期,与对照组无明显差别(P=0.281)。2、无论是支气管哮喘急性发作期还是临床缓解期IgE升高组患者血清MC-CP水平明显高于IgE正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、病例组患者支气管哮喘急性发作期血清MC-CP与FEV 1(%)呈明显的负相关(r=-0.426,P<0.001),而临床缓解期无相关性(r=-0.221,P=0.066);病例组患者无论是支气管哮喘急性发作期还是临床缓解期血清MC-CP与FENO均无相关性(r=0.054,P=0.659;r=.137,P=0.257)。4、无论是IgE升高组还是IgE正常组支气管哮喘急性发作期患者血清MC-CP均与FEV1呈明显负相关性(r=-0.429,P=0.004,r=-0.,613,P=0.001);支气管哮喘急性发作期患者IgE正常组血清MC-CP与FENO呈明显正相关性(r=0.412,P=0.033),而在IgE升高组无相关性(r=-0.265,P=0.086)。结论1、支气管哮喘患急性发作期血清MC-CP的表达水平与健康对照组相比明显升高,且实验组IgE升高组患者血清MC-CP的表达水平较IgE正常组明显升高,这提示我们MC-CP可能作为炎性介质参与了支气管哮喘的免疫-炎症反应过程;2、支气管哮喘临床缓解期患者血清MC-CP水平仍明显高于健康对照组,提示支气管哮喘患者在临床缓解期体内仍存在一定水平的炎症反应;3、支气管哮喘急性发作期患者血清MC-CP的表达水平与FEV1%pred存在负相关关系。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-05-01）
马婉莹[9]（2018）在《超声对羧肽酶G2活性的双相调节》一文中研究指出背景:“酶-前药”体系为一种肿瘤靶向治疗手段,其可使无细胞毒性的前药分子在肿瘤组织内转化为细胞毒分子而损伤肿瘤细胞。羧肽酶G2(CPG2)因在人体内无同工酶而在前药治疗中受到推崇,其理论上具有更高的安全性。活性药物分子生成的量、速率是“酶-前药”治疗安全性和有效性的关键。但如何控制CPG2活性,从而调节活性药物分子的生成量迄今无满意策略。目的:探讨超声对CPG2活性的影响及特点,并阐明其生化和物理机制。方法:1、使用不同剂量超声处理CPG2,观察活性变化;据此确定用于生化、物理机制探讨之超声剂量(L1、L2、L3),L1致酶活性升高,L2致酶活性降低<50%,L3致酶完全灭活。2、检测L1、L2、L3处理后CPG2的K_m、V_(max);探讨酶活性改变的可逆性。3、探讨超声调控CPG2活性的生化机制。用SDS-PAGE、PR-HPLC、MS分析酶蛋白单体结构,SEC-HPLC测定二聚体,CD分析二级结构,同步荧光检测酶蛋白构象变化。4、探讨超声调控CPG2活性的物理机制。检测超声作用时溶液温度的变化(热效应)以及自由基水平(空化效应)。结果:1、当声强为10 W/cm~2,辐照时间<400 s,酶活性增加;辐照时间700?2000 s,酶活性降低表现为零级动力学特征。当声强为20 W/cm~2,辐照时间<1000 s,酶活性降低表现为零级动力学特征;辐照时间>1200s,酶活性降低表现为一级动力学特征。L1(10 W/cm~2,200 s)、L2(20W/cm~2,1200 s)、L3(20 W/cm~2,3000 s)处理后CPG2相对活性分别为1.11、0.37、0.05。2、10 W/cm~2引起的酶活性增加、降低是可逆的;20 W/cm~2引起的酶活性降低不可逆。3、L1提高酶活性系通过提高比活性实现。L2、L3致二聚体解聚、单体降解、酶蛋白糖基化和构象改变。4、超声辐照未引起酶溶液温度的明显上升;超声辐照后溶液中自由基含量明显升高,呈声强、辐照时间依赖性,提示空化水平升高。结论:超声可双相调节CPG2活性。酶活性增加系通过提高比活性而实现,酶活性降低为多因素作用。超声对CPG2活性的影响系通过空化效应介导。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2018-05-01）
张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏[10]（2018）在《雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达》一文中研究指出分别构建以2种启动子表达雅致放射毛霉羧肽酶Y的重组毕赤酵母菌株GS115,通过提高抗生素浓度筛选到具有不同拷贝数羧肽酶Y基因的重组菌株,通过对蛋白表达量的比较筛选出高效分泌表达菌株。在筛选得到的重组菌株中共表达伴侣蛋白binding protein(BIP)、protein disulfide isomerase(PDI)、endoplasmic oxidoreductin 1(ERO1),分别将羧肽酶Y酶原的分泌表达量提高到1. 87倍、1. 72倍和1. 26倍。体外羧肽酶Y酶原可以由胰蛋白酶激活。该研究实现了雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达,为其工业化应用提供了技术支持。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2018年11期）
羧肽酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28℃,诱导时间20 h。粗酶液经镍柱纯化后得到解毒能力达30.03μg/mg的电泳级重组羧肽酶。之后,采用AB-8大孔树脂作为吸附载体,戊二醛为交联剂对酶进行复合固定化,得到最优固定化条件为吸附时间12 h、吸附温度37℃、戊二醛质量分数0.35%、交联时间1 h、交联温度25℃。固定化酶与游离酶相比,酶对底物的亲和力虽有所下降,但酶促反应最大速度(Vmax)没有显着下降,催化效率基本一致,表明对该酶进行吸附-交联复合固定化效果良好。对固定化前、后酶的二级结构的研究表明:酶经固定化后,α螺旋和无规则卷曲的含量有所上升,β折叠显著下降,β转角变化不明显。这说明酶经固定化后,部分β折叠链内氢键断裂,转变成为无规则结构或α螺旋结构,导致固定化酶对底物的亲和力较之前有所下降,而其Vmax与游离态酶基本一致,因此固定化酶与游离态酶的催化效率基本一致。本研究为羧肽酶降解OTA在工业上的固定化应用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
羧肽酶论文参考文献
[1].刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中.羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化[J].上海农业学报.2019
[2].熊科,支慧伟,王小艺,赵峙尧,柳佳芸.黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化[J].中国食品学报.2019
[3].李晶,张慧敏,李书良.羧肽酶E在胃癌组织中的表达及临床意义[J].新乡医学院学报.2018
[4].钱希逸,朱斐.拟穴青蟹羧肽酶B基因在先天性抗病免疫中的作用机理[C].浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会论文汇编.2018
[5].齐红,朴金霞,吴春娇,刘彦玲,刘玉侠.羧肽酶E蛋白CPE△N在人宫颈癌中的表达及相关性研究[J].中国妇幼保健.2018
[6].张欢欢.在毕赤酵母中过量表达来源于雅致放射毛霉的羧肽酶Y[D].江南大学.2018
[7].单雨瑶.羧肽酶Y的酵母异源表达及其在固相酶法肽合成中的应用[D].天津大学.2018
[8].郭强.血清肥大细胞羧肽酶与支气管哮喘的相关性研究[D].吉林大学.2018
[9].马婉莹.超声对羧肽酶G2活性的双相调节[D].重庆医科大学.2018
[10].张欢欢,陈昶旭,刘中美,周哲敏.雅致放射毛霉羧肽酶Y在毕赤酵母中的高效分泌表达[J].食品与发酵工业.2018
论文知识图
