日本三角涡虫Caspase-7基因的克隆及功能研究

日本三角涡虫Caspase-7基因的克隆及功能研究

论文摘要

本文以日本三角涡虫Dugesia japonica为研究对象,通过c DNA末端快速扩增技术首次克隆得到了涡虫Caspase-7基因,全长935 bp,编码251个氨基酸,5’-UTR和3’-UTR长度分别为86 bp和93 bp。涡虫Caspase-7具有Caspase家族保守而关键的LSHG与QAC(Q/R) G两大结构域。此外,基于SWISS-MODEL同源建模对涡虫Caspase-7蛋白三维结构的预测和分析,发现其包含2个催化单位,且潜在催化位点由4个表面环构成。进化分析也显示,涡虫Caspase-7基因未与扁形动物门Platyhelminthes物种聚为一支,而与刺胞动物门Cnidaria水螅Hydra vulgaris有较近的亲缘关系,说明Caspase-7基因可能发生了趋同进化。本文通过实时荧光定量PCR检测了Caspase-7基因在涡虫再生不同时间段的表达变化,发现在涡虫切后再生6 h和3 d,Caspase-7基因表达量升高,这2个时间点是涡虫切后凋亡发生的2个高峰期。此外,通过喂食ds RNA干扰涡虫体内Caspase-7基因的表达,结果发现,干扰Caspase-7基因并不影响涡虫的再生,但再生完成后或未切割的成体涡虫在饥饿环境下,受Caspase-7基因干扰,虫体逐渐溶解直至死亡,而Djclg-3及PCNA基因的表达量也显著降低,说明干扰Caspase-7基因表达可能引起涡虫细胞凋亡与增殖减少,涡虫组织重塑失衡,导致虫体溶解并死亡。该结果揭示Caspase-7基因可能在涡虫组织重塑中起关键作用。

论文目录

  • 1 实验与方法
  •   1.1 实验材料
  •   1.2 实验试剂
  •   1.3 实验方法
  •     1.3.1 Caspase-7基因的克隆
  •     1.3.2 Caspase-7基因全长拼接及序列分析
  •     1.3.3 q PCR检测涡虫切后再生不同时间点Caspase-7基因的表达量
  •     1.3.4 Caspase-7 ds RNA体外转录及干扰
  •     1.3.5 Caspase-7干扰效率检测及干扰后表型观察
  •     1.3.6 Caspase-7干扰后Djclg-3及PCNA基因表达变化检测
  • 2 结果
  •   2.1 Caspase-7基因全长克隆及序列分析
  •   2.2 Caspase-7蛋白酶三维结构预测
  •   2.3 Caspase-7基因的进化分析
  •   2.4 涡虫再生不同时间段Caspase-7表达量变化
  •   2.5 干扰Caspase-7基因影响涡虫组织重塑
  •   2.6 Caspase-7干扰后Djclg-3与PCNA基因表达变化
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王志红,王超,彭锐

    关键词: 日本三角涡虫,基因,克隆,组织重塑

    来源: 四川动物 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室

    分类号: Q78

    页码: 11-19

    总页数: 9

    文件大小: 3516K

    下载量: 148

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