导读:本文包含了蛋白酶突变株论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白酶,突变,胰蛋白酶,突变体,蛋白,白鲢,曲霉。
蛋白酶突变株论文文献综述
程可利,刘晓,李素霞[1]（2017）在《对SDS稳定的V8(V125T)蛋白酶突变体的高效表达及性质研究》一文中研究指出谷氨酰内切酶能特异性切割谷氨酸、天冬氨酸残基羧基端结合的肽键。将含有V8蛋白酶突变体(V125T)基因的表达质粒的重组大肠杆菌BL21(DE3),在50L发酵罐中发酵,融合蛋白为可溶性表达,可得菌湿重50g/L,相对蛋白表达量为33%。融合蛋白采用GST亲和纯化、肠激酶激活、DEAE-FF阴离子交换层析,得到纯的V8(V125T)突变体,经纯化后可获得0.998mg蛋白/g菌(湿重),比活为13.47 U/mg pro.纯化过程的酶活回收率达到了97.9%。对纯酶进行酶学性质分析,以Z-Phe-Leu-Glu-p NA作为底物测得V8(V125T)蛋白酶的Km为0.339mmol/L,Vmax为16.642μmol/min。其最适pH为8.0,在pH4.0~10.0之间较稳定;最适反应温度在45℃,12h内在4~35℃有很好的温度稳定性;25℃条件下1mmol/L的金属离子对酶具有不同程度的影响,其中Fe~(3+)的抑制作用最强;2mol/L尿素及1mmol/L EDTA对酶活性无影响,在0.1%SDS中保存12h、在0.5%SDS中4h和在1%SDS中1h,活性均能维持90%以上,在0.5%,0.1%SDS保存12h,仍能保持80%和64%的活性,与未突变的重组V8蛋白酶相比,该突变体对SDS的耐受性得到极大提高。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2017年04期）
杨敏,黄潇,张一唯,平宪卿,龙军[2]（2015）在《重组猪胰蛋白酶突变体基因在大肠杆菌中的克隆、表达与活性分析》一文中研究指出胰蛋白酶是肽链内切酶,专一性水解多肽链中赖氨酸和精氨酸羧基端形成的肽键。胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素,在胰岛素的生产中发挥着重要作用,但由于胰蛋白酶对赖氨酸和精氨酸的切割选择性差别不大,会在切割反应中产生副产物。所以研究开发对底物切割选择性增强的胰蛋白酶,减少胰岛素生产过程中副产物的产生具有较高的应用价值。以猪源胰蛋白酶原基因为模板,通过重迭延伸产生特异位点突变的方法扩增突变胰蛋白酶原(Tg M)基因,该基因编码猪胰蛋白酶的Ser172Ala突变体。将Tg M基因插入到表达载体p ET28a中,转化E.coli DH5α,利用卡那霉素抗性筛选出构建成功的重组质粒p ET28a-Tg M并将其转化E.coli BL21(DE3),构建含Tg M基因的工程菌株并诱导表达。14%SDS-PAGE显示,重组菌经乳糖诱导后表达了目的蛋白,并以包涵体形式存在。包涵体经尿素裂解液变性后,通过稀释法复性,复性液超滤处理并用胰蛋白酶切割,经DEAE-FF离子交换层析分离纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE分析,结果表明与胰蛋白酶条带位置相同;用紫外分光光度法检测酶活力,测得突变胰蛋白酶的酶活力为1 300 U/m L,比活力为1 566.27 U/mg。将最终纯化获得的突变胰蛋白酶用于胰岛素原的切割,HPLC检测分析结果表明,突变胰蛋白酶对底物中Arg的切割选择性大于Lys,因此在对胰岛素原的切割反应中,副产物的量明显减少。(本文来源于《药物生物技术》期刊2015年04期）
司晓光,郑博,王小霞,唐丹,郭刚[3]（2014）在《米曲霉3.042突变株高产酸性蛋白酶的发酵条件优化》一文中研究指出针对常压室温等离子体(ARTP)诱变选育得到的突变株B-2,比较了其与出发菌株米曲霉(Aspergillus oryzae)3.042菌株在微观形态、菌落形态以及酸性蛋白酶活力方面的变化。采用核酸定量的方法比较了在固态发酵过程中2菌株的菌体量变化。以酸性蛋白酶活力提高为目标,优化了突变株B-2的固态发酵培养基组分及发酵条件。(本文来源于《食品科技》期刊2014年09期）
刘回民,程国栋,陈方奇,郑明珠,詹冬玲[4]（2014）在《玉米半胱氨酸蛋白酶突变体W308C的原核表达和酶学性质表征》一文中研究指出通过对玉米半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease from Zea mays,zmCP1)同源模建和底物对接研究发现,W308位点在木瓜蛋白酶家族(C1家族)高度保守,且位于zmCP1催化叁联体残基N306位点附近,与绝大多数底物形成π-π键,可参与底物和酶活性中心的结合,是该酶的关键位点;结合Rosetta design程序设计,对W308位点进行突变,获得W308C突变体,并在大肠杆菌BL21中表达。酶学性质表征实验结果表明:突变体W308C的最适温度为55℃,最适pH 6.0;在70、80、90℃下的半衰期为75.33、57.24、40.29 min,分别是野生型的1.21、1.19、1.01倍;突变体W308C和野生型的特异性常数Kcat/Km分别为11.02、5.92 L/(μmol·min),催化活性提高了0.86倍。(本文来源于《食品科学》期刊2014年15期）
朱娜,冯利杰,王海萍,沈玉君,沈玉先[5]（2014）在《α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平》一文中研究指出目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2014年07期）
方杰[6]（2014）在《TEV蛋白酶突变体构建及性质分析》一文中研究指出烟草蚀斑病毒蛋白酶具有较高作用序列专一性,主要用于切除融合标签,但是野生型蛋白酶在大肠杆菌中表达的可溶性不高,为此,本文构建了1种氨基酸突变体和15种含有1个或多个精氨酸同义密码子突变体,分析并比较了不同突变体蛋白的重组表达、部分突变的酶活性和专一性,获得以下结果：1.构建了双突变体(L56V/S135G),表达的重组蛋白N端含有组氨酸标签,C端分别含有组氨酸标签,GFP报告蛋白,或S-tag,分别用于检测蛋白的水溶性表达和利用Ni-NTA亲和层析快速纯化蛋白。2.通过流式细胞仪检测双突变体的水溶性表达水平低于叁突变体(T17S/N68D/I77V)和五突变体(T17S/L56V/N68D/I77V/S135G),但高于野生型蛋白。提高诱导温度后,和其它形式蛋白相比,二突变体蛋白酶活性不受影响,而其它突变体和野生型蛋白酶活降低。3.纯化了野生型和突变体蛋白,分析双突变体蛋白酶的性质,它的催化常数高于野生型蛋白酶,但低于叁突变体和五突变体,热稳定性仅低于五突变体,在2M的尿素和盐酸胍存在下,蛋白酶活性保持最高。4.在1mM IPTG和37℃诱导后,大肠杆菌所有构建的蛋白酶表达几乎为包涵体,但是共表达分子伴侣后,二突变体恢复的表达水平最高。5.在五突变体基础上,构建了15个精氨酸同义密码子突变体,用大肠杆菌优先表达的密码子取代编码蛋白酶的稀有密码子,同时构建了C端含有GFP,以及部分突变体含C端S-tag的融合表达载体。6.利用SDS-PAGE、蛋白印迹和GFP荧光强度检测蛋白在上清和沉淀中表达,重组突变体显示不同的差异性表达,同义突变对蛋白的可溶性表达和蛋白折迭都有影响。7.利用大肠杆菌RosettaTM(DE3)菌株提高内源稀有tRNA表达水平,能提高个别突变体可溶性表达,但同时也降低一些突变体的水溶性表达。利用C-端的融合S-tag检测到一些突变体蛋白表达为包涵体是由于蛋白翻译速度增加所致。8.纯化了部分突变体蛋白,电泳显示蛋白纯度较高,但提高内源稀有tRNA会降低纯化的蛋白酶活性,同时降低个别蛋白酶同义突变体的识别序列专一性。从同义突变文库中初步筛选出比野生型表达量和活性都提高的突变体。综上所述,本研究证明通过氨基酸突变获得的蛋白酶具备很好的水溶性、活性和稳定性仍面临巨大挑战,而同义突变和提高内源稀有tRNA水平对蛋白酶的可溶性表达、活性和专一性具有不同影响,通过扩大同义突变体文库量,有望筛选出改善水溶性、活性和稳定性的突变体。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2014-06-01）
马强[7]（2014）在《重组人胰蛋白酶突变体及其稳定性的研究》一文中研究指出胰蛋白酶(Trypsin,EC 3.4.21.4)是一种应用广泛的蛋白水解酶,通过识别精氨酸或赖氨酸等侧链上的正电荷,特异性水解其羧基端的肽键,是一种肽链内切酶。在人体内,已知存在有叁种类型的胰蛋白酶。本论文以人阴离子胰蛋白酶(human anionic trypsin,hT2)为基础,为提高其稳定性,进行了定向突变。成功构建表达了 mhT2-S 139C、mhT2-S139C-S206C-R122L、mhT2-S139C-S206C-S121A、mhT2-S121A-R122L、mhT2-S 139C-S206C-S121 A-R122L、mhT2-S 121A突变体并对其进行了纯化与性质研究。通过将人阴离子胰蛋白酶突变体与野生型人阳离子胰蛋白酶(human cationic trypsin,hT1)及hT2及其突变体hT2-R122L、hTl-C139S-C206S的酶学性质上的比较。阐明了 S139C-S206C这一对二硫键对于人胰蛋白酶稳定性的影响。得到的突变体mhT2-S139C-S206C-R122L表现出了很高的热稳定性,在50℃保温12h后为残余酶活为82%,在60℃保温12h后仍可以保留60%以上的活性。相对于胰蛋白酶的自切环上自切位点R122,本实验中同时研究了胰蛋白酶的自切环上位点S121A对于降低hT2自降解的作用。通过比较mhT2-S139C-S206C-R122L和mhT2-S139C-S206C-S121A,发现S121A同样可以起到提高hT2稳定性的作用。本实验中最终得到了复合突变体mhT2-S139C-S206C-S121A-R122L,突变体酶在pH3-11,25℃保存2h,酶的活力均保持在80%以上。pH3,60℃保存12h残余酶活仍可保持在70%以上。突变体酶表现出了高温耐受性,及pH耐受范围广的特点,为其广泛应用提供了保障。(本文来源于《华东理工大学》期刊2014-04-17）
田宝玉,郑汉坤,黄薇,蓝灿华,黄建忠[8]（2012）在《不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响》一文中研究指出本实验采用芽孢杆菌丝氨酸蛋白酶及其突变产物对淡水鱼类白鲢鱼肉蛋白进行酶解,对比分析了酶的不同突变产物对水解过程水解度的影响及其酶解产物的抗氧化活性变化。大部分蛋白酶在水解反应前40 min内反应速率较高,水解度迅速增加,40min~120 min之间水解曲线变得平缓甚至下降。其中细菌丝氨酸蛋白酶突变子239对白鲢鱼肉蛋白的水解能力最强,其2 h水解产物水解度最大,为11.51%;突变蛋白酶33的水解能力最差,最终水解产物的水解度只有3.08%。细菌丝氨酸蛋白酶及其突变酶的酶解产物均具有较高的抗氧化性,其中蛋白酶突变子166的酶解产物抗氧化活性最强,经测定其DPPH清除能力为91.02%,蛋白酶突变子169的酶解产物抗氧化活性最弱,DPPH清除能力为61.41%。结果表明,与叁联体催化活性中心相关的突变对丝氨酸蛋白酶的水解能力和水产品蛋白的水解度影响较大,而酶底物特异性方面的改变则影响酶解产物的抗氧化活性。(本文来源于《现代食品科技》期刊2012年10期）
林敏怡,周佳暖,习平根,姜子德,张炼辉[9]（2011）在《水稻细菌性基腐病菌致病蛋白酶突变体筛选及相关基因的功能分析》一文中研究指出水稻细菌性基腐病是由Dickeya zeae引起的一种重要植物病害,在我国及东南亚国家许多稻区严重发生,造成严重减产,带来巨大经济损失。目前对其的研究主要集中在细菌学和生物学特征,然而,对其寄主特性和致病机制的了解还相当少。本研究利用D.zeae菌株EC1构建了Tn5插入突变体库,筛选出5个胞外蛋白酶减少或缺失的突变体,利用hiTAIL-PCR方法获得突变基因的全序列,其中,Em72和Em274突变在相同的基因中,该基因全长1434 bp,编码477个氨基酸,Blastp比对结果与Dickeyazeae Ech1591的蛋白酶Serralysin有63%的同源性;EC1 Serralysin基因被Tn5突变后蛋白酶减少,对水稻种子萌发的抑制能力降低,同时对马铃薯和大白菜的致病力也降低了。RT-PCR分析表明,Tn5插入突变的Serralysin基因不表达。基因功能互补结果证实了Serralysin与D.zeae菌株EC1的致病性密切相关。Em1196突变在一个长为927 bp的基因中,编码308个氨基酸,Blastp比对结果与Dickeya zeae Ech1591的假定蛋白Dd1959-1508有96%的同源性;Em1217-2突变在一个长为1230 bp的基因中,编码409个氨基酸,Blastp比对结果与Dickeya zeae Ech1591的majior facilitator superfamilyMFS-1有88%的同源性。这两突变不仅影响蛋白酶产生,还影响其他表型,失去抑制水稻种子萌发的能力,同时对马铃薯和大白菜的致病力也大大降低。以上结果为进一步研究水稻细菌性基腐病菌胞外蛋白酶致病机理及其调控机理奠定理论基础。(本文来源于《中国植物病理学会2011年学术年会论文集》期刊2011-08-18）
[10]（2011）在《中国科学家从玉米中提取出抗艾蛋白酶突变体》一文中研究指出艾滋病病毒(HIV)存在潜藏机制可以长期潜伏在细胞中而逃逸宿主免疫系统的攻击,目前已上市的抗HIV药物均不能选择性地杀伤感染细胞而根除病毒。核糖体失活蛋白(RIP)具有RNA N-糖苷酶活性,可以阻(本文来源于《广西科学》期刊2011年01期）
蛋白酶突变株论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
胰蛋白酶是肽链内切酶,专一性水解多肽链中赖氨酸和精氨酸羧基端形成的肽键。胰蛋白酶切割胰岛素原生成胰岛素,在胰岛素的生产中发挥着重要作用,但由于胰蛋白酶对赖氨酸和精氨酸的切割选择性差别不大,会在切割反应中产生副产物。所以研究开发对底物切割选择性增强的胰蛋白酶,减少胰岛素生产过程中副产物的产生具有较高的应用价值。以猪源胰蛋白酶原基因为模板,通过重迭延伸产生特异位点突变的方法扩增突变胰蛋白酶原(Tg M)基因,该基因编码猪胰蛋白酶的Ser172Ala突变体。将Tg M基因插入到表达载体p ET28a中,转化E.coli DH5α,利用卡那霉素抗性筛选出构建成功的重组质粒p ET28a-Tg M并将其转化E.coli BL21(DE3),构建含Tg M基因的工程菌株并诱导表达。14%SDS-PAGE显示,重组菌经乳糖诱导后表达了目的蛋白,并以包涵体形式存在。包涵体经尿素裂解液变性后,通过稀释法复性,复性液超滤处理并用胰蛋白酶切割,经DEAE-FF离子交换层析分离纯化。纯化蛋白经SDS-PAGE分析,结果表明与胰蛋白酶条带位置相同;用紫外分光光度法检测酶活力,测得突变胰蛋白酶的酶活力为1 300 U/m L,比活力为1 566.27 U/mg。将最终纯化获得的突变胰蛋白酶用于胰岛素原的切割,HPLC检测分析结果表明,突变胰蛋白酶对底物中Arg的切割选择性大于Lys,因此在对胰岛素原的切割反应中,副产物的量明显减少。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白酶突变株论文参考文献
[1].程可利,刘晓,李素霞.对SDS稳定的V8(V125T)蛋白酶突变体的高效表达及性质研究[J].中国生物工程杂志.2017
[2].杨敏,黄潇,张一唯,平宪卿,龙军.重组猪胰蛋白酶突变体基因在大肠杆菌中的克隆、表达与活性分析[J].药物生物技术.2015
[3].司晓光,郑博,王小霞,唐丹,郭刚.米曲霉3.042突变株高产酸性蛋白酶的发酵条件优化[J].食品科技.2014
[4].刘回民,程国栋,陈方奇,郑明珠,詹冬玲.玉米半胱氨酸蛋白酶突变体W308C的原核表达和酶学性质表征[J].食品科学.2014
[5].朱娜,冯利杰,王海萍,沈玉君,沈玉先.α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平[J].中国药理学通报.2014
[6].方杰.TEV蛋白酶突变体构建及性质分析[D].安徽农业大学.2014
[7].马强.重组人胰蛋白酶突变体及其稳定性的研究[D].华东理工大学.2014
[8].田宝玉,郑汉坤,黄薇,蓝灿华,黄建忠.不同蛋白酶突变子对鲢鱼蛋白酶解及产物抗氧化性的影响[J].现代食品科技.2012
[9].林敏怡,周佳暖,习平根,姜子德,张炼辉.水稻细菌性基腐病菌致病蛋白酶突变体筛选及相关基因的功能分析[C].中国植物病理学会2011年学术年会论文集.2011
[10]..中国科学家从玉米中提取出抗艾蛋白酶突变体[J].广西科学.2011
论文知识图
