导读:本文包含了酵母单杂交论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:酵母,转录,因子,文库,拟南芥,病原菌,体细胞。
酵母单杂交论文文献综述
徐晓兰,朱风丽,赖荣才,石林春,陈士林[1]（2019）在《赤芝LS基因酵母单杂交文库构建及其上游调控因子的筛选》一文中研究指出赤芝羊毛甾醇合酶(lanosterol synthase,LS)是灵芝叁萜生物合成甲羟戊酸途径(mevalonate pathway,MVA途径)中生成前体化合物——羊毛甾醇的关键酶,LS基因的转录调控可直接影响灵芝叁萜含量的高低。为了进一步研究赤芝MVA途径关键酶基因的转录调控机制,该研究利用酵母单杂交技术,筛选出赤芝LS基因上游的转录调控因子。提取赤芝全基因组DNA,PCR扩增LS启动子序列。由LS启动子构建诱饵载体,转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建灵芝酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选LS基因上游的转录调控因子。该实验共筛选出23个阳性克隆,经测序后与全基因组序数据库行blast比对,筛选出LS基因上游的候选调控因子8个,包括转录起始因子TFIIB,α/β折叠水解酶超家族、醛脱氢酶超家族、60S核糖体蛋白L21,ATP合成酶β亚基、微管结合蛋白Cript、蛋白酶体亚基β-1和转醛醇酶。这8个调控因子在灵芝叁萜生物合成路径中的调控作用尚未见报道,该研究为深入研究LS基因的表达调控机制提供了候选蛋白。(本文来源于《中国中药杂志》期刊2019年18期）
丁雅琦,谢桃,何业华,栾爱萍,李楚豪[2]（2018）在《菠萝体细胞胚发生相关转录因子AcSET3和AcRBL的酵母单杂交回转验证》一文中研究指出前期研究表明:AcSERK1是菠萝体细胞胚发生受体类激酶基因,在该基因转录起始位点(TSS)上游-921nt/-881nt区具有胚性细胞特异性启动活性。在此基础上,以-921nt/-881nt为诱饵,通过酵母单杂交从菠萝体细胞胚诱导时期的cDNA文库中初筛到了58个可能互作的阳性克隆。生物信息学分析以及定量分析结果表明:其中AcSET3和AcRBL可能是与胚性细胞特异性区段互作的基因。SET3编码组蛋白H3,H3的甲基化、乙酰化、磷酸化等在基因转录调控过程中发挥重要作用;RBL是响应胁迫反应蛋白的编码基因,其编码一种凝集素蛋白,能与半乳糖结合发挥相应功能。为明确这两个基因是否为菠萝体细胞胚发生相关转录因子基因,通过克隆和酵母单杂交进行了回转验证。以‘神湾’菠萝吸芽叶基诱导形成的非胚性愈伤组织为材料,经2,4-D胚性诱导20 d后,提取RNA,反转录成cDNA;利用软件PrimerPremier5.0分别在AcSET3和AcRBL的CDS两端设计1对特异性引物,使得插入片段扩增产物5′和3′最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(15～20 bp);用clontech的In-fusion连接酶在50℃下反应30 min,分别将AcSET3和AcRBL插入到pGADT7载体中,42℃热激转化至DH5α大肠杆菌,挑取阳性克隆进行PCR并测序鉴定。利用酵母单杂交系统将5μg带有Leu筛选标记的重组质粒pGADT7-AcSET3和pGADT7-AcRBL分别转入600μL含有诱饵重组质粒(-921nt/-881nt)的酵母菌株Y1H-Gold感受态中,30℃水浴30min诱导转化酵母感受态细胞,在营养缺陷型培养基SD/-Leu/-AbA 500 ng·mL-1进行筛选,30℃倒置培养3～5 d。将克隆得到的AcSET3(411 bp)和AcRBL(570 bp)的CDS分别正向插入到pGADT7载体中,通过双酶切及测序对重组质粒进行鉴定,确认pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL重组质粒构建成功。转化酵母后,挑取生长良好直径2～3 mm的单克隆进行菌落PCR,与重组质粒PCR产物片段大小一致,表明重组质粒pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL已转化到诱饵酵母菌株Y1H Gold中。转化菌株和阳性对照(pGADT7-53)在营养缺陷型培养基SD/-Leu/-AbA上生长良好,阴性对照(pGADT7空载)不能生长,表明pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL能够在宿主Y1H Gold酵母菌株中表达,并激活诱饵载体下游AUR报告基因的表达,从而使重组酵母菌株能在营养缺陷培养基上健康生长。并且表达产物AcSET3和AcRBL对宿主菌没有明显毒性,初步证实AcSET3和AcRBL与AcSERK1转录起始位点上游-921nt/-881nt存在互作关系。目前正在研究两个转录因子与AcSERK1启动子中胚特异性区段的结合情况,及它们在菠萝体细胞胚发生过程中的作用。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
郭荣荣,林玲,周思泓,韩佳宇,张瑛[3]（2018）在《夏黑葡萄VlTFL1A基因酵母单杂交文库构建及其上游基因的筛选》一文中研究指出【目的】VlTFL1A是葡萄3个TFL基因之一,该基因在葡萄花序形成过程中发挥重要作用。筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子,为研究该基因在调控葡萄成花中的机理奠定基础。【方法】由VlTFL1A的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建葡萄酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,筛选VlTFL1A启动子上游的调控因子。【结果】筛选出大于500 bp的9个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析,作用在VlTFL1A启动子上游的调控因子分别为:信号识别受体亚基、钙调蛋白相关蛋白、转酮醇酶、木葡聚糖糖基转移酶、F-box蛋白、冠毒素不敏感基因1(COI1)、UV-B诱导蛋白、重金属相关的异戊二烯蛋白39等8个蛋白和一个未知功能的蛋白。【结论】筛选出的作用在VlTFL1A启动子上游的9个调控因子在葡萄花序形成过程中的功能尚未见报道,为进一步研究VlTFL1A基因的表达调控机制提供了候选蛋白。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年08期）
李晓雪[4]（2018）在《应用酵母单杂交技术筛选柿DkPDC2互作转录因子的研究》一文中研究指出完全甜柿自然脱涩存在两种机理,分别为“稀释效应”和“凝固效应”。日本原产完全甜柿(日本甜柿)以“稀释效应”为主,而中国原产完全甜柿(中国甜柿)既有“稀释效应”又有“凝固效应”,而“凝固效应”可能在中国甜柿自然脱涩中具有更重要的作用。已有研究表明,DkPDC2是乙醛代谢途径中的关键基因,而乙醛与可溶性单宁结合形成不溶性单宁,但其调控机制尚不完全清楚。本试验以中国甜柿‘罗田甜柿’为研究试材,通过酵母单杂交cDNA文库筛选和互作分析,以期获得调控DkPDC2的转录因子与其影响中国甜柿自然脱涩的分子机制。主要研究结果如下。1.通过酵母文库筛选获得候选转录因子,将其命名为DkMYB9。通过酵母单杂试验和双荧光素酶试验,验证候选转录因子DkMYB9可以激活DkPDC2启动子活性,表明DkMYB9与DkPDC2存在相互作用。2.聚类分析发现候选转录因子DkMYB9与拟南芥MYB家族中具有抑制花青素合成功能的AtMYB3和AtMYB4等聚为一类;氨基酸序列比对分析,结果显示候选转录因子DkMYB9具有R2R3结构域和MYB-bHLH相互结合基序。不同脱涩类型柿品种中DkMYB9和DkPDC2表达模式分析,结果显示DkMYB9和DkPDC2在不同脱涩类型柿品种中表达模式相似。3.利用农杆菌介导的柿组培苗真空渗透法,瞬时超表达DkMYB9后,叶片可溶性单宁含量明显下降;qRT-PCR分析,结果表明原花青素生物合成途径相关基因下调表达,而乙醛生物合成途径相关基因上调表达。综上所述,候选转录因子DkMYB9通过上调表达乙醛生物合成相关基因,促使可溶性单宁含量降低,进一步证实“凝固效应”与中国甜柿自然脱涩过程具有密切的关系。该结果为研究柿原花青素生物合成的转录调控作用提供了科学依据。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
刘羽佳,孙剑明[5]（2017）在《利用酵母单杂交研究AtbHLH112上游调控基因》一文中研究指出酵母单杂交技术是研究DNA与蛋白质相互作用的经典方法,能够有效地分离鉴定与特异DNA序列识别结合的蛋白质。本研究利用酵母单杂交系统构建了AtWRKYs基因cDNA文库,筛选获得了与拟南芥抗逆境胁迫基因AtbHLH112启动子区域中W-box元件特异性识别互作的WRKY蛋白。结果为进一步研究AtbHLH112上游表达调控基因网络奠定了基础。(本文来源于《科学中国人》期刊2017年23期）
郭育强,刘姣,符少萍,段瑞军,李瑞梅[6]（2016）在《MeCWINV6酵母单杂交文库构建及其调控基因筛选》一文中研究指出MeCWINV6是木薯6个细胞壁转化酶基因之一。本研究中应用酵母单杂交技术筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子,为进一步研究该基因的表达调控提供基础。由MeCWINV6的启动子构建诱饵融合载体,转化酵母细胞构建诱饵菌株。运用SMART技术构建木薯酵母单杂交c DNA文库,再共转化诱饵菌株,经同源重组筛选MeCWINV6启动子的上游转录调节因子。构建的c DNA文库库容为7.08×106,插入片段大小在250~2 000 bp间。筛选大于1 000 bp的35个阳性克隆,经测序和Blast同源性分析筛选出锌指蛋白、组氨酸蛋白H1.2和AT-hook核定位蛋白叁个转录因子以及一个线粒体受体TOM5。为进一步研究MeCWINV6基因的表达调控机制提供了候选转录因子。(本文来源于《分子植物育种》期刊2016年10期）
张凯伦,罗祖良,郭玉华,石宏武,马小军[7]（2016）在《不同生长时期罗汉果果实转录因子的转录组分析及酵母单杂交文库的构建》一文中研究指出目的:研究罗汉果果实中的转录因子(transcription factors,TFs)。方法:在授粉后3、50、70 d(days after flowering,DAF)的罗汉果果实转录组中查询注释为转录因子的所有非重复Unigene,并在表达谱中查找其表达情况;应用Matchmaker Yeast One-Hybrid Library Construction系统构建酵母单杂交c DNA文库。结果:罗汉果表达谱数据中共有38个家族的119个转录因子Unigene具有表达差异,其中以70 DAF/3 DAF和50 DAF/3 DAF组中具有差异表达的转录因子数目较多,且上调和下调的转录因子Unigene数目相近。此外,初步筛选到4个可能参与罗汉果甜苷合成调控的b HLH(basic helix-loop-helix,b HLH)转录因子Unigene(b HLH014、b HLH025、b HLH093、b HLH096)及8个可能参与黄酮类化合物合成调控的MYB转录因子Unigene;成功构建了酵母单杂交文库p GADT7-Rec2-Lib,其库容量为2.3×106 cfu,插入片段的平均长度约为1.5 kbp。结论:转录组数据分析和酵母单杂交实验有助于筛选罗汉果果实中具有调控作用的转录因子。(本文来源于《中国现代中药》期刊2016年08期）
贾慧,郭丽婕,孟庆江,曹志艳,宋亚凤[8]（2015）在《玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体的构建》一文中研究指出根据玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)黑色素合成还原酶基因St3HNR、St4HNR 5′端侧翼序列和酵母单杂交报告载体p HIS2.1多克隆位点,设计了带有限制性内切酶位点的特异性引物,并以玉米大斑病菌01-23菌株基因组DNA为模板,PCR扩增启动子区域长度约1 000 bp的片段,双酶切目的片段及载体p HIS2.1回收并连接,构建2个还原酶基因的酵母单杂交报告载体。结果表明,克隆到启动子区域长度为998 bp核酸片段,经PCR检测、测序、酶切鉴定,2个还原酶基因的酵母单杂交报告载体构建成功,为进一步研究还原酶与转录因子互作关系及明确黑素素合成调控机制奠定了基础。(本文来源于《湖北农业科学》期刊2015年14期）
李濯雪[9]（2015）在《利用酵母单杂交方法对OsHsfB2c启动子结合蛋白的筛选》一文中研究指出高温、干旱和盐碱等胁迫是影响水稻产量和品质的重要限制因子,因此抗逆性的研究已成为重要课题。植物的抗逆性是由多个基因共同调控。转录因子可通过调控下游基因的表达来调控植物对高温、干旱和盐碱等胁迫的响应。在前期研究中,我们筛选到了一批受高温显着诱导表达的基因,对其中一个转录因子OsHsfB2c启动子的功能研究发现：该启动子对高温、干旱等有显着响应,且表现出较明显的幼穗特异性。本研究利用酵母单杂交技术进行了OsHsfB2c启动子上游调控蛋白的筛选,并对该启动子与候选调控蛋白之间的互作进行了验证,为进一步分析上游调控蛋白的功能及水稻耐逆机制提供重要信息。本研究取得的主要结果如下：1：用PlantCARE对OsHsfB2基因ATG上游1500bp的启动子序列进行了顺式作用元件预测与分析,结果表明该段序列除了具有一般真核生物启动子结构所具有的核心保守序列如CAAT box,TATA box外,还含有HSE、G-box、Sp1、GC-motif和ABRE等多个逆境响应元件。2：基于逆境响应元件的分布情况,扩增了OsHsfB2c启动子区的四个片段,并将其克隆至诱饵载体pAbAi+Bait,分别转化到Y1HGo1d,经SD/-Ura陷型平板筛选和PCR鉴定,成功构建了四个启动子片段的诱饵酵母菌株。3：将水稻cDNA文库质粒转化1号诱饵酵母菌株,进行文库的筛选,在含600 ng/mL AbAr的SD/-L(?)u板上总计有47个阳性克隆。对这些阳性克隆中的cDNA入片段进行了菌落PCR扩增,在剔除空载体和小于800bp长度的插入片段的克隆之后,最终得到21个阳性克隆。进一步的测序和生物信息学分析显示,这些候选cDNA编码7大类结合蛋白,包括参与最基本的转录起始、参与蛋白降解、参与非生物逆境响应等,还有一些未知功能的蛋白质等。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2015-06-01）
黄雪盈,石兰平,杨晟,申磊,刘艳艳[10]（2015）在《辣椒酵母单杂交系统的建立及调控CaWRKY40表达的转录因子分离》一文中研究指出辣椒CaWRKY40的转录表达受到病原菌和高温的诱导并在辣椒抗青枯病以及耐高温中起着重要的作用,但其应答青枯菌侵染和高温胁迫表达的调节机制还不清楚。为了进一步分离调节CaWRKY40表达的转录因子,建立辣椒酵母单杂交cDNA文库,以CaWRKY40启动子的青枯病原菌及高温应答区域CaWRKY40p(W40p)为诱饵,筛选cDNA文库,共获得56个阳性克隆。序列分析结果表明,有27个克隆为非重复序列,对其推定氨基酸序列进行同源比对和功能结构域分析,发现有1个推定转录因子,即ARF(Auxin response factor),以及其他蛋白如eIF(Eukaryotic initiation factor,真核起始因子),EF(延伸因子,Elongation factor)等。进一步通过染色质免疫共沉淀验证这些转录因子与W40p的结合。剖析CaWRKY40表达的分子机制有利于深入解析CaWRKY40介导的辣椒抗病及耐高温分子机制。(本文来源于《热带作物学报》期刊2015年05期）
酵母单杂交论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
前期研究表明:AcSERK1是菠萝体细胞胚发生受体类激酶基因,在该基因转录起始位点(TSS)上游-921nt/-881nt区具有胚性细胞特异性启动活性。在此基础上,以-921nt/-881nt为诱饵,通过酵母单杂交从菠萝体细胞胚诱导时期的cDNA文库中初筛到了58个可能互作的阳性克隆。生物信息学分析以及定量分析结果表明:其中AcSET3和AcRBL可能是与胚性细胞特异性区段互作的基因。SET3编码组蛋白H3,H3的甲基化、乙酰化、磷酸化等在基因转录调控过程中发挥重要作用;RBL是响应胁迫反应蛋白的编码基因,其编码一种凝集素蛋白,能与半乳糖结合发挥相应功能。为明确这两个基因是否为菠萝体细胞胚发生相关转录因子基因,通过克隆和酵母单杂交进行了回转验证。以‘神湾’菠萝吸芽叶基诱导形成的非胚性愈伤组织为材料,经2,4-D胚性诱导20 d后,提取RNA,反转录成cDNA;利用软件PrimerPremier5.0分别在AcSET3和AcRBL的CDS两端设计1对特异性引物,使得插入片段扩增产物5′和3′最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列(15～20 bp);用clontech的In-fusion连接酶在50℃下反应30 min,分别将AcSET3和AcRBL插入到pGADT7载体中,42℃热激转化至DH5α大肠杆菌,挑取阳性克隆进行PCR并测序鉴定。利用酵母单杂交系统将5μg带有Leu筛选标记的重组质粒pGADT7-AcSET3和pGADT7-AcRBL分别转入600μL含有诱饵重组质粒(-921nt/-881nt)的酵母菌株Y1H-Gold感受态中,30℃水浴30min诱导转化酵母感受态细胞,在营养缺陷型培养基SD/-Leu/-AbA 500 ng·mL-1进行筛选,30℃倒置培养3～5 d。将克隆得到的AcSET3(411 bp)和AcRBL(570 bp)的CDS分别正向插入到pGADT7载体中,通过双酶切及测序对重组质粒进行鉴定,确认pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL重组质粒构建成功。转化酵母后,挑取生长良好直径2～3 mm的单克隆进行菌落PCR,与重组质粒PCR产物片段大小一致,表明重组质粒pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL已转化到诱饵酵母菌株Y1H Gold中。转化菌株和阳性对照(pGADT7-53)在营养缺陷型培养基SD/-Leu/-AbA上生长良好,阴性对照(pGADT7空载)不能生长,表明pGADT7-Ac SET3和pGADT7-AcRBL能够在宿主Y1H Gold酵母菌株中表达,并激活诱饵载体下游AUR报告基因的表达,从而使重组酵母菌株能在营养缺陷培养基上健康生长。并且表达产物AcSET3和AcRBL对宿主菌没有明显毒性,初步证实AcSET3和AcRBL与AcSERK1转录起始位点上游-921nt/-881nt存在互作关系。目前正在研究两个转录因子与AcSERK1启动子中胚特异性区段的结合情况,及它们在菠萝体细胞胚发生过程中的作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
酵母单杂交论文参考文献
[1].徐晓兰,朱风丽,赖荣才,石林春,陈士林.赤芝LS基因酵母单杂交文库构建及其上游调控因子的筛选[J].中国中药杂志.2019
[2].丁雅琦,谢桃,何业华,栾爱萍,李楚豪.菠萝体细胞胚发生相关转录因子AcSET3和AcRBL的酵母单杂交回转验证[C].中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集.2018
[3].郭荣荣,林玲,周思泓,韩佳宇,张瑛.夏黑葡萄VlTFL1A基因酵母单杂交文库构建及其上游基因的筛选[J].西南农业学报.2018
[4].李晓雪.应用酵母单杂交技术筛选柿DkPDC2互作转录因子的研究[D].华中农业大学.2018
[5].刘羽佳,孙剑明.利用酵母单杂交研究AtbHLH112上游调控基因[J].科学中国人.2017
[6].郭育强,刘姣,符少萍,段瑞军,李瑞梅.MeCWINV6酵母单杂交文库构建及其调控基因筛选[J].分子植物育种.2016
[7].张凯伦,罗祖良,郭玉华,石宏武,马小军.不同生长时期罗汉果果实转录因子的转录组分析及酵母单杂交文库的构建[J].中国现代中药.2016
[8].贾慧,郭丽婕,孟庆江,曹志艳,宋亚凤.玉米大斑病菌黑色素合成还原酶基因酵母单杂交报告载体的构建[J].湖北农业科学.2015
[9].李濯雪.利用酵母单杂交方法对OsHsfB2c启动子结合蛋白的筛选[D].湖南农业大学.2015
[10].黄雪盈,石兰平,杨晟,申磊,刘艳艳.辣椒酵母单杂交系统的建立及调控CaWRKY40表达的转录因子分离[J].热带作物学报.2015
论文知识图
