导读:本文包含了嵌合型克隆论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:奥希替尼,SCT400,利妥昔单抗,超高效液相色谱串联质谱
嵌合型克隆论文文献综述
宋媛媛[1]（2018）在《抗肿瘤药物奥希替尼和重组人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体的药物浓度分析和药效学研究》一文中研究指出本论文以抗肿瘤药物奥希替尼片和我国自主研发的1.1类新药重组人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体注射液(SCT400)为研究对象,分别建立了快速、灵敏的超高效液相色谱质谱联用法(ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)测定人血浆和脑脊液中奥希替尼的浓度,并使用二代测序技术分析了血浆和脑脊液中循环肿瘤DNA(circulating tumour DNA,ctDNA)基因变异;建立了酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析人血清中SCT400和利妥昔单抗的药物浓度和免疫原性,同时建立了UPLC-MS/MS法测定人血清中SCT400药物浓度,比较两种检测方法一致性。上述研究的进行为这两种药物的临床药代动力学研究以及治疗药物浓度监测、药效学等方面的研究提供了评价方法和合理用药依据。主要研究内容分为两个部分:第一部分:分析非小细胞肺癌脑膜转移患者血浆和脑脊液样本中奥希替尼的药物浓度及循环肿瘤DNA基因变异恶性肿瘤脑膜转移的患者具有病情进展快、治疗效果差及生存期短等特点。奥希替尼(AZD9291)是第叁代表皮生长因子受体—酪氨酸激酶抑制剂(epithelial growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)。为了进—步探索奥希替尼对于NSCLC肺癌脑膜转移患者的疗效,进行了以下研究:第一章:建立UPLC-MS/MS法测定NSCLC脑膜转移患者血浆和脑脊液中奥希替尼药物浓度。使用蛋白质沉淀进行样品前处理制备。方法学验证结果显示血浆样品和脑脊液样品奥希替尼在标曲曲线2-500 ng/mL和0.5-20 ng/mL范围内线性较好,血浆和脑脊液样品批间和批内精密度范围分别为1.96%-9.34%和3.04%-9.73%,准确度范围分别为-13.40%-4.40%和-9.75%-3.13%;血浆奥希替尼低和高质控浓度的相对提取回收率分别为101.5%和103.5%,脑脊液中的提取回收率分别为105.7%和94.9%;血浆和脑脊液中存在基质增强效应,但同一浓度不同个体以及不同浓度间的差异较为一致;血浆和脑脊液样品室温放置4h,4℃进样器放置12 h均稳定。方法学达到临床样本检测要求。完成全部方法学验证后,成功检测了1例经吉非替尼治疗失败后进展的非小细胞肺癌脑膜转移患者的4份血浆动态样本和8份脑脊液动态样本中的药物浓度。血浆样本中奥希替尼的平均药物浓度为105.13ng/mL,脑脊液样本中平均药物浓度1.60 ng/mL,从而计算得到的奥希替尼血脑屏障透过率为1.47 ± 0.3%。第二章:应用高通量二代测序技术对比分析非小细胞肺癌脑膜转移患者血浆和脑脊液中ctDNA的基因变异情况。使用1021个基因panel动态分析了 4份血浆和8份脑脊液样本中基因突变、拷贝数变异和融合等分子事件。在血浆和脑脊液样本中均检测到mTOR、EGFR、CHECK1、ABCC11和TP53 5种一致的基因突变,5种基因突变中,mTOR基因的平均突变频率最高。脑脊液样本中ctDNA的基因突变检出率高于血浆样本(50%和25%)。使用分子肿瘤负荷指数(molecular tumour burden index,mTBI)定量分析4份脑脊液样本中分子肿瘤负荷分别为(15.62%、3.93%、13.16%和16.41%)。综合分析不同治疗周期的脑脊液样本中的基因变异,5种突变基因的平均突变频率和mTBI与患者的治疗疗效呈负相关,药物浓度的动态变化与患者的治疗疗效呈正相关。提示脑脊液中ctDNA可以作为监测脑膜转移患者的疗效预测生物标志物。第二部分:分析人血清中重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液(SCT400)与利妥昔单抗的药物浓度和免疫原性神州细胞工程有限公司研制的重组人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体注射液SCT400(SCT400为产品内部编码)是一种人鼠嵌合IgG1型抗CD20单克隆抗体,能特异性地与跨膜抗原CD20结合。SCT400的临床前和I期临床研究结果显示SCT400和已上市的药物利妥昔单抗在质量、临床前药效、临床药代动力学特征、安全性评价等方面,二者具有高度相似和可比性。本研究旨在进一步比较SCT400与利妥昔单抗注射液在CD20阳性B细胞非霍奇金淋巴瘤患者单次给药的药代动力学特征、药效学及安全性。具体研究内容如下:第一章:分析人血清中两种抗CD20单克隆抗体药物的药物浓度。首先,建立ELISA法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的浓度。方法学验证结果显示SCT400和利妥昔单抗在标准曲线1.56-50ng/mL范围内线性良好,SCT400批内和批间精密度范围为3.52%-16.32%,准确度范围为-19.70%-8.14%;利妥昔单抗批内和批间精密度范围为1.74%-22.55%,准确度范围为-22.02%-15.50%;未发现明显基质干扰现象;不同储存条件下,SCT400与利妥昔单抗保存稳定;不同稀释倍数浓度间平行性良好。该方法已经成功用于临床试验样本中SCT400和利妥昔单抗药物浓度检测。其次,建立UPLC-MS/MS法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的浓度。使用酶解技术,筛选出了 SCT400的特征性肽段,合成特征性肽段标准品,建立了UPLC-MS/MS检测人血清中SCT400药物浓度的方法,完成部分方法学验证,检测了临床样本,进行两种方法的一致性评价。第二章:分析人血清中两种抗CD20单克隆抗体药物免疫原性。建立ELISA法测定人血清中SCT400与利妥昔单抗的免疫原性。方法学验证结果显示使用阳性抗体配制标准曲线,在标准曲线3.13-1O0ng/mL范围内线性良好,SCT400包被检测的阳性抗体的批间和批内测定准确度范围为-9.53%-13.02%,精密度范围为0.73%-15.47%;利妥昔单抗包被检测的阳性抗体的批间和批内测定准确度范围为-9.13%-12.36%,精密度范围为1.54%-16.84%;未发现明显基质干扰现象;不同储存条件下,阳性抗体保存稳定。耐药性结果显示,质控浓度为80ng/mL的阳性抗体,在不同浓度SCT400和利妥昔单抗药物存在下,当药物浓度为12.5μg/mL时,阳性抗体检测值低于筛选阈值,存在假阴性的结果,其摩尔比(Mol.Ratio)约为1:156;质控浓度为8ng/mL的阳性抗体,在不同浓度SCT400和利妥昔单抗药物存在下,当SCT400药物浓度为3.125μg/mL,利妥昔单抗药物浓度为1.5625μg/mL时,阳性抗体检测值低于筛选阈值,存在假阴性的结果,其摩尔比(Mol.Ratio)约为1:390和1:195。该方法已经成功运用于临床试验样本的免疫原性检测。临床试验样本经过初筛,筛选出具有阳性抗体的血清样本,进一步进行确证试验,确证试验结束后,对于真正具有阳性抗体的样本进行抗体的滴度检测。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-01）
樊晔,田新贵,薛春燕,刘铭龙,周志超[2]（2016）在《运用表位嵌合型3型腺病毒载体制备肠道病毒71型单克隆抗体》一文中研究指出目的制备针对肠道病毒71型(EV71)的单克隆抗体(m Ab)。方法将六邻体中同时嵌入EV71 SP55与SP70两个中和表位的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备m Ab。用病毒微量中和实验、间接ELISA、Western blot法和直接免疫荧光染色法进行鉴定。结果获得了4株分泌EV71特异性m Ab的杂交瘤细胞,D2C9、2C4、I2G2、I12C3,其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价为1∶8 000 000,其余3株为1∶500 000;Western blot法和ELISA结果表明4株m Ab均识别EV71病毒VP1蛋白。D2C9针对SP70表位,2C4、I12C3、I2G2针对SP55表位;直接免疫荧光实验结果显示4株m Ab均能与EV71特异性结合,而与柯萨奇病毒16型(Cox A16)不结合。结论获得了对EV71亲和力高、特异性好并且与Cox A16无交叉反应的m Ab。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2016年08期）
宋益,朱丽娜,高崧,刘秀梵[3]（2008）在《嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性》一文中研究指出【目的】本研究旨在构建嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆。【方法】利用PCR技术扩增PCV2 ORF2,克隆入缺失PCV1 ORF2的pSK-PCV1△ORF2中,得到pSK-sPCV1-2。该重组质粒中包含嵌合型PCV1-2全基因组,通过不完全酶切的方法,将嵌合型PCV1-2全基因组串联入pSK载体中,得到含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。【结果】经序列测定,获得含串联双拷贝的嵌合型PCV1-2感染性DNA克隆。PCV1-2嵌合病毒接种BALB/c小鼠,用间接ELISA方法对接种后7、14、21、28、35、42d的小鼠进行血清抗体检测。结果显示从接种后14d开始,即有部分小鼠产生了针对PCV2Cap蛋白的特异性抗体;至接种后42d,几乎全部接种小鼠的血清均呈阳性。【结论】构建了PCV1-2型感染性DNA克隆,该嵌合病毒能够激发机体产生体液免疫应答。(本文来源于《微生物学报》期刊2008年09期）
艾丽梅,任汉云,石永进[4]（2007）在《人鼠嵌合型CD20单克隆抗体增强树突状细胞诱导抗淋巴瘤CTL免疫效应研究》一文中研究指出本研究利用人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤的靶向作用特点和其人源Fc段结合人树突状细胞(DC)的特点,探讨抗CD20单克隆抗体激发人DC呈递肿瘤抗原从而诱导抗淋巴瘤的细胞免疫效应。用人体外周血单个核细胞(MNC)体外诱导DC生成。对高表达CD20的人淋巴瘤细胞株(Raji)分别进行抗CD20单克隆抗体单独作用(R组)、加热诱导凋亡(A组)、诱导凋亡同时加用抗CD20单克隆抗体作用(R+A组)。经上述处理的肿瘤抗原分别负载于DC,应用透射电子显微镜观察DC对肿瘤抗原的吞噬作用,用抗原处理的DC进行自体混合淋巴细胞反应,应用ELISPOT分析效应细胞-干扰素产生和用MTT法分析效应细胞对Raji靶细胞的杀伤作用。结果表明:R组处理的DC无明显吞噬现象,A组中易见DC吞噬凋亡小体,而R+A组中DC吞噬较多的细胞碎片。流式细胞术检测显示,3个实验组DC上的CD80、CD86、HLA-DR表达高于对照组,差别显着(p<0.05),其中R+A组的CD86表达阳性率明显大于R组和A组(p<0.05)。淋巴细胞表面抗原检测结果显示,所有实验组CD8+细胞的比例均明显高于对照组(p<0.05),且应用抗CD20单克隆抗体的实验组(R组和R+A组)CD56+细胞数均有所增加,与不用抗CD20单克隆抗体组比较差别显着(p<0.05)。ELISPOT方法证明,各实验组产生γ-干扰素的细胞数均高于对照组,且当效靶比为1∶10时,R+A组斑点数明显高于其它组(p<0.05)。MTT法测定杀伤实验结果表明,各实验组对Raji细胞的杀伤率均较对照组增加,其中R+A组的杀伤率高于R组和A组,具有显着统计学差异(p<0.05)。结论:抗CD20单克隆抗体能够介导DC产生抗淋巴瘤效应,即激活并扩增肿瘤特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和自然杀伤细胞(NK),抗CD20单克隆抗体同时加凋亡诱导处理肿瘤细胞作为抗原冲击树突状细胞,能进一步增强抗淋巴瘤的细胞免疫效应。(本文来源于《中国实验血液学杂志》期刊2007年06期）
王丽[5]（2007）在《嵌合型单克隆抗体治疗非何杰金氏淋巴瘤的护理》一文中研究指出[目的]观察嵌合型单克隆抗体(美罗华)治疗非何杰金氏淋巴瘤的有效性、安全性、注意事项及护理。[方法]将50例非何杰金氏淋巴瘤病人随机分为观察组与对照组各25例,对照组行常规放、化疗,观察组应用美罗华诱导缓解治疗,观察两组的疗效及不良反应。[结果]观察组完全缓解(CR)15例(60%),部分缓解(PR)6例(24%),总有效率84%,疗效明显高于对照组(P<0.05)。[结论]美罗华治疗非何杰金氏淋巴瘤安全、高效,可显着改善病人生活质量。(本文来源于《家庭护士》期刊2007年21期）
宋益[6]（2005）在《嵌合型猪圆环病毒2型感染性DNA克隆的构建及其免疫原性研究》一文中研究指出猪圆环病毒1型(porcine circovirus type 1,PCV1)无致病性,广泛存在于猪群中;猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是引起猪断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)等相关疾病的重要病原。 猪圆环病毒ORF2基因编码病毒的主要结构蛋白Cap蛋白,该蛋白具有良好免疫原性。PCV1和PCV2 ORF2基因序列的核苷酸同源性为67%。两种血清型的Cap蛋白上存在共同的抗原决定簇,但两者没有抗原交叉性,因而是区分PCV1和PCV2的重要蛋白。 本研究利用PCR技术,分别从PCV1、PCV2毒株中扩增PCV1全基因组及PCV2 ORF2基因,并克隆入转移载体中,根据蓝白筛选及限制性酶酶切分析得到分别含有PCV1和PCV2 ORF2基因的重组质粒,对重组质粒中插入的片段进行序列测定,结果表明插入的序列与公开发表的序列完全一致。将PCV1全基因组克隆入pBluescript SK(pSK)载体,PCR扩增缺失PCV1 ORF2的基因组pSK-PCV1△ORF2,将该基因组与PCV2 ORF2基因连接,得到pSK-PCV1△ORF2-PCV2-ORF2(即pSK-sPCV1-2)重组质粒。用Kpn Ⅰ对pSK-sPCV1-2质粒进行部分酶切,获得含有PCV1△ORF2-PCV2-ORF2(即嵌合型PCV1-2全基因组)全基因组单拷贝的线性载体,去磷酸化后与另一段PCV1△ORF2-PCV2-ORF2全基因拷贝连接,获得嵌合型感染性PCV1-2DNA克隆(即pSK-dPCV1-2)。对该重组质粒进行酶切分析和核苷酸序列分析,结果表明插入的片段与预期一致。用脂质体法将构建的重组质粒转染Dulac细胞(无PCV1污染)、PK-15细胞(PCV1污染),应用PCR对转染细胞中PCV2 ORF2基因检测,经5次传代,在细胞中均能检测出PCV2 ORF2基因;间接免疫荧光试验(IFA)观察,发现转染后的细胞(本文来源于《扬州大学》期刊2005-05-01）
平宝红,陈琪,周淑芸,王丽[7]（2002）在《嵌合型单克隆抗体CD_(20)诱导难治性套细胞淋巴瘤完全缓解一例》一文中研究指出患者 ,男 ,5 3岁 ,马来西亚华侨。于 1997年 2月无明显诱因出现左上腹疼痛、不适 ,就诊新加坡国立医院 ,经检查发现颈部淋巴结、脾肿大 ,2月 2 7日在新加坡国立医院行颈部淋巴结活检 ,同时行免疫组化染色检查 :Ｌ2 6 (+) ,ＣＤ2 0(本文来源于《中华血液学杂志》期刊2002年10期）
金人一[8]（1988）在《美日两公司合作开发诊断与治疗癌症的嵌合型单克隆抗体》一文中研究指出美国加利福尼亚州圣莫尼卡的国际遗传工程公司,即人们习称的Ingene公司找到了另一个大的合作者共同进行它提出的嵌合型单克隆抗体计划。它和日本大阪的绿十字公司已就开发诊断与治疗癌症的嵌合型单克隆抗体签订了一项研究与开发协议。这抗体由小鼠抗体的可(本文来源于《生物技术通报》期刊1988年12期）
嵌合型克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的制备针对肠道病毒71型(EV71)的单克隆抗体(m Ab)。方法将六邻体中同时嵌入EV71 SP55与SP70两个中和表位的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备m Ab。用病毒微量中和实验、间接ELISA、Western blot法和直接免疫荧光染色法进行鉴定。结果获得了4株分泌EV71特异性m Ab的杂交瘤细胞,D2C9、2C4、I2G2、I12C3,其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价为1∶8 000 000,其余3株为1∶500 000;Western blot法和ELISA结果表明4株m Ab均识别EV71病毒VP1蛋白。D2C9针对SP70表位,2C4、I12C3、I2G2针对SP55表位;直接免疫荧光实验结果显示4株m Ab均能与EV71特异性结合,而与柯萨奇病毒16型(Cox A16)不结合。结论获得了对EV71亲和力高、特异性好并且与Cox A16无交叉反应的m Ab。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嵌合型克隆论文参考文献
[1].宋媛媛.抗肿瘤药物奥希替尼和重组人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体的药物浓度分析和药效学研究[D].北京协和医学院.2018
[2].樊晔,田新贵,薛春燕,刘铭龙,周志超.运用表位嵌合型3型腺病毒载体制备肠道病毒71型单克隆抗体[J].细胞与分子免疫学杂志.2016
[3].宋益,朱丽娜,高崧,刘秀梵.嵌合型猪圆环病毒1-2型感染性DNA克隆的构建及其对小鼠的免疫原性[J].微生物学报.2008
[4].艾丽梅,任汉云,石永进.人鼠嵌合型CD20单克隆抗体增强树突状细胞诱导抗淋巴瘤CTL免疫效应研究[J].中国实验血液学杂志.2007
[5].王丽.嵌合型单克隆抗体治疗非何杰金氏淋巴瘤的护理[J].家庭护士.2007
[6].宋益.嵌合型猪圆环病毒2型感染性DNA克隆的构建及其免疫原性研究[D].扬州大学.2005
[7].平宝红,陈琪,周淑芸,王丽.嵌合型单克隆抗体CD_(20)诱导难治性套细胞淋巴瘤完全缓解一例[J].中华血液学杂志.2002
[8].金人一.美日两公司合作开发诊断与治疗癌症的嵌合型单克隆抗体[J].生物技术通报.1988
标签：奥希替尼; SCT400; 利妥昔单抗; 超高效液相色谱串联质谱;