曾润铭[1]2004年在《RANKL诱导类风湿性关节炎滑膜CD68阳性细胞分化为破骨细胞的实验研究》文中指出目的 观察在核因子κ B受体活化子配体(RANKL)的作用下，类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)滑膜CD68~+细胞在体外分化的特性，探讨RA滑膜CD68~+细胞与前体破骨细胞的关系。 材料和方法 1．取6例RA和6例正常关节的滑膜组织，胶原酶消化法获得滑膜细胞，用免疫磁珠法筛选滑膜CD68~+和CD68~-细胞。流式细胞仪检测筛选效能；CD68抗体免疫组化染色观察RA和正常关节滑膜组织筛选前后滑膜CD68~+细胞所占比例。MTT法观察筛选后细胞增殖活性。 2．将筛选获得的RA和正常滑膜CD68~+和CD68~-细胞分别直接用外源性的RANKL诱导分化，用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、降钙素受体免疫荧光检测、骨吸收陷窝形成等方法鉴定诱导分化后的滑膜细胞。 3．在RA滑膜CD68~+细胞培养液中加入0ng／ml到8ng／ml不同梯度浓度的RANKL，观察不同浓度RANKL对RA滑膜CD68~+细胞分化的影响。 结果 1．免疫组化染色结果表明筛选前RA滑膜CD68~+细胞比例较正常滑膜CD68~+细胞高(P＜0.01)，经免疫磁珠法筛选获得滑膜CD68~+细胞纯度为93.6％。各组细胞筛选后体外均有增殖活性。 2．RANKL在体外对正常关节滑膜CD68~+细胞、CD68~-细胞和RA滑膜CD68~-细胞无诱导作用，降钙素受体染色阴性、TRAP染色阴性、无 骨吸收陷窝形成。RA滑膜CD68+细胞在RANKL诱导后7d，RA滑 膜CD68十细胞降钙素受体染色阳性、TRAP染色阳性，且有明显骨吸 收陷窝形成。3.体外RANKL影响RA滑膜CD68+细胞分化功能。在培养液中RANKL 浓度Ong/ml组和ing/m1组，骨片无骨吸收陷窝形成。RANKL浓度 为4ng/nil组，骨吸收陷窝面积为509.73*84.58林mZ，与Zng/ml组相 比311.32士54.3一林扩，具有显着差异(P<0.05)。sng/ml组骨吸收陷窝 面积为676.05*92.58林mZ，与4ng/m一组相比具有显着差异(P<0.05)。结论1.RA滑膜CD68+细胞是前体破骨细胞的来源。2.RANKL在体外可以诱导RA滑膜CD68+细胞分化为破骨细胞。
尚鹏[2]2005年在《RANK、RANKL和OPG在关节炎中的表达及意义》文中提出骨保护素(osteoprotegerin,OPG)和核因子NF—κB受体激活剂(receptor activator of nuclear factor—κB,RANK)及其配体(receptor activator of nuclear factor—κB ligand,RANKL)是近年来发现的与骨吸收和重建密切相关的细胞因子,在关节炎骨破坏中起重要作用。RANKL和RANK结合可促进破骨细胞(osteoclast,OC)及其前体细胞分化成熟和活化;而OPG可阻断此过程而抑制RANKL介导的OC分化,从而减少骨质损害。 研究目的:本课题以骨关节炎(osteoarthritis,OA)和健康者为对照,通过观察类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者滑膜、滑液和外周血中RANK、RANKL和OPG的表达、分布及与骨破坏的关系。进一步阐明RANK、RANKL和OPG系统在RA和AS关节骨侵蚀发生机制中的中心作用,为临床早发现、早评价骨破坏程度,早使用OPG预防骨破坏提供理论依据。 研究对象和方法:共采集标本30例(RA、AS、OA各10例)膝或髋关节滑膜、滑液,治疗前后外周血以及患者一般病情资料,包括病史、实验室检查和影像学检查。同期采集健康者外周血10例。 ①采用苏木精—伊红(haematoxyllin-eosin,HE)和抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色比较RA、AS和OA滑膜组织病理学特点、OC及其前体细胞在滑膜中的表达和分布;②免疫印迹法检测RANKL和OPG蛋白在RA和AS滑膜组织和滑液细胞的表
杜斌[3]2010年在《骨水泥型人工髋关节置换后假体柄松动的机制及淫羊藿苷对微粒诱导骨吸收的干预研究》文中认为目的：通过对骨水泥型人工髋关节置换后翻修中取出的带骨水泥外壳的假体柄以及对有良好功能的骨水泥型髋关节假体患者尸体标本研究,探讨骨水泥型人工髋关节置换术后假体柄松动的机制。通过淫羊藿苷对磨损微粒诱导的骨吸收模型的干预,验证淫羊藿苷对人工关节松动的防治作用。方法：临床标本研究：36例髋关节翻修手术中取出的骨水泥型假体柄及完整的骨水泥外壳,其中A组24例为无菌性松动标本B组12例为非无菌性松动标本。利用立体光学显微镜对骨水泥外壳内外两面及假体柄进行观察分析,按照Grone分区记录骨水泥外壳内外两面磨损位置及磨损程度和骨水泥开裂区域,以及与其相匹配的假体柄的磨损位置及磨损程度。尸体标本研究：18例带有骨水泥假体柄的股骨标本在假体柄下3cm处切断股骨,将标本用茜蓝素染色后。用电锯沿股骨失状面两侧对称剖开,首先在显微镜下测量假体柄与骨水泥间隙,取出假体柄后,显微镜下观测骨水泥内面的开裂和磨损情况。用instrumented microscope system在叁个等距离位置测量骨水泥开裂的宽度。同时记录假体柄磨损情况,按Gruen分区记录。中药防治研究：本实验为小鼠体内动物实验,共分9组,每组6只。将钛合金及骨水泥磨损碎屑制成的混悬液分别置入清洁小鼠颅盖骨进行骨吸收建模后,药物干预组,将不同浓度的淫羊藿苷(剂量分别为30mg/kg、60mg/kg、120mg/kg)分别给建模后小鼠灌胃,每日1次。建模两周后处死小鼠,开始在显微镜下观察小鼠颅盖骨的结构。经HE染色和免疫组化分析后,计算干预后破骨细胞数量和小鼠卤盖骨吸收面积的变化,并与对照组对比。经统计处理后,分析中药淫羊藿苷在干预磨损微粒诱导的骨吸收方面的效果。结果：临床标本研究：36例标本中,除2例外所有假体柄及与其相匹配的骨水泥内面都有磨损,与假体植入时间无明显关联性。因无菌性松动翻修取出的标本,其骨水泥外壳表面全部都有抛光区,只有1例非松动原因而翻修取出的标本,其骨水泥表面有抛光。根据骨水泥内面与假体柄间的磨损率大于其外壳表面磨损率,推测骨水泥与假体柄间的微动多于骨水泥在髓腔中的微动。24例无菌性松动翻修取出的标本中,有13例(54%)发生骨水泥开裂,而因其它原因翻修取出的标本无一例发生骨水泥开裂。尸体标本研究：几乎所有假体柄都从骨水泥外套中开脱,16例标本骨水泥内面都有轻微磨损,15例标本骨水泥内面有开裂,而开裂的位置大多在假体柄与骨水泥的转角处(87%,p=0.002)。没有一个假体柄下沉超过0.5mm.假体柄与骨水泥外套间裂隙平均宽度0.33±0.06mm.每一标本的骨水泥外套纵向开裂的平均宽度和假体柄与骨水泥外套间的裂隙平均宽度有非常密切相关(r2=0.691,p=0.001)。中药防治研究：钛(Ti)微粒和骨水泥(PMMA)微粒建模后的小鼠颅盖骨切片上的吸收陷窝数量及破骨细胞数比无任何处理组增加明显,图象分析陷窝面积也较大(P<0.05)。淫羊藿苷干预组比模型对照组的骨吸收面积及破骨细胞数量少(P<0.05),以120mg/kg灌胃组最为显着,其次是60mg/kg,30mg/kg。其中,模型组和ICA30mg/kg无显着性差异。钛微粒组和骨水泥微粒组之间比较无显着性差异结论：人工髋关节置换术后早期骨水泥开裂及骨水泥与假体柄间微动是骨水泥型假体柄普遍成在的特征。在临床成功的骨水泥型人工关节置换患者中,骨水泥开裂也是较常见的一种现象。骨水泥开裂一旦发生,假体柄就会出现微动。而骨水泥及柄的磨损产生的磨损微粒引起的骨溶解导致机械固定失效,进一步加速骨水泥表面及柄的磨损,最终导致假体无菌性松动。所以,开脱的骨水泥外壳疲劳性开裂是其无菌性松动的病理基础。早期的骨水泥开裂并不一定会导致假体无菌性松动,但随着微动产生的磨损微粒泵入骨床中而产生骨溶解,最终会导致假体固定失效,发生无菌性松动。钛(Ti)磨损微粒和骨水泥(PMMA)磨损微粒能促进破骨细胞的增殖,诱导骨质吸收。淫羊藿苷(ICA)能抑制磨损微粒诱导的破骨细胞的形成,从而抑制骨溶解,在防治人工关节无菌性松动方面具有重要意义。
参考文献：
[1]. RANKL诱导类风湿性关节炎滑膜CD68阳性细胞分化为破骨细胞的实验研究[D]. 曾润铭. 第一军医大学. 2004
[2]. RANK、RANKL和OPG在关节炎中的表达及意义[D]. 尚鹏. 第四军医大学. 2005
[3]. 骨水泥型人工髋关节置换后假体柄松动的机制及淫羊藿苷对微粒诱导骨吸收的干预研究[D]. 杜斌. 南京中医药大学. 2010
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