禽白血病病毒p27基因的原核表达及生物信息学分析

论文摘要

为了进一步研究禽白血病病毒（Avian leukosis virus,ALV）p27蛋白的结构与功能,并获得具有反应原性的重组蛋白p27,试验通过PCR技术克隆p27基因,构建克隆载体pMD19-T-p27,并应用生物信息学软件对获得的p27基因序列进行分析,构建重组表达载体pET-28a-p27,并将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中诱导表达,通过SDS-PAGE和Western-blot对获得的重组蛋白p27进行分析。结果表明:通过PCR技术克隆获得ALV p27基因,并成功构建了克隆载体pMD19-T-p27;生物信息学分析发现,p27蛋白由239个氨基酸组成,分子式为C1140H1853N323O339S6,理论等电点为6.23,无信号肽和跨膜区,含有8个丝氨酸磷酸化位点和13个苏氨酸磷酸化位点,无糖基化位点,共有9个抗原表位,二级结构和三级结构中以α-螺旋为主;成功构建了重组表达载体pET-28a-p27,并在大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中高效表达;诱导6小时时蛋白质表达量最大,分子质量约为27 ku,且以可溶性为主;重组蛋白p27具有较好的反应原性和特异性。说明试验获得了具有反应原性的重组蛋白p27,为建立禽白血病快速诊断方法和新型疫苗的研发提供了理论基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 徐明国,杨宁宁,刘志科,张桂枝,吴鹏,易继海,吴文星,王震,陈创夫

关键词: 禽白血病,基因,反应原性,抗原表位,生物信息学分析

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年13期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 石河子大学动物科技学院,河南牧业经济学院动物科技学院

基金: 西部地区高发人兽共患传染性疾病防治项目(2013-179)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.08.0147

页码: 21-26+172-174

总页数: 9

文件大小: 633K

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