导读:本文包含了克隆标记标记论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:标记,基因,狂犬病,单克隆抗体,蛋白,蛋白尿,分子。
克隆标记标记论文文献综述
韩月然,陈妍,杜向瑞,吕品,刘博[1]（2019）在《前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证》一文中研究指出目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10~5、5×10~5和1×10~6个/mL)、PCSK9蛋白浓度(5、20、40、80μg/mL)、荧光标记的低密度脂蛋白(low density lipoprotein labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate,Dil-LDL)浓度(10、16、20μg/mL)、单克隆抗体的浓度梯度(200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL,200、30、10、6、4、1、0. 2μg/mL,200、28、9、6、4、2、0. 2μg/mL)进行优化,并对优化方法的专属性、准确度、精密度、线性范围、耐用性进行验证。结果最适方法检测条件:铺板密度为5×10~5个/mL,PCSK9蛋白和Dil-LDL浓度分别为20和16μg/mL,单克隆抗体的浓度梯度为200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL。该方法可特异性检测PCSK9单克隆抗体;供试品检测回收率在70%～130%之间;供试品检测结果的相对标准偏差(RSD)均<10%;供试品效价在50%～150%之间时,检测值与理论值呈良好的线性关系,线性拟合方程为y=1. 002 x-0. 006 7,R~2=0. 997 8;耐用性检测活性均在70%～140%范围内。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、准确度和精密度,可用于PCSK9单克隆抗体的生物学活性测定。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2019年11期）
刘东让,侯喜林,肖栋[2]（2019）在《白菜类作物开花时间相关基因CCA1的克隆及功能标记开发》一文中研究指出以1年生的油用型品种Yellow sarson(YS-143)与2年生的芜菁品种Vegetable turnip(VT-044)的cDNA为模板,克隆出CCA1基因cDNA全长序列,分析其核苷酸多态性。在这2份材料构建的200株F_2分离群体中,选取极早和极晚开花的单株各24株,对在亲本上鉴定到的4个多态性位点进行PCR扩增,采用Pearson相关性分析研究基因型与开花时间表现型的关系。构建pEZS-NL-CCA1载体,利用亚细胞定位技术,分析CCA1基因在真核细胞中的表达情况。序列分析表明,YS-143与VT-044分别有1 665、1 647个核苷酸,分别编码了554、548个氨基酸。亲本之间核苷酸序列分析鉴定到12个差异位点,氨基酸同源进化树分析表明,十字花科的不结球白菜、大白菜、萝卜、油菜、拟南芥、亚麻芥聚集在同一分支中,而禾本科的大麦、玉米、水稻聚集在另一分支中。在F_2分离群体上,Pearson相关性鉴定到位于亲本第727至第732个碱基处的1个多态性位点(ACCCTT/ACCCTT),有该位点的群体单株平均开花时间为39 d,极显着早于缺失该位点的群体单株平均开花时间104 d(P<0.01),表明白菜类作物CCA1基因的第727至第732个碱基的缺失(A05:472204-472209)与开花时间呈极显着相关,影响开花时间,可为光周期敏感的白菜类作物晚抽薹育种研究提供一定的理论依据。开发的该Insert/Delete(InDel)标记,可以作为功能分子标记进行辅助育种工作,以加快育种进程。亚细胞定位结果表明,CCA1基因主要在细胞核上表达。(本文来源于《江苏农业科学》期刊2019年20期）
王胜,陈键,卢杰,陈璨,司红起[3]（2019）在《小麦肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆及分子标记开发》一文中研究指出小麦肉桂酰辅酶A还原酶基因(CCR)是与小麦倒伏性状密切相关的木质素生物合成关键基因。本文通过将小麦TaCCR1的cDNA序列与象草等近源物种的CCR基因全长序列比对,设计引物并克隆出5B染色体上CCR基因序列全长,大小为4165bp。分析对比不同材料5B染色体上的CCR基因全长序列,共得到四种多态性序列,其中在外显子区域有7处单个碱基的差异,在内含子区域有11处差异,并针对5B染色体上CCR基因第叁内含子区域一段约144bp的插入缺失,开发了一对功能标记并且能扩增出A、B两种带型。利用该标记检验238份自然群体材料并分析发现:扩增A带型材料的无论是茎秆强度还是茎秆抗折力数值的平均值均大于B带型的,不同品种间的茎秆强度和茎秆抗折力变动趋势基本一致,均先增加后降低,并在开花后15天和25天达到了显着水平,开花后20天达到了极显着水平,为小麦抗倒伏分子标记辅助选择育种提供一定的理论参考依据。(本文来源于《第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集》期刊2019-08-11）
陈松彪,黄勇,童德文[4]（2019）在《携带遗传标记的PPV全长感染性克隆构建及其生物学特性研究》一文中研究指出(目的)猪细小病毒(Porcine Parvovirus, PPV)感染能够突破胎盘屏障引起初孕母猪流产、死胎和木乃伊胎等,严重威胁养猪业的健康发展。PPV基因组全长约5.0 kb,包含两个开放性阅读框(open reading frame,ORF),5′端的ORF1编码3个非结构蛋白NS1、NS2及NS3,3′端的ORF2编码2个结构蛋白VP1和VP2,目前有关PPV的结构和非结构蛋白在其致病过程中的作用及机制尚不清楚,且至今也没有针对PPV结构与非结构蛋白的单克隆抗体,因此,构建PPV全长感染性克隆,用于深入探讨这些蛋白在PPV致病过程中的作用机制势在必行。(方法)本研究首先通过人工合成两端发夹结构,应用融合PCR技术(overlap PCR)体外扩增中间序列,在体外经过无缝克隆技术(Infusion)连接,构建PPV全长感染性克隆质粒,并在全长DNA感染性克隆的VP1上(A3058T)通过无义突变引入Eco R I酶切位点作为遗传标记,用于区分拯救病毒和亲本病毒。采用脂质体将全长感染性克隆质粒转染PK-15细胞进行病毒拯救。(结果)结果显示在盲传至5代可以观察到典型CPE,利用电镜、Western-blot、间接免疫荧光检测,结果表明病毒拯救成功,命名Y-PPV。细胞试验结果显示,Y-PPV感染PK-15细胞后能够引起明显的特征性病变和稳定遗传携带的遗传标记,且具有和亲本毒株相似的复制增殖能力及诱导细胞凋亡特性。动物试验结果发现,Y-PPV与亲本毒株相比具有相似的组织嗜性和致组织病变能力。(结论)该研究结果为进一步探讨PPV的致病机制以及疫苗的研发奠定理论基础和提供试验材料。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集》期刊2019-07-27）
曹鹏波[5]（2019）在《小鼠克隆胚胎重编程的DNA甲基化模式分析与表观标记挖掘》一文中研究指出体细胞核移植(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)又称为克隆,是目前动物细胞工程领域一种研究细胞重编程常用的技术手段,可以将终末分化的细胞重新编程为具有全能性状态的细胞,并发育为同质个体后代。尽管核移植技术在重编程研究中具有安全和可获得全能性细胞的优点,但是在多数动物中重编程的效率仍然非常低,大部分克隆胚胎在早期发育期间会发生发育阻滞。研究表明克服表观遗传障碍是目前提高重编程效率的重要策略,其中关键组蛋白甲基化H3K9me3、H3K27me3已经被明确标记为重编程表观屏障,而关于DNA甲基化分子标记物的报导却很少,急需通过组学方法进行挖掘分析。本文的研究中,我们分析了不同发育命运克隆胚胎与正常受精胚胎的DNA甲基化谱,发现克隆胚胎与正常受精胚胎相比在全局去甲基化的过程中表现出甲基化较高的特点,我们进一步对差异甲基化区域(Differentially Methylated Regions,DMRs)进行分析并识别出克隆胚胎中叁种异常的甲基化模式,包括重新甲基化的DMRs(rDMRs)、持续甲基化的DMRs(pDMRs)和去甲基化的DMRs(dDMRs)。另外,我们发现启动子区域、第一内含子和3'UTR是DMRs重点分布的基因组功能区域,并且DMRs的长度与DNA甲基化水平的差异明显的负相关,DMRs长度越短,DNA甲基化水平变化越大。克隆胚胎较高的甲基化水平导致早期合子基因组基因、多能性维持因子以及关键转录因子未正确激活,这是克隆胚胎重编程失败的重要原因。之后,我们联合转录RNA-seq数据进行综合分析,鉴定出SCNT中高DNA甲基化与基因表达下调的基因簇,这些基因的低表达会引起克隆胚胎发育脱离正常轨道。进一步我们通过构建加权基因共表达网络识别出一系列关键重编程表观障碍因子,包括Sp110、Sp140、Pcgf5、Zfp207、Ubtfl1、Serbp1、Dppa2、Yy1、Prps1、Rrn3、Obox6、Kpna2、Elovl6、Trim13、Katna1等。其中Dppa2、Obox6、Pcgf5、Yy1、Rrn3等已被证实是体细胞重编程中关键基因,对促进细胞重编程的进程有重要作用。最后,我们对细胞重编程中甲基转移酶(Dnmt家族)和去甲基化酶(Tet家族)进行了系统的比较分析,研究发现Dnmt1、Dnmt3a和Dnmt3b在克隆胚胎中基因表达水平升高,而Tet家族中,只有Tet1基因表达水平下降,这表明克隆胚胎的高甲基化可能是由Dnmt家族的高表达和Tet1的低表达共同造成的。本研究全面地分析了克隆胚胎全基因组DNA甲基化的异常模式,为克服重编程中DNA甲基化表观遗传屏障,提高重编程效率提供了一定的理论支持,对于后期体细胞核移植的临床应用具有一定的帮助。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2019-06-05）
张文珺,徐娜娜,李霞芳,王梦薇,胡芳露[6]（2019）在《紫萍和兰氏萍不同克隆的生长性状及其与微卫星标记的关联性分析》一文中研究指出对紫萍[Spirodela polyrhiza(Linn.) Schleid.]3个克隆和兰氏萍[Landoltia punctata(G. Meyer) Les et D. J. Crawford]3个克隆的所有克隆分株的单株叶状体数,单叶状体的根数、总根长和平均根长以及叶状体的长度和宽度进行分析,基于微卫星标记扩增结果对6个克隆在各微卫星位点的基因型进行分析,并对各微卫星位点与2种浮萍生长性状的关联性进行分析,还对2种浮萍各微卫星位点不同基因型间的生长性状进行多重比较。结果表明:紫萍单叶状体的根数、总根长和平均根长及叶状体宽度在3个克隆间以及兰氏萍各生长性状在3个克隆间均存在显着(P<0.05)差异。紫萍3个克隆在Sp25、Sp30、Sp47和Sp53位点的基因型不同,兰氏萍3个克隆在Sp10、Sp14、Sp16、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53位点的基因型不同;紫萍3个克隆在Sp6、Sp14、Sp16、Sp25、Sp36、Sp45、Sp47和Sp51位点的基因型和等位基因与兰氏萍不同;2种浮萍6个克隆在Sp4、Sp12、Sp28、Sp29和Sp43位点的基因型相同。Sp25、Sp30、Sp47和Sp53位点与紫萍单叶状体的根数、总根长和平均根长的关联性极显着(P<0.01),Sp30位点与其叶状体的长度和宽度的关联性显着,Sp25位点与其叶状体宽度的关联性也显着。Sp10、Sp14、Sp16、Sp42、Sp47、Sp52和Sp53位点与兰氏萍单株叶状体数和单叶状体根数的关联性极显着,Sp10、Sp14、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53位点与其叶状体的长度和宽度的关联性显着或极显着,Sp16、Sp51及Sp53位点与其单叶状体的总根长和平均根长的关联性极显着。Sp47和Sp53位点BD基因型紫萍的根明显偏多且偏长,Sp51和Sp53位点AD基因型兰氏萍的根明显偏长;并且,Sp25位点CE基因型紫萍的叶状体最多且最大,其根也最多且最长。研究结果显示:供试的微卫星标记具有属间标记通用性,可用于紫萍和兰氏萍基因型分析;Sp25、Sp30、Sp47和Sp53位点与紫萍根的长度和数量密切相关,而Sp10、Sp14、Sp16、Sp42、Sp47、Sp51、Sp52和Sp53位点与兰氏萍叶状体的数量和大小以及根的数量密切相关。(本文来源于《植物资源与环境学报》期刊2019年02期）
李洁,宋云,王文娟,唐青,于鹏程[7]（2019）在《荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的制备及初步应用》一文中研究指出抗狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)核蛋白荧光抗体具有价格昂贵、保质期短和购买周期长等缺点,非常不利于各级疾病预防控制系统对该试剂的紧急使用。作为国家狂犬病实验室,亟需研发具有自主知识产权的异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记抗RABV核蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb),并且商品化,使其广泛应用于流行病学调查和实验室的病原学和血清学诊断,实现国家狂犬病监测和检测相关试剂的标准化,从而为我国狂犬病防控提供技术支持。制备FITC标记的抗RABV核蛋白MAb,并将其初步应用于直接免疫荧光实验(Direct fluorescent assay,DFA)和快速荧光灶抑制试验(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)。将本实验室制备的抗RABV核蛋白MAb 3B12进行FITC标记,通过DFA确定荧光标记抗体(FITC--3B12)工作浓度,以市售FITC标记MAb作为阳性对照,对狂犬病相关临床样本进行DFA和RFFIT检测。DFA实验结果显示,FITC--3B12的工作浓度为1∶80,与市售荧光抗体的检测结果符合率为100%。RFFIT结果显示,FITC-3B12与市售荧光抗体的检测结果无统计学差异,且具有良好的重复性(CV<15%)。以上结果表明,本实验室所制备的抗RABV核蛋白荧光抗体可应用于狂犬病相关的DFA及RFFIT检测。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年03期）
郭程娱[8]（2019）在《荧光标记的嗜水气单胞菌溶素变异体试验在867例贫血患者PNH克隆筛查中的应用》一文中研究指出目的应用荧光标记的嗜水气单胞菌溶素变异体(Flaer)试验检测贫血患者外周血中性粒细胞和单核细胞的PNH克隆,并与CD59试验、Ham试验结果进行对比,以探讨Flaer试验对于贫血患者PNH克隆筛查的意义。方法回顾性研究。收集2016年8月至2017年10月期间郑州大学第一附属医院门诊及住院贫血患者共867例,男388例,女479例,中位年龄47岁(8月~89岁),包括PNH患者63例、AA患者183例、MDS患者102例、AIHA患者42例、AL患者58例、IDA患者71例、MA患者49例及其他原因引起的诊断明确的贫血患者共299例。本研究获得医院伦理委员会批准,所有患者或监护人签署知情同意书。所有患者均符合贫血诊断标准,诊断标准严格参照《血液病诊断及疗效标准》。所有患者均接受流式细胞术检测中性粒细胞和单核细胞表面Flaer的表达及红细胞表面CD59的表达,672例患者进行了Ham试验。定量资料组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验,配对资料组间比较采用Wilcoxon秩和检验及Mcnemar秩和检验。结果867例贫血患者中,Flaer试验阳性者87例(10.03%),CD59试验阳性者43例(4.96%),Flaer中性粒细胞试验与CD59试验、Ham试验差异均有统计学意义(χ~2=18.95,P<0.001;χ~2=56.02,P<0.001),Flaer单核细胞试验与CD59试验、Ham试验差异均有统计学意义(χ~2=20.57,P<0.001;χ~2=57.14,P<0.001),且中性粒细胞与单核细胞Flaer缺失率[(5.86±21.09)%及(5.99±20.98)%,(?x±s)%)]均高于CD59试验[(1.68±6.66)%],而Flaer中性粒细胞缺失率与Flaer单核细胞缺失率差异无统计学意义(P=0.804)。PNH患者中,中性粒细胞[(73.94±28.59)%]与单核细胞[(76.73±23.64)%]Flaer缺失率均高于CD59试验[(11.15±21.56)%]缺失率(Z=-6.764,P<0.001;Z=-6.618,P<0.001),而中性粒细胞Flaer缺失率与单核细胞Flaer缺失率无明显差异(Z=-0.085,P=0.933)。Flaer试验阳性的87例患者中,PNH患者中性粒细胞及单核细胞Flaer缺失率[(76.32±25.74)%,(75.40±25.61)%]均高于非PNH患者[(14.00±24.10)%,(16.74±27.32)%](Z=-6.432,P<0.001;Z=-5.732,P<0.001)。结论1.对867例贫血患者进行PNH克隆筛查,Flaer试验阳性率高于CD59试验、Ham试验。2.PNH患者中,Flaer试验阳性率大于CD59试验、Ham试验。3.PNH患者Flaer试验缺失率高于非PNH贫血患者。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-04-01）
杨柳,康雷,刘忠松[9]（2019）在《油菜及其近缘植物形态标记性状基因定位与克隆研究进展》一文中研究指出形态标记不仅在品种选育、种子生产和纯度鉴定时作为指示性状,而且与作物的产量、品质和抗性相关。综述了近年在油菜叶色、叶面蜡粉、叶型、矮秆、花色、种子颜色和多室等7个标记性状上的基因定位和克隆研究进展,发现往往有多个基因通过同一代谢途径或不同代谢途径控制同一性状,异源四倍体的油菜、芥菜控制性状的基因数目一般是其祖先亲本种白菜、甘蓝的2倍,在相同的染色体或同源区段能找到同源基因。这些研究成果既为更多性状的基因定位克隆提供了借鉴,也为通过基因编辑等手段创制具有特殊标记性状的新种质提供了可选择的靶标位点。(本文来源于《作物研究》期刊2019年01期）
高小娥[10]（2018）在《R-藻红蛋白荧光标记小鼠抗人CD4/CD8单克隆抗体》一文中研究指出R-藻红蛋白(R-PE)是一种新型荧光标记探针,具有优良的荧光特征。本实验采用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4/CD8单克隆抗体,再将活化后的R-PE和CD4/CD8单克隆抗体以一定比例混合,使之发生交联反应,交联产物经SephacrylS-300柱分离纯化。结果显示:用R-PE标记的抗CD4/CD8单抗,经流式细胞仪(简称FACS)分析可以检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原和CD8抗原的表达,且R-PE标记的抗CD4/CD8单抗特异性保持完好,荧光强度较高,可以形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。(本文来源于《生物化工》期刊2018年05期）
克隆标记标记论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
以1年生的油用型品种Yellow sarson(YS-143)与2年生的芜菁品种Vegetable turnip(VT-044)的cDNA为模板,克隆出CCA1基因cDNA全长序列,分析其核苷酸多态性。在这2份材料构建的200株F_2分离群体中,选取极早和极晚开花的单株各24株,对在亲本上鉴定到的4个多态性位点进行PCR扩增,采用Pearson相关性分析研究基因型与开花时间表现型的关系。构建pEZS-NL-CCA1载体,利用亚细胞定位技术,分析CCA1基因在真核细胞中的表达情况。序列分析表明,YS-143与VT-044分别有1 665、1 647个核苷酸,分别编码了554、548个氨基酸。亲本之间核苷酸序列分析鉴定到12个差异位点,氨基酸同源进化树分析表明,十字花科的不结球白菜、大白菜、萝卜、油菜、拟南芥、亚麻芥聚集在同一分支中,而禾本科的大麦、玉米、水稻聚集在另一分支中。在F_2分离群体上,Pearson相关性鉴定到位于亲本第727至第732个碱基处的1个多态性位点(ACCCTT/ACCCTT),有该位点的群体单株平均开花时间为39 d,极显着早于缺失该位点的群体单株平均开花时间104 d(P<0.01),表明白菜类作物CCA1基因的第727至第732个碱基的缺失(A05:472204-472209)与开花时间呈极显着相关,影响开花时间,可为光周期敏感的白菜类作物晚抽薹育种研究提供一定的理论依据。开发的该Insert/Delete(InDel)标记,可以作为功能分子标记进行辅助育种工作,以加快育种进程。亚细胞定位结果表明,CCA1基因主要在细胞核上表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
克隆标记标记论文参考文献
[1].韩月然,陈妍,杜向瑞,吕品,刘博.前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证[J].中国生物制品学杂志.2019
[2].刘东让,侯喜林,肖栋.白菜类作物开花时间相关基因CCA1的克隆及功能标记开发[J].江苏农业科学.2019
[3].王胜,陈键,卢杰,陈璨,司红起.小麦肉桂酰辅酶A还原酶基因克隆及分子标记开发[C].第十届全国小麦基因组学及分子育种大会摘要集.2019
[4].陈松彪,黄勇,童德文.携带遗传标记的PPV全长感染性克隆构建及其生物学特性研究[C].中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十五次学术交流会、中国病理生理学会动物病理学专业委员会第二十四次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第四次学术研讨会、中国兽医病理学家第四次研讨会论文集.2019
[5].曹鹏波.小鼠克隆胚胎重编程的DNA甲基化模式分析与表观标记挖掘[D].内蒙古大学.2019
[6].张文珺,徐娜娜,李霞芳,王梦薇,胡芳露.紫萍和兰氏萍不同克隆的生长性状及其与微卫星标记的关联性分析[J].植物资源与环境学报.2019
[7].李洁,宋云,王文娟,唐青,于鹏程.荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体的制备及初步应用[J].病毒学报.2019
[8].郭程娱.荧光标记的嗜水气单胞菌溶素变异体试验在867例贫血患者PNH克隆筛查中的应用[D].郑州大学.2019
[9].杨柳,康雷,刘忠松.油菜及其近缘植物形态标记性状基因定位与克隆研究进展[J].作物研究.2019
[10].高小娥.R-藻红蛋白荧光标记小鼠抗人CD4/CD8单克隆抗体[J].生物化工.2018
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