导读:本文包含了耐热蛋白酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:地衣芽胞杆菌,耐热嗜碱性蛋白酶,克隆与表达,酶学性质
耐热蛋白酶论文文献综述
谢爱连,林碧瑜,牛丹丹,NOKUTHULA,Peace,Mchunu,叶秀云[1]（2019）在《耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析》一文中研究指出碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因apr E539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%～70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65～70℃;在pH6.0～12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%; Cu~(2+)、Mn~(2+)、Ca~(2+)和Mg~(2+)对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。(本文来源于《食品工业科技》期刊2019年20期）
牛春华,赵玉娟,高磊,段翠翠,李盛钰[2]（2015）在《一种产耐热蛋白酶假单胞菌双重PCR检测方法的建立》一文中研究指出假单胞菌是影响原料乳品质的主要嗜冷菌,拟建立一种针对假单胞菌及其耐热蛋白酶的双重PCR检测方法。针对假单胞菌的16S r DNA及apr X基因设计多对引物,利用单PCR反应进行筛选。利用优选的2对引物进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测分泌蛋白酶的假单胞菌双重PCR方法。用此方法对假单胞菌、肠道常见致病菌进行双重PCR检测,结果表明仅具有蛋白水解活性的假单胞菌在16S r DNA和apr X基因扩增区得到有效扩增,而致病菌和阴性对照在两扩增区均为阴性,表明此检测方法具有特异性。(本文来源于《农产品加工》期刊2015年18期）
左锋,怀宝东,李佩然[3]（2014）在《耐热丝氨酸蛋白酶改性大豆分离蛋白分散性条件研究》一文中研究指出利用耐热丝氨酸蛋白酶对大豆分离蛋白进行改性,提高其分散性。采用响应面实验设计,以加酶量、底物浓度、pH值和酶解温度为实验因素,以分散度指标为响应值,建立数学模型,优化酶解工艺参数。结果表明:最佳的酶解条件为:加酶量为4 070 U·g-1、底物浓度6.0%、反应温度71℃、pH 9.0,该条件下得到改性大豆分离蛋白的分散度为12.78,与未改性大豆分离蛋白分散度相比提高了2.09倍。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学学报》期刊2014年04期）
怀宝东,王颖,张东杰[4]（2013）在《枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因的克隆与表达》一文中研究指出目的克隆、表达枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因,并检测其酶学性质。方法从枯草芽孢杆菌染色DNA中,PCR扩增枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因Sapr,插入载体pET-28a(+)中,构建重组分泌型表达质粒pET-28a-Sapr,热激转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),25及37℃条件下,IPTG诱导重组蛋白表达,表达的重组蛋白经10%SDS-PAGE分析,并采用Folin法测定酶活性。结果重组表达质粒经双酶切及PCR鉴定,证明构建正确,测序结果表明与GenBank中登录的序列同源性达100%;表达的重组蛋白相对分子质量约39 600,最佳诱导温度为25℃,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的12%;重组菌发酵产物酶活性为322 U/ml。结论在大肠埃希菌中成功表达的特异蛋白具有生物学活性,为进一步研究改性分离蛋白的功能特性奠定了基础。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2013年10期）
张熙,母智深[5]（2013）在《原料乳中产耐热蛋白酶细菌的鉴定及其酶学特性研究》一文中研究指出为了研究UHT乳在货架期内发生水解、凝块、变苦等品质劣变现象的原因,从原料乳中分离得到一株产耐热蛋白酶细菌,通过细菌形态观察、生理生化试验、脂肪酸分析、16S rDNA基因序列测定及16-23S rRNA间区序列分析,对该菌株进行鉴定,并对其所产蛋白酶进行初步研究。结果表明:该菌株属于荧光假单孢杆菌。该菌株所产的耐热蛋白酶的最适温度为40℃,最适pH为6.8。该蛋白酶可以耐受140℃,4 s热处理。(本文来源于《食品与生物技术学报》期刊2013年03期）
邱婷玉,郑毅,陈燕[6]（2012）在《响应面法优化苏云金芽孢杆菌产耐热蛋白酶的发酵培养优化》一文中研究指出采用二水平Plackett-Burman实验设计对影响发酵培养基的8个成分进行显着性分析,确定最重要的3因素为葡萄糖、酵母膏和ZnSO4;应用响应面分析法对这3个因素进行3水平优化,获得它们的最优组合,得到优化后的最佳发酵培养基配方(g/L):黄豆饼粉12、酵母膏4.24、葡萄糖5.43、KH2PO4 2、ZnSO4 0.39、MnSO40.42。优化后产酶水平达到6473U/mL,与响应面数学模型的预测值仅有0.49%的误差。(本文来源于《海峡科学》期刊2012年08期）
马校卫,颜林春,汤二将,龚丽琼,黄祖新[7]（2012）在《高温大曲中产耐热性蛋白酶芽孢杆菌的筛选和鉴定》一文中研究指出从高温大曲样品中通过分离纯化,在牛奶琼脂平板上初筛得到产耐热性蛋白酶的菌株,然后液体发酵培养测定蛋白酶酶活挑选出产酶较强的菌株A1。在经过菌株形态特征、生化鉴定、16SrDNA分子生物学鉴定为芽孢杆菌属苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。选择叁个主要影响因子葡萄糖、酵母浸出粉和pH,运用响应面法优化发酵培养基,最佳产酶培养基为pH为8.4,葡萄糖添加量为1.092%,酵母浸出粉添加量为0.902%,最佳酶活力为142.81u/mL。测定蛋白酶酶作用的最适温度是61℃,且在55～70℃之间有较高的酶活力,60℃相对酶活为97.63%。(本文来源于《食品工业科技》期刊2012年15期）
张书文[8]（2012）在《原料乳中耐热蛋白酶对UHT乳品质的影响研究》一文中研究指出引起UHT乳发生质量缺陷的因素有很多，但来源于原料乳中的耐热酶是最主要因素。本课题对原料乳中的耐热蛋白酶在加工过程中的变化规律其对UHT乳品质的影响进行了研究，并构建了以原料乳品质来预测UHT乳货架期的数学模型。本论文的主要结果如下：采用硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose F.F.离子交换层析、Sephacryl S-100HR凝胶过滤层析方法对从原料乳中分离出一株Pseudomanas fluorescens BJ-10胞外蛋白酶进行纯化及特性研究。纯化后蛋白酶的分子量为47kDa，经纯化后蛋白酶比活提高了近61.38倍；最适温度和pH分别为30℃和7.0；二硫苏糖醇对蛋白酶活性具有一定的抑制作用，Fe2+可以促进该酶活性的提高；该酶具有较强耐热性，原酶液经130℃热处理3min后，残留酶活仍超过原酶液的47.67%；该蛋白酶氨基酸组成中甘氨酸、丙氨酸和谷氨酸的含量占明显优势，其中甘氨酸含量最高，摩尔分数高达42%。嗜冷菌在冷藏过程中仍可大量生长繁殖。Pseudomanas fluorescens BJ-10在牛乳中的生长速度及产酶活性明显超过营养肉汤培养基；6℃贮藏，当嗜冷菌数超过109、酶活性超过0.775U/mL时，蛋白水解开始明显加快；28℃培养，当嗜冷菌数超过108、酶活性达到6.49U/mL时，κ-casein被完全水解。嗜冷菌蛋白酶对酪蛋白的水解次序依次为κ-casein> β-casein> αs-casein。乳清蛋白对其不敏感。纤溶酶（PL）水平与奶牛品种、泌乳期、挤奶时间及饲养环境等因素紧密相关。荷斯坦牛乳中PL最高，为7.81U/mL；水牛乳中，摩拉、尼里拉菲、一代杂交、高代杂交乳中PL分别为6.49、5.9、6.46、6.07U/mL；牦牛乳中PL为5.7U/mL；娟姗牛乳中PL最低，仅为4.6U/mL。2、3胎原料乳中PL高于1、4胎，但不同胎次原料乳中PL差异不显着（p>0.05）。牧场的原料乳中PL要低于养殖小区。原料乳中PL随着热处理温度的升高而逐渐下降，巴氏杀菌（75℃、15s）可以使原料乳中PL下降25%左右。半胱氨酸对原料乳中PL具有一定的抑制作用。纤溶酶、纤溶酶原（PG）、纤溶酶原激活剂（PA）主要附着在酪蛋白胶粒上；PL主要水解β-casein、as2-casein、as1-casein，不水解κ-casein、β乳球蛋白和a-乳白蛋白；原料乳中PG是PL的4倍。嗜冷菌蛋白酶对PG具有一定的激活效果，但嗜冷菌蛋白酶和尿激酶联合作用于PG的激活效果比尿激酶单独的激活效果更加明显。嗜冷菌蛋白酶在牛乳中和缓冲液中，充当的是PA的角色，将PG转化成PL。根据原料乳品质建立了UHT乳货架期数学模型，得到UHT乳货架期（y）与SCC（x_1）、嗜冷菌数（x_2）、贮藏温度（x3）以及耐热酶添加量（x4）四因素在编码空间的回归方程为：y=225.069167＋0.324417x1－0.026167x2－8.776042x3－5.722143x4－0.000983x1×x1－0.000600_x2×x1－0.001083x2×x2－0.004688x3×x1＋0.009375x3×x2＋0.111979x3×x3＋0.004429x4×x1＋0.005143x4×x2＋0.054464x4×x3＋0.034422x4×x4。F回=8.87>F0.01（14,15）=4.94，方程回归极显着，该方程可用于设计范围内的预测。从因子分析可知嗜冷菌蛋白酶添加量（x_4）和贮藏温度（x_3）对UHT乳货架期的影响极显着（p<0.01）；而体细胞数（x_1）和嗜冷菌数（x_2）对货架期的影响差异显着不显着（p>0.05），这和理想的结果存在一定偏差，主要和试验过程中难以精确控制有关。从本文结果可以看出，耐热蛋白酶对原料乳及UHT乳品质的影响较大，在实际生产中对其控制具有一定的难度。因此，实际生产加工中要加强原料乳卫生管理，尽量降低原料乳中的微生物数量及其耐热酶活力、使用健康奶牛所产原料乳，避免由耐热酶引起产品变质情况的发生。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2012-06-01）
王涛[9]（2012）在《产角蛋白酶耐热菌的选育及发酵初步研究》一文中研究指出角蛋白是一类具有结缔组织和保护功能的纤维状蛋白，广泛存在于各种动物的毛发、鳞片、蹄、角的组织结构中。经处理后的角蛋白在农业、工业、食品行业和环境治理各方面都具有很大的应用价值。角蛋白酶是一种特异性降解角蛋白的诱导型酶类，可由细菌、放线菌和真菌等多种微生物诱导产生。由于角蛋白酶能在温和的条件下高效地分解角蛋白等蛋白类物质，避免了物理化学方法产生的不利影响，具有重要的应用前景。本课题根据产角蛋白酶菌株的生理特性，选取来自畜禽养殖场中鸡粪堆集中心的土壤为样本，处理后培养于以羽毛为唯一碳源和氮源的培养基，通过透明圈的方法筛选产角蛋白酶的菌种。最终得到编号为1-12的12株产角蛋白酶菌。根据菌落生长形态学显微镜观察和培养基中生长的情况及16s rDNA鉴定和生理生化实验结果显示,筛选出的菌株为枯草芽孢杆菌。进一步通过不同梯度的高温筛选后，获得的菌株能够在70℃和75℃下正常生长。对筛选到的产角蛋白酶耐热菌株在摇瓶条件下的工艺进行了研究,主要包括底物添加、温度、pH值、转速、碳氮源和接种量。可以确定接种量在5%，培养温度在28℃，转速200rpm，pH在7.5左右，以玉米淀粉为碳源，酪蛋白为氮源时培养微生物，在添加10g/L的羽毛粉时能够获得最佳的角蛋白酶产量。(本文来源于《山东轻工业学院》期刊2012-06-01）
邵彪,汪少芸,饶平凡[10]（2011）在《黑豆种子中一种耐热型胰蛋白酶抑制剂的分离及性质表征》一文中研究指出应用硫酸铵分级沉降、弱阳交换色谱CM-Sephadex C-50、凝胶过滤色谱Sephacryl S-200HR、强阳离子高效液相色谱POROS HS-20,从黑豆种子中分离纯化一种耐热型蛋白酶抑制剂,命名为TSTI.该蛋白的N末端序列为DEYSKPCCDLCMCTRRCPPQ,与豆科植物Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂具有高度同源性,推测其属于Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂.SDS-PAGE和IEF测出TSTI分子量和等电点分别为23.9 kD和6.2.TSTI对胰蛋白酶有很强的抑制作用,当二者摩尔比达到1时,胰蛋白酶活力被完全抑制.此外,该蛋白酶抑制剂具有很强的热稳定性和pH稳定性,在高达100℃温度及pH2-12范围内处理,其活性均不会受到太大影响.TSTI对植物致病菌苹果轮纹病菌、瓜果腐霉病菌、白菜黑斑病菌、甜瓜枯萎病菌和葡萄灰霉病菌具有抑制作用.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2011年01期）
耐热蛋白酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
假单胞菌是影响原料乳品质的主要嗜冷菌,拟建立一种针对假单胞菌及其耐热蛋白酶的双重PCR检测方法。针对假单胞菌的16S r DNA及apr X基因设计多对引物,利用单PCR反应进行筛选。利用优选的2对引物进行双重PCR反应体系优化,PCR产物的测序鉴定和特异性试验,建立了一种能同时检测分泌蛋白酶的假单胞菌双重PCR方法。用此方法对假单胞菌、肠道常见致病菌进行双重PCR检测,结果表明仅具有蛋白水解活性的假单胞菌在16S r DNA和apr X基因扩增区得到有效扩增,而致病菌和阴性对照在两扩增区均为阴性,表明此检测方法具有特异性。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
耐热蛋白酶论文参考文献
[1].谢爱连,林碧瑜,牛丹丹,NOKUTHULA,Peace,Mchunu,叶秀云.耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析[J].食品工业科技.2019
[2].牛春华,赵玉娟,高磊,段翠翠,李盛钰.一种产耐热蛋白酶假单胞菌双重PCR检测方法的建立[J].农产品加工.2015
[3].左锋,怀宝东,李佩然.耐热丝氨酸蛋白酶改性大豆分离蛋白分散性条件研究[J].黑龙江八一农垦大学学报.2014
[4].怀宝东,王颖,张东杰.枯草芽孢杆菌耐热丝氨酸蛋白酶基因的克隆与表达[J].中国生物制品学杂志.2013
[5].张熙,母智深.原料乳中产耐热蛋白酶细菌的鉴定及其酶学特性研究[J].食品与生物技术学报.2013
[6].邱婷玉,郑毅,陈燕.响应面法优化苏云金芽孢杆菌产耐热蛋白酶的发酵培养优化[J].海峡科学.2012
[7].马校卫,颜林春,汤二将,龚丽琼,黄祖新.高温大曲中产耐热性蛋白酶芽孢杆菌的筛选和鉴定[J].食品工业科技.2012
[8].张书文.原料乳中耐热蛋白酶对UHT乳品质的影响研究[D].中国农业科学院.2012
[9].王涛.产角蛋白酶耐热菌的选育及发酵初步研究[D].山东轻工业学院.2012
[10].邵彪,汪少芸,饶平凡.黑豆种子中一种耐热型胰蛋白酶抑制剂的分离及性质表征[J].中国生物化学与分子生物学报.2011