李昊[1]2003年在《p27基因及其蛋白、cyclinD1蛋白、p53蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义》文中研究说明目的 研究p27基因及其蛋白、cyclinD1蛋白和p53蛋白在大肠癌组织中的表达及其临床意义。方法 收集58例手术切除的大肠癌组织，同时取距肿瘤边缘5cm以上切缘的正常黏膜组织。运用原位杂交方法检测大肠癌组织及正常黏膜中p27mRNA的表达；运用免疫组织化学S-P法检测相同组织中p27蛋白、cyclinD1蛋白和p53蛋白的表达。结果 1．p27mRNA在大肠癌组织及正常黏膜中的表达阳性率均为100％。p27蛋白在大肠癌组织中的表达阳性率为55.17％，在正常黏膜的表达阳性率为96.55％(P＜0.01)；p27蛋白的表达与肿瘤组织分化程度呈负相关(P＜0.01)，与患者性别、年龄、Dukes分期、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤位置无明显相关性(P＞0.05)；大肠癌组织中p27mRNA与p27蛋白表达无明显相关性。2．cyclinD1蛋白在大肠癌组织中的表达阳性率为55.17％，在正常黏膜中没有表达(P＜0.01)；60岁以上年龄组大肠癌组织中cyclinD1蛋白的表达阳性率高于60岁以下年龄组(P＜0.05)；cyclinD1蛋白的表达与肿瘤组织分化程度呈负相关(P＜0.01)，与性别、Dukes分期、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移、肿瘤位置无明显相关性(P＞0.05)。3．p53蛋白在大肠癌组织中的表达阳性率为53.45％，在正常黏膜没有表达(P＜0.01)；大肠癌组织中p53蛋白的表达与临床病理特征无明显相关性(P＞0.05)。4．大肠癌组织中p27蛋白和cyclinD1蛋白表达呈正相关(r=0.582，P＜0.01)，p27蛋白和p53蛋白表达无明显相关性(r=0.201，P＞0.05)，cyclinD1蛋白和p53蛋白表达也无明显相关性(r=0.132，P＞0.05)。结论 1．p27蛋白表达的调控主要在转录后水平。2．p27蛋白、cyclinD1蛋白及p53蛋白在大肠癌的发生发展中具有重要作用，p27蛋白和cyclinD1蛋白在安徽医科大学硕士学位论文大肠癌的发生过程中具有协同作用;p53蛋白在大肠癌的发生过程中是独立地起作用的。3.cyclinDI和P27蛋白的检测可作为评价大肠癌恶性程度和判断预后的重要指标;cyclinDI蛋白和p53蛋白的检测有助于大肠癌的早期诊断。
崔静[2]2003年在《DNA甲基化与大肠癌的发生发展及临床生物学行为的关系》文中研究指明目的 探讨cyclinD_1、p16、p27和Rb基因启动子区CpG岛在大肠癌发生发展过程中甲基化状态及其蛋白的表达情况，分析在大肠癌中这些基因表达的变化与DNA甲基化的关系，明确DNA甲基化在大肠癌发生发展中的作用及其与大肠癌临床生物学行为的关系，并由此寻找大肠癌早期诊断、生物学特性和预后判断的分子标记。 方法 采用PV-6000通用型二步法免疫组化染色检测大肠癌手术切缘正常粘膜上皮、癌旁组织、大肠腺瘤及大肠癌组织中cyclinD_1、p16、p27和Rb蛋白的表达情况并分组，然后应用敏感的甲基化特异性PCR检测各基因启动子区CpG岛的甲基化状态。 结果 1．免疫组化结果显示：cyclinD_1蛋白的表达在大肠癌发生发展过程中呈逐渐增高趋势，其在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比以及癌与癌旁组织、腺瘤相比均有显着性差异(p＜0.01或0.05)，但在癌旁组织与腺瘤间cyclinD_1的表达差异无显着性(p＞0.05)；p16和p27蛋白在大肠癌发生发展过程中表达均呈下降趋势，在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比以及癌与癌旁组织、腺瘤相比均有显着性差异(p＜0.01或0.05)；Rb蛋白表达在大肠癌发生发展过程中也呈逐渐下降趋势，其在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的表达与手术切缘正常粘膜上皮相比有显着性差异(p＜0.01或0.05)，但癌与癌旁组织、腺瘤相比以及癌旁组织与腺瘤间Rb的表达差异均无显着性(p＞0.05)。对于乙状结肠扭转1例和意外死亡的正常大肠粘膜组织2例pl6、p27和Rb蛋白的表达均呈阳性，而CyClinD；蛋白的表达2例呈阴性，l例呈阳性。2．甲基化特异性PCR结果显示：在大肠癌发生发展过程中 PI6、P27和 Rb基因启动子区甲基化率均呈增加趋势，cyclinD；基因启动子区甲基化率呈下降趋势，p16、p27和CyClinD；基因甲基化程度分别与pl6、p27和CyClinD；蛋白表达呈明显相关性（p＜0．of或 0．05）；而 Rb基因启动子区甲基化率虽然也呈增加趋势，但阳性率很低，并且基因甲基化程度与Rb蛋白表达也无明显相关性（p＞0刀5）。对于乙状结肠扭转 1例和意外死亡的正常大肠粘膜组织 2例 pl6和 p27基因均呈非甲基化状态，o基因2例呈非甲基化状态，二例为部分甲基化状态，CyClinD；基因均呈部分甲基化状态。3．基因甲基化与大肠癌临床生物学行为的关系结果显示：PI6和 CyClinD；基因甲基化程度在癌组织分化程度中＜0．01）、浸润深度（p＜0．05或 0．of）和有无淋巴结转移上（p＜0．05或 0．01）均有显着性差异 ； PZ 7基因甲基化程度在有无淋巴结转移上有显着性差异（P＜0．01）。 结论 CyClinD卜 p 16和 p27基因启动子区 CpG岛异常甲基化是CyClinD；高表达、p16和p27失活的主要机制，并由此导致细胞增殖周期失调在大肠癌发生发展过程中发挥着重要作用，是与大肠癌发生发展有密切关系的重要早期分子事件，并与大肠癌的临床生物学行为密切相关，可作为大肠癌早期诊断、基因治疗和判断预后的重要分子指标，为进一步深入研究DNA甲基化与肿瘤的关系是供了理论和实验依据。
易建中[3]2002年在《cyclinE、P27及Ki-67在大肠癌中的表达及其临床意义》文中研究表明目的：探讨cyclinE、P27及Ki-67在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组织化学S-P法测定12例正常大肠粘膜、64例大肠癌中cyclinE、P27及Ki-67的表达情况。结果：cyclinE在大肠癌中的表达率为57.81%，明显高于正常粘膜的表达(16.67%)，P<0.05。cyclinE表达与大肠癌Dukes分期及淋巴结转移情况相关;Dukes A期、Dukes B期、Dukes C期和Dukes D期cyclin E阳性率分别为85.00%、55.56%、42.86%和33.33%，Dukes A期cyclinE阳性率明显高于Dukes B期、Dukes C期和Dukes D期，差异有统计学意义；无淋巴结转移组阳性率为71.05%，明显高于有淋巴结转移组(38.48%)，P<0.05；但与大肠癌患者预后无关。P27蛋白在大肠癌中的表达率为53.13%，明显低于正常粘膜的表达(91.67%)，P<0.05。大肠癌中，Dukes A期、Dukes B期、Dukes C期和Dukes D期P27蛋白阳性率分别为75.00%、66.67%、28.57%和25.00%，Dukes A期、Dukes B期P27蛋白阳性率明显高于Dukes C期和Dukes D期，P<0.05；有淋<WP=6>巴结转移组的阳性率(26.92%)明显低于无淋巴结转移组(71.05%)，P<0.05；P27蛋白阳性表达和阴性表达组5年生存率分别为73.33%、46.15%，两组间比较有显着性差异(P<0.05)，P27蛋白阴性表达者，其5年生存率显着下降。Ki-67在大肠癌中表达率为85.94%，明显高于正常粘膜的表达(16.67%)，P<0.05。Ki-67表达与大肠癌部位、Dukes分期及患者预后等无关。cyclinE与Ki-67相关性分析显示，二者的表达呈正相关。而cyclinE与P27表达、P27与Ki-67表达之间无相关性。结论：cyclinE过表达及P27蛋白表达下降或缺失可能加速细胞周期转化，参与大肠癌的发生。cycinE过表达可能是大肠癌形成过程中较早的分子事件。P27蛋白表达下降或缺失可能促进了大肠癌的发展及转移，而且提示为大肠癌患者预后不良的危险因素，对大肠癌P27表达情况进行分析，可以估计肿瘤的恶性程度和判断患者预后。
王峰[4]2009年在《PTEN、CyclinD1与DNA含量在大肠粘膜癌变过程中的联合检测及意义》文中研究说明目的:研究PTEN和CyclinD1在大肠粘膜癌变过程中的表达和意义,以及其与相应组织DNA含量检测的关系,从肿瘤演进和异质化的角度探讨大肠粘膜癌变的分子生物学机制及遗传学机制。方法:应用免疫组化SP法检测58例大肠癌、18例腺瘤性息肉及14例配对的癌旁正常组织石蜡标本中PTEN和CyclinD1蛋白的表达,应用流式细胞术检测以上石蜡组织中的DNA含量;分析它们之间以及与各种临床病理特征的关系。结果:1.PTEN的表达结果:①PTEN蛋白阳性染色颗粒主要定位于细胞胞浆内;②PTEN蛋白在癌旁正常组织、腺瘤性息肉及大肠癌中的表达分别为92.86%(13/14)、83.33%(15/18)和65.52%(38/58),呈递减趋势;癌旁组与息肉组比较差异无统计学意义(P＞0.05),腺瘤性息肉组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05),癌旁组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05);③表达强度方面正常组与息肉组无显着差别(P＞0.05),但均高于癌组织组(P＜0.005);④PTEN蛋白表达与大肠癌临床病理特征的关系:大肠癌中PTEN蛋白表达的表达均与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移和Dukes分期有关;而与患者的性别、年龄、部位、大小及浸润深度无明显相关(P＞0.05)。2.Cyclin D1表达结果:①Cyclin D1蛋白阳性染色颗粒主要定位于细胞核;②CyclinD1蛋白在癌旁正常组织、腺瘤性息肉及大肠癌组织中的表达分别为7.14%(1/14)、16.17%(3/18)和60.34%(35/58),呈递增趋势;癌旁组与息肉组比较差异无统计学意义(P＞0.05),腺瘤性息肉组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05),癌旁组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05);③表达强度方面正常组与息肉组无显着差别(P＞0.05),但低于癌组织组(P＜0.005);④CyclinD1蛋白阳性表达与大肠癌临床病理特征的关系:大肠癌中CyclinD1蛋白表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移和Dukes分期有关;而与患者的性别、年龄、部位、大小及浸润深度无明显相关(P＞0.05)。3.PTEN表达与CyclinD1表达的相关性:对58例大肠癌组织中PTEN与CyclinD1表达率进行相关分析,结果显示:r=-0.7135,P＜0.05,具有统计学意义,表明PTEN与CyclinD1阳性表达率呈负相关。4.流式细胞术检测指标与PTEN及CyclinD1表达的关系:①癌旁正常组织、腺瘤性息肉及大肠癌组织中DNA异倍体率分别为0(0/10)、5.56%(1/18)和68.97%(40/58),呈递增趋势;癌旁组与息肉组比较差异无统计学意义(P＞0.05),腺瘤性息肉组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05),癌旁组与大肠癌组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。②PTEN阳性组的DNA指数(DNA index,DI)、S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)均低于阴性组(P＜0.05),CyclinD1阳性组的DI及SPF均高于阴性组(P＜0.05)。③淋巴结转移患者的异倍体率及SPF高于无淋巴转移患者(P＜0.05)。结论:1.PTEN和CyclinD1基因的异常改变可能参与大肠粘膜细胞的恶性转化过程,且两者的变化存在相关性;其蛋白表达异常与大肠癌分化程度、有无淋巴结转移和临床病理分期密切相关。2.细胞中DNA含量相关指标的变化与上述蛋白表达变化存在相关性。3.联合检测PTEN、CyclinD1及DNA含量可作为评估大肠癌病理生物学行为和判断预后的重要指标。
邹琼[5]2003年在《人体肝癌发生过程中细胞周期调控相关因子表达的研究》文中认为目的：研究肝细胞性肝癌(HCC)发生过程中不同阶段细胞周期调控相关因子表达及其相互关系，以探讨HCC发生的分子生物学机制。方法：应用免疫组织化学检测正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化和肝癌共107例标本中cyclinD1、CDK4、PCNA、p16、p27蛋白的表达情况。应用原位杂交技术检测相应组织中p16mRNA和p27mRNA的表达。结果：在正常肝组织中未见cyclinD1、CDK4和PCNA的表达；该叁项指标从慢性肝炎、肝硬化、癌周肝硬化到肝癌蛋白表达的阳性单位和面数密度逐渐增强，以肝癌表达最强。癌周肝硬化和肝癌中cyclinD1、CDK4的表达明显高于慢性肝炎和肝硬化(P＜0.05)，但癌周肝硬化和肝癌之间差异无显着性(P＞0.05)。p16蛋白和p16mRNA在正常肝组织和慢性肝炎中低表达，肝硬化、癌周肝硬化和肝癌中表达逐渐增强，癌周肝硬化与肝硬化差异有显着性(P＜0.05)，但与肝癌差异无显着性(P＞0.05)。p16免疫组化和原位杂交结果基本一致。p27蛋白在正常肝组织和慢性肝炎中呈低-中表达，肝硬化和癌周肝硬化中表达明显增强，而肝癌时表达明显下降，与前四组差异有显着性(P＜0.05)。p27mRNA在非肝癌组织中表达均较强，肝癌中表达明显减弱，与前四组差异有显着性(P＜0.05)。此外，cyclinD1、CDK4、p16和p27的阳性信号在慢性肝炎和肝硬化中主要定位于胞核，而癌周肝硬化和HCC中主要定位于胞浆。在肝癌组织中随着其分化程度降低，PcNA的表达增强，P16和p16mRNA、p27和p27mRNA的表达减弱，分化好与分化差的肝癌两组间差异有显着性(P<0.05)。在肝癌中PCNA与eyelinDI、cDK4表达呈正相关，p27与pCNA、eyeli瓦DI和CDK4表达呈负相关。结论:本研究证实“cyclin一CDK一C心”这一调控网络中相关调控因子的联合异常可能参与了HCC的发生、发展，且与肿瘤的分化有关。支持癌周肝硬化可能是癌前肝硬化在癌周残留的观点。cyclinDI、CDK4的过度表达可能是肝癌发生过程中的早期事件。pl6高表达可能是细胞周期正反馈调控的结果，在Hcc的发生中可能属于早期事件，而P16表达下降或缺失可能是肝癌发生过程中的晚期事件。p27蛋白及p27mRNA表达下降或缺失可能涉及HCC的发生、发展有关。eyelinDI、CDK4、p27及pl6的胞浆型表达与HCC的早期发生密切相关。PCNA可作为判断HCC的恶性程度和分级标准之一。
蔡文娟[6]2011年在《滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX及细胞外信号调节激酶通路调控细胞增殖的研究》文中研究指明目的：研究滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX的下游基因,筛选并明确其中部分基因在滑膜肉瘤发生发展中的功能与内在联系,从融合基因及下游基因的角度阐明滑膜肉瘤的发生发展机制,为临床治疗提供新的线索。方法：选取滑膜肉瘤细胞系SYO-1,构建特异性封闭融合基因SYT-SSX的siRNA真核载体,采用脂质体转染的方法,干扰并封闭融合基因的表达。利用Realtime RT-PCR的方法验证封闭效果。选取其中封闭效果良好的样本进行人类全基因组表达谱基因芯片分析。实验所得所有变化基因使用基于网络的基因分析工具,进行分类注释分析及代谢通路分析。选取其中一条与SYT-SSX密切相关的细胞代谢通路,Realtime RT-PCR验证其关键位点基因,在SYT-SSX封闭后mRNA表达水平的变化。Western Blot方法验证融合基因被特异性siRNA封闭后,细胞代谢通路关键位点的基因蛋白水平的变化。采用MTT染色活细胞数,评估细胞增殖活力,验证封闭SYT-SSX后,对于细胞的增殖的影响。PI染色,流式细胞仪检测细胞周期,同时检测细胞周期相关蛋白水平表达变化,验证SYT-SSX及所选通路对于细胞周期的影响。Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞坏死与凋亡,初步探讨SYT-SSX与所选通路对于细胞凋亡的影响。同时,选取表达融合基因SYT-SSX及不表达融合基因的人体滑膜肉瘤及其它组织学类型肉瘤共74例,以免疫组织化学法及TUNEL染色方法,在蛋白水平验证体内环境中,SYT-SSX表达及所选通路蛋白与其下游功能蛋白之间的联系。应用统计学分析方法对所有结果进行计数资料的正态性检验、方差齐性检验,方差分析和t检验等,以P<0.05,差别具有统计学意义。结果：(1)构建的siRNA真核表达载体,在体外环境中可以特异性封闭融合基因SYT-SSX,并且在72h达到93.7%抑制率；(2)基因芯片检测结果全基因组表达谱基因芯片中375个基因上调,418个基因下调,所有变化的793个基因中653个可以进行基因功能分类,其中涉及蛋白磷酸化,细胞分裂,细胞周期,细胞转运,RNA结合,离子代谢,核蛋白代谢等。对所有变化基因进行细胞通路分析,5条通路被选中,其中ERK通路与SYT-SSX相关性最为显着(P<0.05)；(3)mRNA水平及蛋白水平验证ERK表达量在封闭融合基因SYT-SSX后,有明显下降；(4)封闭融合基因SYT-SSX后,MTT法检测活细胞数封闭组明显低于未处理组,封闭组细胞周期调控出现明显GO/G1期阻滞,处于DNA合成期(S期)细胞明显减少。Western Blot结果显示细胞周期相关蛋白,CyclinD1表达量明显下降,CDK4表达变化不明显；(5)融合基因封闭后, Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪测定,凋亡细胞数明显高于阴性对照siRNA组及仅使用脂质体处理组；(6)免疫组化染色结果显示,表达SYT-SSX融合基因患者,具有较高的ki-67染色指数,体内环境中表达较高的p-ERK蛋白及CyclinDl及CDK4蛋白,而TUNEL染色显示凋亡指数组间差别无统计学意义；(7)免疫组化结果显示,表达较高水平p-ERK的患者,同时表达较高水平的ki-67染色指数,CyclinD1和CDK4蛋白表达量高于p-ERK表达水平较低的患者,而TUNEL染色凋亡指数组间差别无统计学意义。结论：(1)构建siRNA真核载体,在体外环境中可以高效率,特异性的抑制融合基因SYT-SSX的表达；(2)融合基因可影响细胞增殖,凋亡,分化发育的多种基因,其中ERK可能为其中重要的通路之一,融合基因通过ERK通路促进细胞增殖,调控细胞周期,在一定程度上抑制细胞凋亡,从而在滑膜肉瘤的发生发展中起重要作用。(3)体内环境中,SYT-SSX可以上调p-ERK蛋白表达,进而提高细胞增殖活性,对细胞周期发挥正向调控作用,与体外实验结果一致。
李娟[7]2006年在《CyclinD1、P16在大肠癌中的表达及与其生物学特性关系的研究》文中研究指明目的 研究细胞周期调控因子CyclinD1、P16蛋白在大肠良、恶性肿瘤中的表达，探讨其在大肠癌发病中的作用机制及与大肠癌生物学特征的关系。 方法 应用免疫组织化学SP法检测41例大肠癌组织和7例正常大肠黏膜及14例大肠腺瘤中cyclinD1、P16的表达，结合其临床资料进行分析，并对免疫组化结果进行计算机图象定量分析。 结果 大肠癌组织cyclinD1蛋白阳性标记主要位于癌细胞核，P16可位于细胞浆和细胞核，正常肠黏膜未见cyclinD1表达，P16仅在细胞浆内表达，阳性表达率为85.71％。41例大肠癌中cyclinD1的阳性表达率为68.29％，P16蛋白的阳性表达率为43.90％。14例正常大肠腺瘤中cyclinD1的阳性表达率为42.86％，P16阳性表达率为57.14％。高分化腺癌中cyclinD1的阳性过表达率为12.50％，中、低分化腺癌中为56.25％和64.71％，每两者间差异显着(P＜0.05)；有淋巴结转移组的cyclinD1的过表达率为68.18％，无淋巴结转移组为36.84％，两者有显着差异(P＜0.05)；Dukes A+B期和C+D期cyclinD1的过表达率分别为31.25％和68.00％，两者间差异有统计学意义(P＜0.05)；男、女性患者cyclinD1过表达率分别为58.62％和58.25％，两者无差异：年龄＜50和≧50其过表达率分别为63.63％和56.67％，无明显差异；发生在结、直肠肿瘤的过表达率为61.53％和57.14％，两者无差异。高分化腺癌中P16的阳性表达率
李占武[8]2001年在《p27～（kipl）和Rb蛋白在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义》文中研究说明目的 探讨胆囊癌组织中抑癌基因p27kipl和Rb蛋白的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化SABC法对42例胆囊癌、20例慢性胆囊炎组织中p27kipl和Rb蛋白的表达状况进行检测,分析两者的表达及其与胆囊癌临床病理因素的关系。 结果 (1) p27kipl和Rb蛋白在胆囊癌组织中的阳性表达率分别为33.3%(14/42)和71.4%(30/42)，明显低于胆囊良性病变组90.0%(18/20)(P<0.01)和100%(20/20)(P<0.01)；（2）p27kipl蛋白表达与胆囊癌组织学分级、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、Nevin分期有关（P<0.05），与患者的年龄、组织学类型、肿瘤大小无关（P>0.05）；Rb蛋白表达与肿瘤的淋巴结转移及Nevin分期相关（P<0.05 ），而与病人年龄、肿瘤大小、组织学分级、组织学类型、肿瘤浸润深度无关（P>0.05）；log rank 检验发现p27kipl蛋白阳性表达与患者预后明显相关（P<0.05），p27kipl蛋白表达阳性的病人较p27kipl表达阴性者预后好。Cox风险比例模型模型分析则显示p27kipl蛋白是胆囊癌的一个独立的预后标志物(3) p27kipl和Rb蛋白在胆囊癌中的表达呈明显负相关性（P<0.05）。结论 (1) p27kipl和Rb基因蛋白的表达异常可能参与了胆囊癌的发生发展过程。(2) p27kipl蛋白表达与胆囊癌临床病理因素和预后密切相关，可作为一个新的判断胆囊癌预后的重要生物学指标。(3) p27kipl和Rb蛋白的表达呈明显的负相关关系，可能在p27kipl和Rb基因蛋白之间存在负反馈调节机制。
段光杰[9]2004年在《β-链接素与MMP-7表达对大肠癌发生及侵袭转移的影响》文中提出大肠癌(CRC)是常见的消化道恶性肿瘤,尽管对其采取了以手术为主的综合性治疗,但因缺乏有效的早期诊断标准及抗转移治疗靶点,患者预后仍不佳。因此,深入研究控制大肠癌发生、发展过程的关键基因的表达变化及其作用将为其早期诊断、预后判断和抗转移治疗提供理论依据。β-链接素(β-cat)不仅可与上皮型钙粘蛋白(E-cad)结合介导同型细胞粘附,同时也是APC-β-cat-Tcf4/Lef信号转导通路中关键因子,其异常表达可能与大肠癌的发生发展有关。基质金属蛋白酶7(MMP-7)对细胞外基质成分具有广泛的降解作用,与多数肿瘤的侵袭转移密切相关。体外实验发现MMP-7可能是β-cat-Tcf4/Lef通路下游靶基因,推测β-cat和MMP-7的协同作用可能在大肠癌的发生和侵袭转移过程中起着重要作用。由正常大肠粘膜、腺瘤、癌变及腺癌等大肠癌发生发展各阶段的组织样本构成的“演进组织芯片”,可高通量检测大肠癌不同发展阶段的分子病理改变,有助于对其发生及侵袭转移机制的研究。有关大肠腺瘤及腺癌中β-cat和MMP-7协同表达及其意义的研究,国外报道较少,国内还未见报道。致瘤性β-cat促进MMP-7表达对大肠癌发生及侵袭转移的作用机制,仍不十分清楚。为此,本实验拟通过制作大肠癌“演进组织芯片”,分别采用免疫组化和原位杂交检测25例正常大肠粘膜、135例腺瘤及其癌变和200例腺癌组织β-cat、MMP-7蛋白及mRNA的表达,旨在探讨致瘤性β-cat和MMP-7协同表达对大肠癌发生和侵袭转移的影响及其机制。主要结果和结论如下:1. 腺瘤癌变组织β-cat胞核异常表达率显着高于正常粘膜、腺瘤和腺癌组织,提示β-cat胞核积聚(致瘤性活化)可能与大肠腺瘤恶性转化有关。高级别上皮内肿瘤β-cat胞质、胞核异常表达率均显着高于低级别者,表明β-cat胞质及胞核积聚在癌变前的腺瘤晚期阶段就已发生,可能是大肠癌发生的早期事件。2. 大肠癌组织中淋巴结转移阳性及Dukes C、D期组β-cat胞核异常表达率均显着高于淋巴结阴性及A、B期组,提示β-cat的致瘤性活化与大肠癌的侵袭转移密切相关,可作为预测大肠癌转移的参考指标。3. MMP-7 mRNA和蛋白阳性表达率在腺瘤癌变和腺癌组织均显着高于正常粘膜,并与大肠癌淋巴结转移和Dukes分期显着相关,提示MMP-7过表达不仅可促进大肠<WP=9>癌的侵袭转移,还可能与大肠癌的发生有关。4. β-cat胞核异常表达与MMP-7 mRNA和蛋白阳性表达均显着正相关,连续切片检测显示二者在大肠腺瘤、癌变及腺癌组织中呈一致性表达,提示β-cat致瘤性活化促进MMP-7表达可能对大肠癌具有两方面的影响:(1)参与了大肠腺瘤恶性转化过程;(2)可能在大肠癌侵袭转移过程中发挥重要作用。
张英耀[10]2013年在《细胞周期蛋白-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达及相关性研究》文中提出喉癌是头颈部最常见的恶性肿瘤,在我国该病约占全身肿瘤的1%～5%,其病理类型以鳞状细胞癌为主,占全部喉癌的93%～99%。我国北方地区喉癌的发病率较高,发病年龄50～60岁为最多,男性的发病率高于女性。近年来,随着工业污染的加重,喉癌的发病率有明显的上升趋势。喉癌治疗涉及手术、放射治疗、抗肿瘤药物治疗和基因治疗等综合措施。随着诊断和治疗水平的不断进步,喉癌患者手术后喉功能保留率、生活质量及5年生存率均有了较大的提高,但是晚期喉癌患者的治疗效果仍不尽如人意,局部复发和转移仍为喉癌患者术后5年内死亡的主要原因。作为喉癌早期治疗的微创手术,也要求对喉癌早期诊断和治疗预后有正确的估计,以尽量减少创伤,保留患者的喉功能。因此,作为临床应用基础研究的目的之一,探讨与喉癌发生、发展的相关因素,以期寻找一个有效的检测指标以协助诊断、尽早的区分其病理类型,了解病变的范围以预测肿瘤的预后,有助于确定合理的治疗方案和治疗预期。喉腔黏膜的上皮细胞发生癌变的具体机制不明,可能与吸烟、饮酒、环境污染、病毒感染等因素有关。随着对细胞调控认识的不断深入,研究发现：细胞周期的调控异常是癌症发病的一个重要环节,细胞周期蛋白(Cyclins)作为细胞周期的正向调控因素,控制细胞周期的进程,其表达水平具有细胞周期依赖性,是调节细胞活动的重要蛋白质。Cyclins的异常表达是导致细胞周期调控机制受到破坏的主要因素之一,与恶性肿瘤的发生密切相关。Cyclins在肿瘤的发生发展中所扮演的角色日益成为人们关注的焦点,认为：癌症等恶性肿瘤可能是一类细胞周期性疾病。Ki-67是增殖性细胞核的标记物,代表细胞增殖水平,目前认为：Ki-67的功能与细胞有丝分裂有关。分子生物学研究表明：细胞过度分裂与增殖是肿瘤恶变的重要环节。Ki-67在G1后期出现,S、G2期升高,M期达峰值,只参与增生细胞核反应,于GO期消失,进入G1期时开始表达至有丝分裂后迅速减少,到GO期则不表达。许多研究表明：Ki-67蛋白表达的精确调控、分布,与很多恶性肿瘤的发展、转移、预后,均具相关性,是细胞增殖、完成细胞周期所不可或缺的,是检测肿瘤细胞增殖活性的重要指标,可作为肿瘤预后的经典标记物。Ki-67蛋白临床检测已被广泛开展,但是在喉肿瘤预后及治疗方面的研究应用在近几年才被逐渐报道。本研究通过检测Cyclin-D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织、癌旁组织、喉腔正常鳞状上皮组织中的表达情况,以期为喉癌的早期诊断和预后判断提供一个可靠的分子生物学指标。目的初步探讨细胞周期蛋白D1和细胞增殖抗原标记物Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床、病理特征之间的关系,以及两者在喉鳞状细胞癌组织中表达的相关性,以期为喉癌的早期诊断和预后判断提供一个可靠的分子生物学指标。方法92例我院2000年1月至2005年8月期间收治的喉鳞状细胞癌患者行根治性手术后所留取的标本,其中男性78例,女性14例。年龄36～79岁,平均55.4岁。根据肿瘤原发部位分为：声门上型43例,声门型46例,声门下型3例；根据肿瘤分化程度：高分化(G1)25例；中分化(G2)19例；低分化(G3)48例；根据癌肿的生长范围和扩展的程度,按国际抗癌协会(UICC)2002年第6版公布的TNM分类分期方案如下：Ⅰ期6例；Ⅱ期15例；Ⅲ期46例；Ⅳ期25例。应用免疫组化S-P法检测Cyclin-D1和Ki-67的蛋白表达,以PBS代替一抗作为阴性对照,比较上述基因蛋白在正常喉部鳞状组织(对照1组)、喉鳞状细胞癌组织、喉癌旁组织(对照2组)中的表达情况,探讨Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达与患者临床分期、病理特征之间的关系以及两者之间的相关性。采用SPSS12.0统计软件进行统计。喉鳞状细胞癌组织、喉腔正常鳞状上皮组织(对照1组)、肿瘤旁组织(对照2组)之间比较,计量资料以(x±s)表示,以one-way ANOVA方法进行总体比较,t检验做组间比较；Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达与患者临床病理特征之间的关系比较采用四格表资料的χ2检验,Cyclin-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达的相关性比较采用Spearman相关分析,检验显着性水准取a=0.05,以P<0.05为差异有统计学意义。结果(1)在92个肿瘤样本中,有60例(65.2%)检测到有细胞周期蛋白D1的表达,而在对照1组和2组中,检出率分别为3%(3/100)和13.1%(12/92),叁组对于细胞周期蛋白D1的检出率具有显着性差异(P<0.05),而且进一步分析发现：在不同分期的喉鳞状细胞癌组织中,Cyclin-D1的表达与临床分期之间有统计学相关性(P=0.029<0.05)。然而,Cyclin-D1的表达和其他变量(性别、年龄、癌症的阶段、组织分化、解剖学部位、吸烟史、饮酒史)之间没有统计学相关性。(2)Ki-67免疫组化检测：Ki-67阳性信号主要定位于细胞质,为粗细不等的棕黄或棕褐色颗粒。正常喉部鳞状细胞上皮组织中未见表达,喉癌旁组织中有4例(4.34%)呈弱阳性表达。研究发现：Ki-67的过度表达与肿瘤患者的性别、年龄、解剖学部位、组织分化、吸烟史和饮酒史无统计学相关性。但Ki-67蛋白表达与患者颈部淋巴结转移状态有显着相关关系(P=0.025<0.05)。(3)Ki-67蛋白的表达与患者的生存率无相关性,Ki-67蛋白的表达与生存时间无统计学相关关系(P=0.457)。而Cyclin-D1蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达与患者的生存率有明显的相关关系(P=0.0004<0.05)。(4)在Ki-67阳性高表达的56例喉癌组织中,有41例出现Cyclin D1阳性高表达；在Cyclin Dl阳性低度表达的51例患者中,有36例出现Ki-67阳性低度表达,经Spearman等级相关性检验表明：两者在喉鳞状细胞癌组织中的表达呈显着正相关关系(r=0.620,P<0.001)。结论(1)Cyclin D1在喉鳞状细胞癌组织中表达率高,与患者的临床分期及预后有显着的相关关系,Cyclin D1低表达者有较高的生存率,可作为喉鳞状细胞癌术后的监测指标,为喉鳞状细胞癌的治疗提供一个新的靶点。(2)Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中亦有表达,与患者颈部淋巴结转移状态有关,Ki-67高表达与淋巴结转移率高有显着的相关关系,可作为喉鳞状细胞癌患者淋巴结转移的监测指标。(3)Cyclin D1和Ki-67在喉鳞状细胞癌组织中的表达具有显着正相关关系,两者联合检测对喉鳞状细胞癌患者术后辅助治疗及预后判断有一定的指导意义。
参考文献：
[1]. p27基因及其蛋白、cyclinD1蛋白、p53蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义[D]. 李昊. 安徽医科大学. 2003
[2]. DNA甲基化与大肠癌的发生发展及临床生物学行为的关系[D]. 崔静. 山西医科大学. 2003
[3]. cyclinE、P27及Ki-67在大肠癌中的表达及其临床意义[D]. 易建中. 重庆医科大学. 2002
[4]. PTEN、CyclinD1与DNA含量在大肠粘膜癌变过程中的联合检测及意义[D]. 王峰. 山东大学. 2009
[5]. 人体肝癌发生过程中细胞周期调控相关因子表达的研究[D]. 邹琼. 昆明医学院. 2003
[6]. 滑膜肉瘤融合基因SYT-SSX及细胞外信号调节激酶通路调控细胞增殖的研究[D]. 蔡文娟. 天津医科大学. 2011
[7]. CyclinD1、P16在大肠癌中的表达及与其生物学特性关系的研究[D]. 李娟. 苏州大学. 2006
[8]. p27～（kipl）和Rb蛋白在原发性胆囊癌中的表达及其临床意义[D]. 李占武. 青岛大学. 2001
[9]. β-链接素与MMP-7表达对大肠癌发生及侵袭转移的影响[D]. 段光杰. 第叁军医大学. 2004
[10]. 细胞周期蛋白-D1和Ki-67在喉癌组织中的表达及相关性研究[D]. 张英耀. 山东大学. 2013
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