生殖支原体MgPa经CypA-CD147-ERK诱导人尿道上皮细胞分泌促炎症因子

论文摘要

研究背景:生殖支原体（Mycoplasma genitalium,Mg）是由Tully等于1981年分离到的一种支原体。它是一类缺乏细胞壁但能够自我复制的最小原核细胞型微生物。Mg经由其膜蛋白结合在宿主细胞膜上,是介导Mg致病的基础。生殖支原体黏附蛋白（M.genitalium protein of adhesion,MgPa）是含量最多的膜蛋白,Mg可能经MgPa黏附或侵入宿主细胞从而引起致病。本课题组前期研究表明人尿道上皮细胞（SV-HUC-1）膜上的亲环蛋白（Cyclophilin A,CypA）是MgPa的受体蛋白,MgPa与其受体特异结合能介导Mg侵入宿主细胞,但其具体的致病机制尚未阐明。本课题旨在研究MgPa与宿主细胞膜上的CypA相互作用后对宿主细胞的影响,并揭示其可能的信号通路,从而为Mg的防治提供新的思路和靶点。研究目的:研究MgPa诱导SV-HUC-1分泌的胞外CypA（eCypA）与CD147相互作用,进而经ERK1/2-NF-κB通路诱导细胞分泌促炎症因子,以阐释Mg可能的致病机制。研究方法:（1）免疫印迹实验（Western blot,WB）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MgPa诱导细胞分泌eCypA蛋白的水平;（2）WB和间接免疫荧光法检测MgPa不同时间诱导CypA和CD147的表达情况;（3）间接免疫荧光法和免疫共沉淀法验证CypA-CD147的相互作用;（4）WB检测CypA-siRNA、CD147-siRNA转染细胞后的表达水平;（5）实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和ELISA检测MgPa处理细胞不同时间后促炎症因子的表达水平;（6）WB检测eCypA对细胞ERK、JNK、P38和IκBα蛋白的磷酸化水平的影响;（7）间接免疫荧光法和WB检测NF-κB P65的核转位;（8）ELISA和RT-qPCR检测JNK抑制剂SP600125、ERK抑制剂PD98059、NF-κB抑制剂BAY11-7082和p38抑制剂SB202190对MgPa诱导细胞产生促炎症因子的影响。研究结果:（1）不同浓度的MgPa刺激细胞后,其eCypA的量逐渐增多,且MgPa浓度为20μg/mL时达到峰值,此为最适的刺激浓度;（2）WB和ELISA的结果表明MgPa能诱导细胞表达CypA和分泌eCypA,且随时间的延长而逐渐增加,在32h时达到峰值;（3）间接免疫荧光试验的结果表明CypA和CD147的表达量随刺激时间延长而增加,在刺激24h时表达量最高;（4）间接免疫荧光法和免疫共沉淀试验的结果表明在MgPa诱导下CypA和CD147能在SV-HUC-1细胞中共定位;（5）WB的结果表明CypA-siRNA和CD147-siRNA转染细胞后能干扰CypA和CD147的表达;（6）不同浓度的MgPa能诱导IL-1β,IL-6,TNF-α和MMP-9蛋白及其mRNA的表达增加;（7）SV-HUC-1细胞转染CypA-siRNA、CD147-siRNA后可明显抑制IL-1β,IL-6,TNF-α和MMP-9的表达;（8）MgPa诱导细胞IκBα和p-ERK磷酸化水平明显增加;（9）WB和间接免疫荧光试验的结果表明MgPa诱导SV-HUC-1细胞的p65发生核转位。（10）NF-κB抑制剂和ERK抑制剂预处理细胞后可明显抑制IL-1β,IL-6,TNF-α和MMP-9的蛋白与mRNA的表达。结论:生殖支原体MgPa能诱导SV-HUC-1细胞分泌eCypA,并经CypA-CD147-ERK-NF-κB信号通路诱导SV-HUC-1细胞表达促炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α和MMP-9。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李玲玲

导师: 曾焱华

关键词: 生殖支原体,细胞,亲环蛋白

来源: 南华大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 南华大学

基金: 国家自然科学基金(31370207),国家自然科学基金(81871256)

分类号: R375

DOI: 10.27234/d.cnki.gnhuu.2019.000969

总页数: 81

文件大小: 4245K

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