论文摘要
Pfu DNA聚合酶是分子生物学研究中最常用的高保真DNA聚合酶之一。本研究对重组菌株的Pfu酶基因表达条件进行优化,以提高Pfu DNA聚合酶的表达效率。通过在菌液深度OD600=0.87时加入1.5 mmol/L的IPTG进行诱导培养,诱导培养时间为11.03 h,用酶溶法对重组菌株进行破胞提取粗酶液,经热变性法与盐析沉淀法对杂酶进行纯化,最后经过透析后得到纯酶。采用考马斯亮蓝G-250法对酶进行含量测定及SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测纯度,最后使用PCR反应检测提纯后的Pfu酶的活性。结果表明优化处理后制备的Pfu DNA聚合酶,其纯度、酶活性和酶特异性均达到市售的Pfu DNA聚合酶水平。本研究为Pfu DNA聚合酶的开发和利用奠定了基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 欧阳乐军,李莉梅,布梁灏,刘雅丽,柳镜炬,黄嘉玲,蔡治全,赵俊仁,倪燕妹,黄明超
关键词: 高保真,聚合酶,热变性,反应
来源: 基因组学与应用生物学 2019年12期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 生物学
单位: 广东石油化工学院,广东农垦热带作物科学研究所
基金: 广东省大学生攀登计划项目(pdjhb0338,pdjhb0343)及重点项目(pdjh2019b0323),国家级大学生创新创业训练计划项目及校级培育项目,国家自然科学基金(31470677),广东省自然科学基金(2017A030307017),广东科技计划项目(201-7A030303087)共同资助
分类号: Q55
DOI: 10.13417/j.gab.038.005458
页码: 5458-5464
总页数: 7
文件大小: 1815K
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