紫苏防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆及功能研究

紫苏防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆及功能研究

论文摘要

紫苏(Perilla frutescens)在中国约有2000年的种植历史,是常见的食用、药用植物。紫苏叶、梗、果均可入药,具有良好的抗菌活性。植物防御素(Plant defensins)是抗菌肽家族的主要成员,是植物先天免疫系统的重要组成部分。它们在结构上相似,但序列差异较大,这决定着它们功能的多样性。虽然几乎每种植物都有一系列编码防御素的基因,但许多对特定的病原体无效而导致植物易感染疾病。因此,深入研究各种植物防御素的性质和确切的抗菌作用,并将这些数据整合,可以为设计针对特定病原体的抗性基因提供参考。茉莉酸羟基甲基转移酶(jasmonic acid carboxyl methyltransferase,JMT)是植物茉莉酸甲酯生物合成的关键酶,JMT通过调节茉莉酸及其衍生物的浓度,在植物防御和发育及相应各种胁迫反应中发挥重要作用。因此,将来自紫苏种子的防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因应用于改良作物品种,在理论上具有一定的食品安全性以及良好的抗性。本研究通过对紫苏防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆及表达分析,及构建植物表达载体进行遗传转化,对紫苏防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因进行研究。主要研究结果如下:1、基因克隆得到了7个紫苏防御素基因,分别命名为PfDEF1-PfDEF7。他们均为Ⅰ类植物防御素,和拟南芥AtPDF2类植物防御素相似。组织特异性分析发现PfPDF1、PfPDF2和PfPDF4在茎、叶、花、种子中均有表达,PfPDF3在叶和种子中表达,PfPDF5、PfPDF6和PfPDF7只在种子中表达。遗传转化得到了PfDEF2的转基因油菜。2、基因克隆得到了1个紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因,命名为PfJMT。PfJMT在紫苏根和茎中的相对表达量最低,叶和花中的相对表达量比根和茎中略高,在开花后5d的种子中的表达量最高,并且随着种子的发育表达逐渐下调,说明JMT在种子发育中起着重要作用。在使用外源MeJA和SA处理的紫苏根、叶组织中,PfJMT表达均显著下调,这一结果支持JMT可能不直接参与防御反应,而是通过调节JA水平间接参与植物防御的理论。遗传转化得到了PfJMT的转基因烟草。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 1 引言
  •   1.1 植物防御素
  •     1.1.1 植物防御素的起源和分布
  •     1.1.2 植物防御素的结构和分类
  •     1.1.3 植物防御素的作用机理
  •     1.1.4 植物防御素在生长和发育中的作用
  •     1.1.5 植物防御素在作物抗病育种中的应用
  •   1.2 茉莉酸羟基甲基转移酶
  •     1.2.1 茉莉酸羟基甲基转移酶的功能
  •     1.2.2 茉莉酸甲酯的功能
  •     1.2.3 茉莉酸羟基甲基转移酶的研究进展
  •   1.3 研究目的和意义
  •   1.4 主要研究内容
  •   1.5 技术路线
  • 2 材料与方法
  •   2.1 紫苏防御素基因的克隆及功能分析
  •     2.1.1 实验试剂及设备
  •     2.1.2 紫苏防御素基因的克隆
  •     2.1.3 紫苏防御素基因的生物信息学分析
  •     2.1.4 紫苏防御素基因表达分析
  •     2.1.5 植物表达载体的构建
  •     2.1.6 遗传转化
  •   2.2 紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆及功能分析
  •     2.2.1 紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆
  •     2.2.2 紫苏防御素基因的生物信息学分析
  •     2.2.3 紫苏茉莉酸羟基甲基转移酶基因表达分析
  •     2.2.4 植物表达载体的构建
  • 3 结果与分析
  •   3.1 紫苏防御素基因的克隆及功能研究
  •     3.1.1 紫苏防御素基因的克隆
  •     3.1.2 紫苏防御素的基本特征
  •     3.1.3 紫苏防御素的保守基序分析
  •     3.1.4 紫苏防御素与其它植物防御素的进化树分析
  •     3.1.5 紫苏防御素表达分析
  •     3.1.6 PfDEF2 的遗传转化及鉴定
  •   3.2 茉莉酸羟基甲基转移酶基因的克隆及功能研究
  •     3.2.1 PfJMT基因的克隆和生物信息学分析
  •     3.2.2 PfJMT的序列比对分析
  •     3.2.3 PfJMT聚类分析
  •     3.2.4 PfJMT的实时荧光定量分析
  •     3.2.5 PfJMT的遗传转化及鉴定
  • 4 讨论
  •   4.1 紫苏防御素可能具有良好的抗菌活性
  •   4.2 紫苏防御素基因在基因工程中的应用前景
  •   4.3 JMT在不同植物中的保守性较低
  •   4.4 JTM主要在植物发育而非防御反应中发挥作用
  •   4.5 JMT在基因工程中的应用
  • 5 结论与不足
  •   5.1 结论
  •   5.2 实验中存在的不足与展望
  • 参考文献
  • 附录A:攻读硕士学位期间发表论文及科研情况
  • 附录B:紫苏防御素和茉莉酸羟基甲基转移酶基因序列
  • 附录C:pCAMBIA1303 质粒图谱
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 白辉杨

    导师: 张涛

    关键词: 紫苏,植物防御素,茉莉酸羟基甲基转移酶,遗传转化

    来源: 重庆师范大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,生物学,农作物

    单位: 重庆师范大学

    分类号: Q943.2;S567.219

    总页数: 58

    文件大小: 2499K

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