顾艳丽[1]2003年在《红景天提取工艺及其制剂的研究》文中研究指明本课题研究制备了红景天提取物和红景天提取物磷脂复合物，并对其制备工艺及其工艺优化进行了考察，在此基础上通过动物试验对其在体内分布动力学作了初步研究。迄今为止在国内外文献中尚未见到有关注射用红景天提取物和其磷脂复合物的制剂研究及体内研究报道。 本文建立了高效液相色谱(HPLC)分析方法测定红景苷在体外和体内的药物浓度，并以此为基础进行制剂及药动学研究。 在红景天提取工艺条件的研究中，针对影响提取工艺的溶剂，提取时间、提取次数等因素进行正交设计制定出合理的提取工艺。针对有效成分的性质，本论文尝试采用AB-8大孔树脂吸附柱层析、聚酰胺柱层析和超滤法对粗提物进行精制，使提取物中红景天苷含量大幅提高，杂质含量降低，在提高制剂澄明度和稳定性方面取得了良好的效果。进一步制备了注射用红景天(冻干粉针)和红景天提取物磷脂复合物乳剂，稳定性实验结果表明，制剂的质量稳定。 在优化红景天提取物磷脂复合物制备条件的系统研究中尝试制定了能合理、准确评价红景天提取物磷脂复合物制备条件的标准，并用其考察反应溶剂、红景天提取物与磷脂投料比、反应物浓度，反应时间及反应温度等影响因素，采用正交试验设计进行反应条件的优化；测定了红景天提取物磷脂复合物在不同pH水-正辛醇中的的表观油／水分配系数。 研究了尾静脉注射同等剂量红景天苷的注射用红景天(冻干粉针)及红景天提取物磷脂复合物乳剂在大鼠、小鼠血浆内红景天苷的药物动力学过程，后者在大鼠、小鼠体内血药浓度降低很快；对注射用红景天(冻干粉针)及红景天提取物磷脂复合物乳剂做小鼠的组织器官分布动力学研沈阳药科大学硕士学位论文 中文摘要 究，结果证实，红景天提取物磷脂复合物比红景天提取物的红景天昔脏器 中分布的浓度高，尤其注射红景天磷脂复合物的小鼠在心脏、脑中的红景 天昔浓度明显比注射红景天提取物的浓度高。
孟健[2]2004年在《注射用红景天的研究》文中认为中药红景天原载于《中华人民共和国药典》(一九七七年版一部)，具有清热解毒，燥湿的功能，原用于肺热，脉热，瘟病，四肢肿胀的治疗。现代药理学研究证明红景天具有活血化淤、抗心肌缺血作用，临床上已有复方红景天片、红景天胶囊用于冠心病、心绞痛的治疗，疗效确切、可靠、毒副作用小。以红景天药材为原料，采用现代科学技术手段，制成注射剂，无疑会增强其治疗效果，满足中医治疗急、重病症的需求。因此，本论文研究内容包括：(1)指标性成分分析方法的建立；(2)注射用红景天提取工艺研究；(3)红景天的安全性和药效学研究；(4)注射用红景天的制备和质量控制；(5)药材及制剂指纹图谱的建立。 采用简便而实用的TLC鉴别方法，对药材及制剂中指标性成分红景天苷和酪醇进行鉴别，其R_f值分别为0.351、0.574。在综合文献提供的研究方法基础上，分别采用高效液相色谱法和硫酸蒽酮显色反应法建立了两种指标性成分和多糖的含量测定方法，方法可靠，重现性好，为制剂研究和质量控制奠定了较好的基础。 由于中药成分复杂与作用多样性的特点，因此以红景天苷和酪醇为指标性成分，以二者总转移率为指标，对提取、纯化工艺进行优化。研究结果表明以水、50％乙醇、75％乙醇和85％乙醇为溶剂，红景天苷和酪醇的总转移率相近。单因素考察和正交试验结果表明提取时间、提取次数和溶剂用量为指标性成分转移率的影响因素。采用70％乙醇沉淀除杂，指标性成分的总转移率为90.12％，可有效去除蛋白质、草酸盐、树脂和钾离子等中药注射剂中常见的杂质；分别采用优化的碱性醇沉淀法、聚酰胺吸附法和明胶沉淀法除鞣质，结果叁种方法都能去除鞣质，但以明胶沉淀法最好，指标性成分保留率为93.09％，杂质去除率为42.05％。 特殊安全性试验结果表明按照优化的提取、精制所得药物安全性良好；通过对急性实验性心肌缺血大鼠和犬的治疗作用、对血小板聚集功能、血栓形成和血液粘度的影响的药效学研究可知静脉注射红景天的作用强度与复方丹参注射液相当，说明制备的注射用红景天中间体具有明显抗心肌缺
孟健, 王淑芬, 韩飞, 李叁鸣[3]2006年在《SPE-HPLC测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量》文中认为目的:测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量。方法:选用C18固相萃取小柱对样品进行纯化后用高效液相色谱法测定红景天苷和酪醇含量。Irregular-H C18柱(4.6 mm×250 mm,10μm),流动相甲醇-乙腈-0.06%磷酸(10∶10∶80),流速1.0 mL.min-1,检测波长275 nm,柱温30℃。结果:红景天苷在2.24~22.4μg、酪醇在0.856~8.56μg呈现良好的线性相关性,r分别为0.999 7,0.999 6,平均回收率分别为101.3%,99.8%。结论:本方法简便快捷,分离度好,结果准确可靠。
刘丽达, 王凯[4]2011年在《注射用红景天制备工艺的研究》文中研究说明目的:以红景天药材为原料,采用现代科学技术手段,制成冻干粉针剂。方法:以外观、成型性和复溶性为指标,优化冻干制剂处方和工艺,制备红景天冻干粉针剂。结果:以110mg/支甘露醇为赋形剂,-50℃预冻10h,抽真空,在-50℃时保温10h,最后升温至室温干燥,保持5h。制得的产品外形饱满、疏松,成型性好。结论:红景天冻干粉针剂的制备工艺稳定可行。
叶子[5]2006年在《红景天促血管生长作用与其组方的比较和机制的研究》文中研究表明冠心病的疾病负荷大，以急性心肌梗死为首发表现者，约1／3发生猝死。大部分冠心病患者采取积极的二级预防治疗可以改善预后。但是仍有部分患者对于常规药物治疗无效而又不适于介入治疗和搭桥手术。这时治疗性血管新生成为一种可能有效的替代手段。治疗性血管新生的重要组成部分之一是中药治疗。中药是我国传统医学重要组成部分，资源丰富。我们科以往对抗心肌缺血中药做了很多研究。我们对一批中药的促血管生长作用进行了比较，并从中筛选出以红景天为代表的5个具有显着促血管生长作用的药物。进一步研究红景天发现它能促使脐静脉内皮细胞的VEGF和FGF的表达增加，促进大鼠梗死心肌边缘的血管生长，VEGFR2表达增加，改善心功能和心室重构。虽然红景天等5味中药均具有促血管生长作用，那么将其组合后是否这种作用会进一步增强呢?红景天促血管生长是否只是通过VEGF和FGF起作用的?这种作用与哪条主要促血管生长的信号传导通路有关?在体内，红景天对梗死后心肌血管再生期的影响究竟是怎样进行的?为了对上述问题进行探讨，本研究首先采用鸡胚尿囊膜为研究模型，比较了红景天及其组方的促血管生长作用。然后以脐静脉内皮细胞为模型，研究红景天对内皮细胞血管生长相关基因的影响。最后制造大鼠急性心肌梗死模型，并用红景天干预后，探讨心肌梗死不同部位血管内皮生长因子受体VEGFR2、低氧诱导因子HIF1a、E26转化特定因子ETS1和生长分化因子GDF15以及ERK1／2磷酸化程度的改变。第一部分红景天及其组方促鸡胚尿囊膜血管生长作用的比较目的：1比较体外生药红景天及其组方五味方的促鸡胚尿囊膜血管生长作用；2探讨血清药理学研究的适当条件；3比较红景天含药血清和五味方含药血清的促鸡胚尿囊膜血管生长作用。方法：以鸡胚尿囊膜为研究模型，首先对红景天、中药A、中药B、中药C、中药D，每种中药有醇提和水提醇沉两种制剂，以及有红景天参与的五味方和无红景天参与的四味方的促血管生长作用进行比较。然后以五味方为工具药，并以具有确切促血管生长作用的麝香保心丸为对照，以动物喂药天数、喂药剂量、采血时间为主要研究因素，每个因素设4个观察水平，比较不同条件下得到的五味方含药血清和麝香保心丸含药血清促鸡胚尿囊膜血管生长作用的大小。优选出适合研究五味方含药血清促血管生长作用的一套参数，并在相同条件下制备红景天含药血清并与五味方进行比较。结果：1红景天较其组方五味方促鸡胚尿囊膜血管生长作用更强(血管计数18.88±1.959 vs 13.5±1.927，P＜0.05)。红景天醇提制剂和水提醇沉制剂的促血管生长作用无明显差异(血管计数18.88±1.959 vs 18.5±1.69，P=0.98)。2喂药天数和喂药剂量是血清药理学研究重要的影响因素，以五味方和麝香保心丸为研究药物制备的血清在5倍临床等效剂量喂药动物4天后采血，促鸡胚尿囊膜血管生长作用最强(P＜0.05)。采血时间以末次喂药后半小时采血得到的血清作用较强，但是与其它时间点比较后未达到统计学差异(P＞0.05)。血清是否灭活对其促血管生长作用无影响(P＞0.05)，五味方含药血清的作用较麝香保心丸强(P＜0.05)。3比较5倍临床等效剂量喂药动物4天后得到的红景天血清和五味方血清，红景天含药血清较五味方含药血清的促鸡胚尿囊膜血管生长作用强(血管计数20.5±1 vs 16.5±0.55，P＜0.05)。结论：红景天较其组方的促血管生长作用强。第二部分红景天对脐静脉内皮细胞血管生长相关基因的影响目的：观察红景天对内皮细胞哪些血管生长相关基因有影响方法：首先用MTT法选择促脐静脉内皮细胞生长的适当的红景天药液浓度。在此浓度下处理内皮细胞24小时后收集细胞RNA，并以未用红景天药液培养的细胞作对照，进行GEArray Q Series Human Angiogenesis Gene Array检测。对结果选取有意义的基因用实时定量PCR法进行检测。结果：红景天药液在500ug／ml时促内皮细胞生长作用明显。在此浓度下处理的细胞与对照组进行比较，在96个血管生长相关基因中有50个基因上调＞2倍。其中涉及VEGF及其受体家族、FGF及其受体家族、TGFb及其受体家族、细胞因子和趋化因子CSF、TNF，核转录因子SMAD1、ETS1，细胞外基质蛋白酶MMP家族等多项与血管生长相关的基因家族。对其中的VEGFR2、ETS1、G-CSF、TNFa、TGFbR1、TGFbR2和SMAD1进行验证的结果与芯片结果一致，均上调＞2倍。结论：红景天对内皮细胞血管生长相关基因的影响是多因素多环节的，构成一个复杂的网络，其核心成员可能是VEGF、FGF和TGFb家族。第叁部分：红景天对梗死后心肌血管再生期的影响目的：比较大鼠急性心肌梗死后2周内(梗死后1天、4天、7天和14天)，心肌不同部位(梗死中央、梗死边缘和梗死远处)HIF1a、VEGFR2、ETS1和GDF15表达以及ERK1／2磷酸化程度的动态改变以及红景天干预后的结果。比较它们与梗死局部微血管密度以及心功能的关系。方法：结扎大鼠冠脉前降支进行急性心肌梗死造模。造模后分成红景天喂药组(3g／kg／d≈2ml)和生理盐水喂养组(2ml／d)。另设假手术组和正常大鼠组。在造模后24小时内开始喂药。喂药后1天、4天、7天和14天分批处死大鼠，每批4只红景天组，4只生理盐水组、4只假手术组和1只正常组。4天、7天和14天大鼠处死前经颈动脉插管检测LVP和dp／dt。大鼠处死后取出心脏，沿心脏长轴位切开，一半放入10％福尔马林保存，然后进行CD34免疫组化染色。另一半分别在梗死中央、边缘和远处取心肌组织即刻液氮保存。对上述组织用实时定量PCR法检测HIF1a、VEGFR2、ETS1和GDF15表达，Western blot法检测ERK1／2磷酸化程度。结果：1)未用红景天干预的生理盐水组和红景天组大鼠梗死心肌局部微血管密度随时间延长增加。生理盐水组从第7天开始微血管密度明显增加并持续到14天。红景天组从第4天开始微血管密度明显增加，同样持续到14天。从第4天开始到14天，红景天组的微血管密度均大于生理盐水组。假手术组在14内微血管密度无动态改变。2)红景天对心肌表达HIF1a和VEGFR2／KDR的影响基本一致。VEGFR2的表达在心梗后未用红景天干预的情况下，从相同部位的时间变化上看，在梗死中央、梗死边缘和梗死远处都是第4天开始VEGFR2表达增加并持续到第14天。在梗死中央区域是14天达最高水平；在梗死边缘和梗死远处是第4天时表达最高，以后略下降，但至14天时表达仍较1天时高。从相同时间的不同部位来看，第1天和第14天各部位表达无明显差异。第4天和第7天表达从高到低均是梗死远处＞梗死边缘＞梗死中央。在用红景天干预的情况下，从相同部位的时间变化上来看，在梗死中央和梗死边缘都是从第4天开始表达增加并持续到第14天。在梗死中央是第7天表达最高，在梗死边缘是第14天表达最高。在梗死远处是第7天表达最高，第4天和第14天较第1天无明显差异。两组比较可见红景天对大鼠梗死心肌的影响主要在第7天和第14天。第7天时对各部位都有上调的作用，第14天时主要是梗死边缘部位表达上调。3)在HIF1a的表达上来看，在心梗后未用红景天干预的情况下，各部位从第4天开始表达有增加趋势且持续到第14天，但是均未达到统计学差异。在相同时间内比较不同部位的表达。第1天和第14天时梗死边缘分别是梗死中央的3.92倍和3.48倍。第4天和第7天各部位比较无明显差异。在红景天组，在各部位都是从第4天开始表达增加。在梗死中央和梗死边缘都是第7天表达最高，分别是第1天的4.8倍和4.65倍。在梗死远处，从第4天开始有增高趋势但未达到统计学差异。比较相同时间内不同部位的表达。在各时间点，均以梗死边缘的表达较高，第1天、第4天、第7天和第14天梗死边缘表达分别是梗死中央的1.34倍，1.41倍，1.3倍和2.5倍，但是均未达到统计学差异。两组比较，红景天对梗死心肌的影响主要在梗死后第7天的梗死中央和梗死边缘，分别是生理盐水组的4.72倍和2.86倍。4)在ETS1的表达上，在心梗后未用红景天干预的情况下，从相同部位的时间变化上来看，在梗死中央和梗死远处各时间点无明显差异。在梗死边缘从第4天开始表达增加且持续到第14天，在第14天表达最高。从相同时间的不同部位来看，第1天、第7天和第14天都是梗死远处表达最高，其次是梗死边缘，梗死中央表达最低。第4天时梗死边缘表达最高，其次是梗死远处，梗死中央表达最低。在心梗后用红景天干预后，从相同部位的时间变化上来看，在梗死中央和梗死边缘都是从第4天开始表达增加且持续到第14天，都是在第7天时表达最高。在梗死远处各时间点无明显差异。从相同时间的不同部位来看，情况同生理盐水组。两组比较，可见红景天对梗死心肌的影响主要在梗死后第4天的梗死边缘和梗死后第7天的梗死中央及梗死边缘，都是上调的作用。5)而GDF15在心肌内的表达情况，两组比较，红景天组对心肌GDF15表达的影响主要集中在4天的梗死边缘和7天的梗死远处，均为上调的作用。6) GDF15在心梗后未用红景天干预的情况下，梗死中央和梗死边缘的表达都是在第14天时表达最高。而用红景天干预后是第4天时这两个部分的表达最高。无论是否用红景天干预，在第1天和第7天都是梗死远处表达最高，其次是梗死边缘，梗死中央表达最低。在第4天和第14天都是梗死边缘表达最高，其次是梗死远处，梗死中央表达还是最低。7)ERK磷酸化情况：红景天组在1天和4天时对梗死心肌不同部位ERK1／2磷酸化情况影响较大。1天时红景天组在梗死中央、边缘和远处的表达均高于生理盐水组。4天时，在梗死中央和边缘较生理盐水组高，而梗死远处生理盐水组较红景天组高。结论：在急性心肌梗死后，HIF1a、VEGFR2和和ETS1在心肌不同部位的表达不同。随时间变化，在梗死区内变化较小。在梗死边缘和梗死远处都有上升趋势。红景天对梗死后心肌血管再生期的影响，主要集中在炎症反应期。红景天对梗死中央、边缘和远处均有不同程度的影响。对梗死边缘的影响较大。GDF15与梗死后心功能改善情况一致。但是红景天对梗死心肌GDF15的影响较心功能改善出现早，红景天是否通过促进GDF15的表达来改善心功能有待进一步研究。急性心肌梗死后在炎症反应初期ERK1／2磷酸化程度较高，与促血管生长相关基因HIF1a、VEGFR2和和ETS1的表达趋势不一致。对在梗死心肌ERK1／2磷酸化程度的影响，血管再生可能不是主要影响因素。红景天对ERK1／2磷酸化程度的影响主要在炎症反应期。
杜保生, 王秋娟, 颜天华, 马莹[6]2007年在《注射用红景天苷对麻醉犬血流动力学的影响》文中认为目的:观察注射用红景天苷对麻醉犬血流动力学的影响。方法:杂种犬36只,人工呼吸下开胸,给药后观察其心率(HR)、血压(MAP)、心输出量(CO)、冠脉血流量(CBF)、左室压(LVP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左室等容收缩期压力最大变化率(±LVdP/dtmax)等指标,计算冠脉阻力(CVR)和体循环总外周阻力(TPR)等血流动力学指标。结果:红景天苷(2,4,8 mg.kg-1)对MAP,HR和LVP无明显影响,能显着增加CBF和CO,±LVdP/dtm ax也出现不同程度的增加,同时LVEDP,CVR和TPR降低。结论:注射用红景天苷能明显改善麻醉开胸犬的血流动力学指标。
翟仰魁[7]2013年在《红景天苷对体外高糖缺氧环境下大鼠心肌微血管内皮细胞Flk-1/Akt/eNOS信号通路等影响的研究》文中提出研究目标1、探讨高糖附加缺氧对体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞(MMEVCs)增殖活力和其凋亡的影响,及红景天苷对其的保护作用。2、通过研究红景天苷对高糖缺氧条件下内皮细胞生长因子受体Flk-1及其下游信号传导通路Akt/eNOS/NO中磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化eNOS(p-eNOS)、 NO表达的影响,探索红景天苷提高MMEVCs增殖活力、抑制其凋亡的作用机制。实验方法1、MMVECs的分离、培养、纯化和鉴定7d龄的Wistar大鼠取其心脏,采用胰蛋白酶预消化后,Ⅱ型胶原酶二次消化获得细胞悬液,密度梯度离心法分离MMVECs,差速贴壁法进行纯化；细胞免疫荧光检测微血管内皮细胞特异性第Ⅷ因子、CD34及CD31相关抗原,对MMVECs进行鉴定；根据CD3,阳性率计算细胞纯度。2、MMVECs高糖缺氧模型的建立纯化后的MMVECs培养至第2代,借鉴以往我们的研究经验,分别用25、50、75、150mmol/L葡萄糖(Glu)培养基作用24、48、72、96h,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法摸索高糖对MMVECs影响的最佳作用浓度和时间。结果以含50mmol/L葡萄糖(Glu)的高糖培养基作用72h影响最为显着,确定为最佳作用条件。分别在高糖处理结束前24h、18h、12h、6h、4h,依次将细胞置于自制的细胞缺氧装置中合并缺氧处理(持续通入体积分数为1%O2、5%CO2和94%N2的缺氧气体),分别设高糖+缺氧24h组、18h组、12h组、6h组和4h组,同时设置50mmol/L高糖对照组；用MTT比色法摸索50mmol/L高糖作用72h条件下MMVECs的最终缺氧作用时间进行实验,建立最适的MMVECs高糖缺氧模型。3、红景天苷对高糖缺氧条件下MMVECs损伤的保护作用及其机制探讨取培养至第2代的MMVECs,分别加入50mmol/L Glu高糖培养基配置的红景天苷(Sal)0.25μg/ml、0.5μg/ml>1μg/ml、2μg/ml、4/μg/ml工作液,培养72h,并在高糖处理结束前12h附加缺氧条件：同时设正常对照组,即用含25mmol/L Glu的培养基常氧培养72h;用MTT比色法检测不同组别细胞活力,选择红景天苷干预MMVECs高糖缺氧损伤的最佳浓度,进行最终试验。用50mmol/L高糖培养基作用72h,结束前12h附加缺氧条件,设红景天苷组(Sal1μg/ml).培哚普利组(PD10μmol/L)和高糖缺氧组：同时设正常对照组；MTT比色实验观察各组MMVECs增殖活力变化,Hoechst33342染色观察各组细胞凋亡的形态学变化,高倍镜下随机选取10个视野计数凋亡细胞,计算凋亡率；用免疫蛋白印迹法(Western Blot)检测各组细胞Flk-1蛋白及Flk-1下游Akt/NOS信号通路中磷酸化蛋白p-Akt和p-eNOS的表达,用硝酸盐还原酶法测定细胞上清液中NO的浓度。实验结果1、原代培养MMVECs,即二次消化法获得细胞后,用密度梯度离心法分离细胞,差速贴壁法纯化细胞,可以得到纯度较高的细胞,细胞免疫荧光鉴定细胞纯度可达到90%以上。2、MTT比色试验：(1) MMVECs高糖缺氧模型的建立确定MMVECs高糖损伤的最佳作用时间和浓度：与正常对照组(25mmol/LGlu)相比,72h开始各浓度组OD值都显着下降(P<0.05或0.01),其中50mmol/LGlu组OD值降低最为显着(P<0.01),说明高糖50mmol/L作用72h条件下细胞增殖活力开始显着降低;MMVECs高糖缺氧模型的建立：与单纯高糖对照组相比,在高糖50mmol/L作用72h条件下,附加缺氧12h、18h、24h,观察发现,缺氧12h OD值开始显着降低,且随缺氧时间延长各组OD值依次降低(P均<0.01)；与高糖+缺氧12h组相比,高糖+缺氧24h组OD值显着降低(P<0.01),提示高糖50mmol/L作用72h条件下,高糖作用结束前12h迭加缺氧处理,细胞增殖活力开始较单独高糖培养显着下降。(2)摸索红景天苷干预MMVECs高糖缺氧损伤的最佳药物浓度与高糖缺氧组相比,红景天苷各浓度处理组OD值均升高,其中红景天苷2μg/ml和4μg/ml处理组OD值升高无显着差异(P均>0.05);红景天苷各浓度处理组间比较,0.5μg/ml和1μg/ml浓度组OD值大于其余各组,差异具有统计学意义(P<0.05或0.01),但1μg/ml处理组和0.5μg/ml组OD值差异无统计学意义(P>0.05)；与正常对照组相比,1μg/ml处理组OD值降低,但无显着差异(P>0.05)。提示1μg/ml红景天苷浓度组显着促进高糖缺氧条件下MMVECs的增殖。(3)比较红景天苷与培哚普利干预高糖缺氧条件下MMVECs的增殖活力与正常组相比,红景天苷组(Sal1μg/ml)、培哚普利组(PD10μmol/L)和高糖缺氧组OD值均降低(P均<0.05)：与高糖缺氧组相比,红景天苷组和培哚普利组OD明显增加,具有显着性差异(P均<0.05)；与培哚普利组相比,红景天苷组OD值无显着性差异(P>0.05),提示红景天苷可以促进高糖缺氧条件下MMVECs的增殖,其作用效果与培哚普利相近。3、Hoechst33342染色检测各组细胞凋亡：与正常对照组相比,高糖缺氧组细胞核出现核固缩、核碎裂和蓝色浓染等典型的细胞凋亡形态学变化,红景天苷组(高糖缺氧+Sal1μg/ml)和培哚普利组(高糖缺氧+PD10μmol/L)细胞核浓染变淡,核固缩和核碎裂减少;正常对照组细胞凋亡率为(1.3±0.3)%,红景天苷组为(15.6±1.8)%;与红景天苷组相比,培哚普利组(17.2±1.5)%及高糖缺氧组(26.5±1.8)%的细胞凋亡率显着升高(P均<0.05),提示红景天苷可以抑制高糖缺氧引起的MMVECs凋亡。4、Western Blot检测Flk-1、p-Akt和p-eNOS表达：与正常对照组相比,高糖缺氧组、红景天苷组和培哚普利组Flk-1、和p-eNOS表达均显着降低(P均<0.05),其中红景天苷组p-Akt表达水平降低无统计学意义(P>0.05)；与高糖缺氧组相比,红景天苷组和培哚普利组Flk-1、p-Akt和p-eNOS表达均显着增加(P均<0.05)；与红景天苷组比较,培哚普利组Flk-1表达降低,但无显着差异(P>0.05),p-Akt表达降低、p-eNOS表达升高,差异均具有有统计学意义(P均<0.05)。提示红景天苷可以提高高糖缺氧导致的Flk-1、p-Akt和p-eNOS蛋白表达降低,其作用与培哚普利组相似。5、硝酸盐还原酶法检测细胞上清中NO浓度：与正常对照组相比,红景天苷组、高糖缺氧组和培哚普利组细胞上清液中NO浓度均降低(P均<0.05);与高糖缺氧组比较,培哚普利组和红景天苷组NO浓度均升高(P均<0.05);而培哚普利组NO浓度高于红景天苷组,差异有显着性(P<0.05),提示红景天苷可以改善高糖缺氧条件下MMVECs NO的生成减少,发挥对MMVECs的保护作用,但作用略逊于培哚普利组。实验结论1、成功培养出纯度较高的MMVECs.2、50mmol/L Glu作用72h为高糖最适作用条件,在此高糖损伤模型基础上附加缺氧对MMVECs的活性有明显的抑制作用,其中高糖作用结束前12h附加缺氧处理细胞增殖活力开始较单纯高糖作用显着降低,因此以高糖50mmol/L作用72h迭加缺氧12h建立MMVECs高糖缺氧模型。高糖缺氧处理同时多个红景天苷浓度干预均可以提高MMVECs高糖缺氧模型细胞的活性,但以红景天苷1μg/ml干预组作用最显着。3、高糖缺氧条件下,MMVECs增殖活力降低,细胞凋亡增加,红景天苷1μg/ml组能提高细胞增殖活力,抑制细胞凋亡。4、高糖缺氧条件下,MMVECs Flk-1蛋白表达下调,Akt和eNOS磷酸化蛋白表达降低,细胞上清液中NO表达降低；红景天苷能促进Flk-1、p-Akt和p-eNOS表达,提高细胞上清液中NO的浓度,提示红景天苷促进高糖缺氧条件下MMVECs增殖,抑制其凋亡可能与红景天苷提高促血管新生受体Flk-1表达及促进该受体下游信号通路Akt/eNOS中蛋白Akt和eNOS的磷酸化,促进其终产物NO合成有关。创新点糖尿病微血管病变的研究主要集中在糖尿病视网膜病变和糖尿病肾病,对于糖尿病心肌微血管病变研究较少。MMVECs为研究糖尿病心肌微血管病变的细胞模型,本研究采用中药单体红景天苷干预高糖迭加缺氧条件下培养的MMVECs,通过观察红景天苷对MMVECs血管内皮生长因子受体Flk-1蛋白表达及其下游Akt/eNOS通路蛋白磷酸化的作用,研究红景天苷改善大鼠MMVECs在高糖缺氧条件下增殖障碍的机制。采用红景天苷进行的该类研究至今尚未见报道,是本课题的创新点所在,为临床上应用红景天防治糖尿病心血管并发症提供了实验依据。
苏义基[8]2017年在《红景天苷干预NF-κB及MAPK信号通路影响大鼠脊髓损伤模型运动功能的研究》文中进行了进一步梳理脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)指各种因素损伤脊髓导致的损伤平面以下的运动、感觉、自主神经功能异常。SCI常会导致残疾,使患者生存质量下降,诱发焦虑、抑郁等心理问题,给社会发展和家庭生活造成很大的影响。SCI通常由“原发性损伤”和“继发性损伤”两部分组成,原发性损伤指由于致伤因素作用于脊髓,使脊髓受到压迫、冲击、过伸或者屈曲-旋转导致的损伤。继发性损伤指因为原发性损伤引起的一系列损害,包括水肿、炎症、缺血、缺氧、过氧化反应及各种化学物质的释放。继发性损伤可引发一系列免疫生化反应及细胞凋亡等,从而加重受损局部组织结构损害,扩大损伤范围,其结果是脊髓损伤进一步加重,因此可产生远大于原发性损伤的伤害。继发性损伤的机制可能包括:局部缺血缺氧和氧自由基形成、炎症因子的生成和免疫反应、兴奋毒性和钙超载、细胞凋亡和胶质瘢痕形成等。炎症因子的生成及其所诱发的一系列免疫级联反应在SCI的发病机制中扮演重要角色,对预后有重要影响,是SCI治疗的一个重要靶点。目前,尽管SCI的研究和人体试验消耗了的巨大资源,然而,并没有产生革命性的改善神经功能或者促进神经恢复的成果,而且临床实践发现有些药物还有比较大的不良反应。这种不理想的结果的原因,很大程度上是因为我们难以找到针对性强的干预措施控制原发性损伤及其后诱发的一系列血管、细胞和生物化学反应导致继发性损伤。因此,需要寻找更有效、更安全的治疗药物或措施,是促进SCI神经功能恢复研究的重要方向。红景天苷(salidroside)是中药红景天中的有效活性成分之一,是一种苯乙醇类化合物。红景天苷具有抗炎、抗氧自由基、抑制细胞内钙超载、清除自由基、抗细胞凋亡和改善微循环作用,对SCI有潜在应用价值。本研究拟用红景天苷干预脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激星形胶质细胞激活NF-κB及MAPK信号通路释放炎症因子,观察红景天苷促进急性SCI大鼠SCI模型神经功能恢复的效果,寻找一种新的治疗SCI的途径及方法。在体外实验中,我们通过一系列分子生物学手段研究红景天苷对LPS诱发星形胶质细胞活化释放炎症因子的抑制作用及对NF-κB及MAPK信号通路的影响,包括:红景天苷对星形胶质细胞的细胞毒性实验,Real-time PCR方法检测红景天苷对LPS刺激星形胶质细胞表达IL-1β、IL-6及TNF-α水平的影响,ELISA方法检测红景天苷对LPS刺激星形胶质细胞表达IL-1β、IL-6及TNF-α水平的影响,Western Blot检测红景天苷对LPS刺激星形胶质细胞激活NF-κB和MAPK信号通路的影响等。通过体内实验,我们研究红景天苷对大鼠SCI模型运动功能恢复的影响。体内实验包括:大鼠脊髓损伤模型的建立,脊髓损伤修复功能指标评估和组织学评价,Real-time PCR和ELISA方法检测红景天苷对脊髓组织IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平的影响。本实验包括以下两个部分:第一部分红景天苷干预脂多糖活化星形胶质细胞释放炎症因子及机制目的:研究红景天苷对LPS活化星形胶质细胞释放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的影响,探索红景天苷对LPS活化星形胶质细胞释放炎症因子的调控机制。方法:在体外,我们对星形胶质细胞进行复苏、传代,用MTS检测不同浓度的红景天苷对星形胶质细胞的毒性作用;提取细胞RNA,分别用real-time PCR及ELISA检测红景天苷对LPS活化星形胶质细胞释放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的影响,用western blot方法研究红景天苷通过调控NF-κB及MAPK信号通路影响LPS活化星形胶质细胞释放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的机制。结果:红景天苷对星形胶质细胞无毒性作用。Real-time PCR及ELISA等检测手段证实红景天苷能下调LPS活化星形胶质细胞释放IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的表达。western blot方法证实红景天苷对LPS作用于星形胶质细胞所激活的NF-κB信号通路和ERK、P38MAPK信号通路有抑制作用。结论:红景天苷能抑制LPS刺激星形胶质细胞活化所释放的IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子,其抗炎作用可能通过抑制NF-κB和ERK、P38MAPK信号通路实现。第二部分红景天苷对大鼠SCI模型运动功能及炎症因子的影响目的:研究红景天苷对大鼠SCI模型运动功能的影响,探索红景天苷对大鼠SCI模型受伤脊髓节段炎症因子的作用。方法:选用SPF级Sprague Dawley大鼠128只,用改良Allen’s方法造模,随机分为假手术(Sham)组、脊髓损伤(SCI)组、甲强龙(MP)组及红景天苷(SAD)组,每组32只。假手术组仅切开椎板不损伤脊髓,SCI组损伤不用神经保护治疗,甲强龙组及红景天苷组分别用甲强龙及红景天苷干预。在造模后第1天及第7天进行功能评定,用4%多聚甲醛灌注后取脊髓标本进行组织学检测,用生理盐水灌注后取脊髓标本,用real-time PCR和ELISA方法观察红景天苷对SCI后IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的影响。结果:造模后,SCI组、MP组及SAD组BBB评分明显下降,甲基强的松龙及红景天苷均能提高大鼠SCI动物模型后肢BBB评分,两药的效果差异无统计学意义。损伤脊髓节段HE染色及尼氏染色提示SAD组及MP组的组织损伤小于SCI组。SCI后1小时,IL-1β、IL-6及TNF-α等炎症因子表达升高,SCI组、MP组、SAD组和Sham组差异有统计学意义,SCI组、MP组和SAD组之间差异无统计学意义。6小时和24小时后,SCI组、MP组和SAD组的IL-1β、IL-6及TNF-α等炎症因子表达仍较高,它们与Sham组差异有统计学意义,SCI组、MP组和SAD组之间差异无统计学意义。损伤7天后,MP组和SAD组IL-1β、IL-6及TNF-α等炎症因子表达较SCI组降低,差异有统计学意义,MP组和SAD组差异无统计学意义。结论:红景天苷能减轻大鼠SCI模型的受损伤脊髓节段的IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的表达,保留更多的正常脊髓灰质和白质,促进下肢运动功能恢复,显示良好的神经保护作用。
黄顺福[9]2006年在《红景天超微粉对小鼠急性肝损伤的保护作用的影响》文中研究表明目的：探讨红景天超微粉和红景天乙醇提取物对小鼠急性肝损伤的保护作用的影响，同时比较红景天超微粉和红景天乙醇提取物在相同生药剂量下肝保护作用的差异及量效关系。 方法：①将小鼠随机分为空白对照组、模型组、红景天超微粉组300nm大小剂量、500nm大小剂量、1～5μm大小剂量(为简便起见下文中300nm组简称为纳米组，500～1000nm组简称为亚微米组，1～5μm组简称为微米组)及护肝宁片组。②药物组连续5天给药，空白对照组、模型对照组以等体积的蒸馏水灌胃，早晚各一次，第6天至第8天各组灌胃相应受试物，30min后除空白对照组外，再灌55度白酒0.12g／10g体重，空白对照组给予同体积的蒸馏水，建立乙醇模型。末次灌胃后禁食6h，颈动脉取血，测小鼠血清中丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)活性和肝脏匀浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化歧化酶(SOD)的活性，取肝组织，做HE染色。③药物组连续4天给药，空白对照组、模型对照组以等体积的蒸馏水灌胃，1d一次，第4天，未次给药1h后，空白对照组腹腔注射生理盐水0.3ml，其余组腹腔注射D-GalN，建立D-GalN肝损伤模型。末次给药后禁食16h颈动脉取血，测小鼠血清中ALT，AST活性和肝脏匀浆中SOD活性、MDA的含量，做HE染色。 结果：①红景天300nm大剂量组、0.5～1μm大小剂量组、1～5μm小剂量组明显降低因酒精所致的急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活力升高，降低肝匀浆中MDA含量与SOD的活性与模型组比较有显着性差异(P＜0.01)。②红景天300nm大剂量组和0.5～1μm大剂量组明显降低因D-氨基半乳糖所致的急性肝损伤血清中ALT，AST活力升高。与模型组比较有显着性差异(P＜0.01)③。病理观察表明红景天超微粉300nm大剂量组，500nm大剂量组，1～5μm大剂量组可以减轻因D-氨基半乳糖及酒精所致的小鼠肝损伤。
姜敏辉, 吴翔, 曹卫军[10]2005年在《红景天对心肌缺血损伤保护作用的实验研究及临床应用》文中研究指明目的研究红景天对冠心病心绞痛患者和对异丙基肾上腺素(Iso)性心肌缺血损伤SD大鼠的保护作用。方法冠心病心绞痛患者80例,分为红景天组和对照组,每组40例。两组常规抗心绞痛处理,红景天组加用红景天胶囊,然后观察心绞痛发作频率及发作时心电图变化。SD大鼠分为3组,每组10只。正常对照组(C组):生理盐水腹腔注射和皮下注射作为对照。Iso心肌缺血损伤组(A组):Iso皮下注射造成心肌缺血损伤模型。红景天保护组(B组):先用红景天水提液腹腔注射,然后再用Iso皮下注射。最后测定各组大鼠心功能和血清肌酸磷酸激酶同工酶(CKMB)。结果心绞痛患者红景天组心绞痛发作频率和心电图变化均较对照组明显改善;Iso导致大鼠心功能下降,血清CKMB增高,B组逆转了大鼠心功能的下降,CKMB水平明显下降。结论红景天胶囊可以减轻心绞痛发作频率和发作时的心电图变化。红景天水提液对Iso引起的大鼠心肌缺血具有显着的保护作用。
参考文献：
[1]. 红景天提取工艺及其制剂的研究[D]. 顾艳丽. 沈阳药科大学. 2003
[2]. 注射用红景天的研究[D]. 孟健. 沈阳药科大学. 2004
[3]. SPE-HPLC测定注射用红景天(冻干)中红景天苷和酪醇的含量[J]. 孟健, 王淑芬, 韩飞, 李叁鸣. 中国中药杂志. 2006
[4]. 注射用红景天制备工艺的研究[J]. 刘丽达, 王凯. 亚太传统医药. 2011
[5]. 红景天促血管生长作用与其组方的比较和机制的研究[D]. 叶子. 复旦大学. 2006
[6]. 注射用红景天苷对麻醉犬血流动力学的影响[J]. 杜保生, 王秋娟, 颜天华, 马莹. 中国新药杂志. 2007
[7]. 红景天苷对体外高糖缺氧环境下大鼠心肌微血管内皮细胞Flk-1/Akt/eNOS信号通路等影响的研究[D]. 翟仰魁. 北京协和医学院. 2013
[8]. 红景天苷干预NF-κB及MAPK信号通路影响大鼠脊髓损伤模型运动功能的研究[D]. 苏义基. 广西医科大学. 2017
[9]. 红景天超微粉对小鼠急性肝损伤的保护作用的影响[D]. 黄顺福. 延边大学. 2006
[10]. 红景天对心肌缺血损伤保护作用的实验研究及临床应用[J]. 姜敏辉, 吴翔, 曹卫军. 江苏医药. 2005