婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的组成与发展及差异因素研究

婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的组成与发展及差异因素研究

论文摘要

婴儿肠道双歧杆菌的定植和发展对保障其健康成长至关重要。近年来国外对婴儿肠道菌群的组成与多样性开展了多项研究,而作为优势和特征种属的双歧杆菌,却尚未能实现其种水平组成与诸多影响因素的关联分析。本文主要探究分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的影响,分析其发展和多样性与母本的关联,并初步探讨婴儿肠道中高丰度的动物双歧杆菌乳亚种对双歧杆菌群落的影响及其来源。主要结果如下:(1)为了探究分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的影响,通过Illumina高通量测序技术分析112份出生42天以内的婴儿粪便样品。结果显示,婴儿肠道菌群的组成和多样性差异显著。在门水平,厚壁菌门、变形菌门和放线菌门占主导,顺产和母乳喂养婴儿中放线菌门丰度较高,而剖腹产和奶粉喂养婴儿中厚壁菌门丰度较高;在属水平,肠杆菌科的一个未分类属和双歧杆菌属是主要优势菌,顺产和母乳喂养组中含有更多双歧杆菌属和链球菌属,而剖腹产、奶粉和混合喂养组中含有更多肠球菌属和梭菌属;在双歧杆菌群落上,长双歧杆菌和假小链双歧杆菌占据优势,且动物双歧杆菌乳亚种丰度明显高于相关报道,顺产和母乳喂养婴儿中齿双歧杆菌丰度更高。剖腹产和奶粉喂养会显著降低肠道菌群多样性。不同分娩和喂养方式对肠道菌群的功能基因存在显著影响,顺产和母乳喂养婴儿中参与脂肪和蛋白质代谢的功能基因较多,而剖腹产和奶粉喂养婴儿中参与碳水化合物代谢的功能基因较多。(2)为了探究婴儿早期肠道菌群和双歧杆菌群落的发展及与母本的关联,追踪分析23对母亲和顺产婴儿(7天和42天)。结果显示,随着周龄增加,婴儿肠道菌群的组成和丰度变化明显,且与母本有显著差异。在肠道菌群组成上,放线菌门丰度增加,而厚壁菌门和变形菌门丰度减少;双歧杆菌属丰度增加,而链球菌属丰度减少;短双歧杆菌和齿双歧杆菌丰度增加,而动物双歧杆菌乳亚种丰度减少。母本肠道中厚壁菌门和拟杆菌门丰度较高,属水平组成更丰富,拟杆菌属和肠杆菌科的一个未分类属丰度较高,而双歧杆菌属丰度较低,其优势双歧杆菌种也较少。在肠道菌群多样性方面,婴儿7天和42天无明显差异,而母本显著高于婴儿。对母婴粪便样品进行双歧杆菌筛选和基因组比较发现,母本中的双歧杆菌会通过垂直传递进入婴儿肠道。(3)鉴于动物双歧杆菌乳亚种丰度在部分样品中明显高于文献报道,探讨它对婴儿肠道双歧杆菌群落的影响及其来源。结果显示,高丰度的动物双歧杆菌乳亚种会明显降低双歧杆菌群落的丰度和多样性。从50份粪便样品中筛获23株动物双歧杆菌乳亚种,通过基因组测序和部分特性分析比较其与商业化菌株的差异表明,婴儿和成人中动物双歧杆菌乳亚种的基因组差异不显著,且其对碳水化合物利用特性基本一致,仅部分菌株的抗生素耐受性存在明显差异,但筛获菌株均非来源于Bb-12、HN019等商业化菌株。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 缩略符号对照表
  • 1 绪论
  •   1.1 婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的组成与发展
  •     1.1.1 婴儿肠道菌群门和属水平的组成与变化
  •     1.1.2 婴儿肠道双歧杆菌群落种水平的组成与变化
  •   1.2 影响婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的相关因素
  •     1.2.1 分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的影响
  •     1.2.2 母婴之间肠道菌群和双歧杆菌群落的关联
  •   1.3 立题背景和意义
  •   1.4 主要研究内容
  • 2 材料与方法
  •   2.1 实验材料与设备
  •     2.1.1 试剂
  •     2.1.2 培养基
  •     2.1.3 主要仪器与设备
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 参与者与样品采集
  •     2.2.2 DNA提取
  •     2.2.3 DNA扩增
  •     2.2.4 产物回收和浓度测定
  •     2.2.5 文库构建和上机测序
  •     2.2.6 下机数据处理和分析
  •     2.2.7 双歧杆菌的分离纯化
  •     2.2.8 双歧杆菌的菌种鉴定与保藏
  •     2.2.9 全基因草图的制备和送测
  •     2.2.10 同源基因和系统进化树分析
  •     2.2.11 比较基因组分析
  •     2.2.12 碳水化合物利用测定
  •     2.2.13 抗生素最低抑制浓度测定
  •     2.2.14 数据统计和分析
  • 3 结果与讨论
  •   3.1 分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落组成与多样性的影响
  •     3.1.1 分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群门和属水平组成的影响
  •     3.1.2 分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群多样性的影响
  •     3.1.3 分娩和喂养方式对婴儿肠道双歧杆菌群落组成的影响
  •     3.1.4 分娩和喂养方式对婴儿肠道双歧杆菌群落多样性的影响
  •     3.1.5 分娩和喂养方式对婴儿肠道菌群功能基因的影响
  •   3.2 婴儿肠道菌群和双歧杆菌群落的发展及母婴间的关联
  •     3.2.1 婴儿肠道菌群门和属水平的组成发展和多样性及与母本的关联
  •     3.2.2 婴儿肠道双歧杆菌群落的组成发展和多样性及与母本的关联
  •     3.2.3 母婴间双歧杆菌株水平的垂直传递
  •   3.3 婴儿肠道中动物双歧杆菌乳亚种的来源和影响
  •     3.3.1 婴儿肠道中动物双歧杆菌乳亚种的丰度和影响
  •     3.3.2 动物双歧杆菌乳亚种的菌株分离与基因组测定及系统进化树
  •     3.3.3 动物双歧杆菌乳亚种对碳水化合物的利用
  •     3.3.4 动物双歧杆菌乳亚种对抗生素的耐受性
  • 主要结论与展望
  • 致谢
  • 参考文献
  • 附录 Ⅰ:作者在攻读硕士学位期间发表的论文
  • 附录 Ⅱ:112 份婴儿样品信息
  • 附录 Ⅲ:23份顺产母婴对样品信息
  • 附录 Ⅳ:分离自23对母婴肠道中的双歧杆菌菌株信息
  • 附录 Ⅴ:动物双歧杆菌乳亚种的基因组信息
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 陈迎琪

    导师: 陈卫

    关键词: 婴儿肠道菌群,双歧杆菌群落,分娩和喂养方式,母婴传递,动物双歧杆菌乳亚种

    来源: 江南大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 江南大学

    分类号: TS201.3

    总页数: 68

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