猪肠道α冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立猪肠道α冠状病毒（SeACoV）荧光定量检测方法,本研究采用RT-PCR方法扩增SeACoV N基因保守区序列,将其克隆至p EASY-Blunt载体,构建重组质粒p EASY-Blunt-PA-N作为标准阳性质粒,以其为模板建立SeACoV的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,并进行特异性、敏感性和重复性试验验证。结果显示,建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法 Ct值与标准品模板在9.47×101拷贝/μL～9.47×107拷贝/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.91。本实验建立的方法对PEDV、TGEV、PDCo V、PRRSV等猪常见腹泻病样品检测无扩增,表明特异性良好;敏感性试验结果显示,该方法检测下限可达到9.47×101拷贝/μL;重复性试验结果显示,组内变异系数在0.82%～1.01%,组间变异系数在1.20%～1.69%,重复性较好。采用本研究建立的方法对广西和云南等地70份临床样品进行检测,结果显示除阳性对照外,临床样品均为阴性,表明该病毒尚未传播至广东以外的省份。本实验首次建立了SeACoV N基因SYBR Green I荧光定量PCR检测方法,为SeACoV快速检测和病毒感染预防提供技术手段。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵冠宇,黄海鑫,张世亨,赵翠青,陆祎婷,夏秀秀,倪铭,李笨,汪伟,曹亮,郑敏,孙文超,鲁会军,金宁一

关键词: 猪肠道冠状病毒,基因,荧光定量

来源: 中国预防兽医学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林大学动物医学学院,军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所,温州大学病毒学研究所,广西动物疫病预防控制中心

基金: 国家重点研发计划项目(2018YFD0500104),浙江省青年基金项目(LQ19C180001)

分类号: S852.651

页码: 35-39

总页数: 5

文件大小: 284K

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