导读:本文包含了依博素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:链霉菌,基因双敲除,ste3,ste4
依博素论文文献综述
白利平,姜蓉,郭连宏,张洋,李元[1]（2015）在《ste3与ste4基因双敲除对依博素生物合成的影响》一文中研究指出目的:以往研究已确定链霉菌胞外多糖依博素的生物合成基因簇(ste),生物信息学分析基因簇中ste3和ste4编码糖转运相关膜蛋白,现研究分析ste3和ste4与依博素生物合成的相关性。方法:通过基因同源重组双交换获得ste3和ste4双基因缺失突变株,经Southern杂交验证后,对该菌株进行了基因互补研究。分离提取各菌株发酵液的胞外多糖,并计算产量。结果:双基因缺失株产生的胞外多糖依博素与野生株相比,产量从319mg/L降低至153mg/L,平均产量降低52%以上;基因互补后,依博素平均产量上升到299mg/L,基本恢复至野生株依博素产量水平。结论:本研究首次阐明了编码糖转运相关膜蛋白基因ste3和ste4在依博素的生物合成中起重要作用,为研究链霉菌139的初级代谢和次级代谢之间的相关性奠定了基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年11期）
郭连宏,张洋,鲍勇刚,白利平,姜蓉[2]（2015）在《依博素生物合成基因ste22的异源置换研究》一文中研究指出目的依博素是由链霉菌产生的一种新型胞外多糖,具有显着抗类风湿性关节炎的作用,我们研究已确定了该多糖的生物合成基因簇(ste)。为了对依博素结构进行改造以提高其生物活性,对其生物合成基因ste22进行了异源置换研究。方法采用PCR扩增方法从乳酸菌获得了编码葡萄糖糖基转移酶的基因gtf,通过基因同源重组双交换,从链霉菌中置换了ste22基因。采用白细胞介素-1合成酶活性测定方法及小鼠巴豆油急性炎症模型,初步确定了基因置换株的依博素衍生物生物活性。结果获得了葡萄糖糖基转移酶基因置换株Streptomyces sp.139(gtf-22),产生了依博素新衍生物EPS-22g。研究表明该衍生物与依博素相比,葡萄糖比例从2.14%显着上升到48.64%,体外活性实验显示,其对炎症细胞因子白细胞介素-1合成关键酶ICE抑制率高于依博素,小鼠巴豆油急性炎症体内活性分析结果证明,该衍生物抑制活性亦高于依博素。结论采用异源基因置换生物合成基因的方法改造依博素产生菌,可能是获得生物活性较好新多糖衍生物的一种有效手段。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2015年03期）
郭连宏,张洋,赵宏阳,仲伟潭,张雪霞[3]（2015）在《依博素检测方法的研究》一文中研究指出目的:依博素是一种链霉菌产生的新天然化合物,体内具有较强抗类风湿关节炎活性,有可能发展成为具有我国自主知识产权的新药。为了确定发酵液中依博素的含量,基于其对ICE酶(IL-1β转化酶)具有抑制活性,本研究建立了一种检测依博素的方法。方法:以荧光标记的ICE酶底物Ac-Trp-Glu-AlaAsp-AMC与含依博素的发酵液进行反应,采用不加依博素及重组ICE酶的样品作为对照,用多标记微孔板检测仪测定产物荧光强度,确定发酵液中依博素的含量。结果:采用上述方法,分别对多批次摇瓶及发酵罐培养的发酵液进行了测定,结果显示,本方法可有效确定发酵液中依博素的含量。结论:本方法是检测依博素发酵水平的有效方法。(本文来源于《中国新药杂志》期刊2015年01期）
张洋[4]（2013）在《依博素抗炎作用机理的研究》一文中研究指出依博素是从链霉菌139发酵产物中获得的新天然产物,已获国家发明专利。临床前研究已完成,正在申报治疗类风湿性关节炎(RA)的临床研究。药效学实验结果表明,依博素对类风湿性关节炎动物模型(大鼠佐剂型关节炎模型和大鼠II型胶原性关节炎模型)具有显着抑制作用,在依博素的作用下两种模型动物的IL-1β和TNFa分泌水平均显着下降,上述结果说明依博素对类风湿性关节炎的抑制作用可能和降低上述炎症细胞因子相关。类风湿性关节炎是自身免疫性疾病,严重影响人类健康,目前尚缺乏有效治疗手段。研究表明炎症细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子a (TNFa)和白细胞介素6(IL-6)在类风湿性关节炎的病理过程中起重要作用,抑制其分泌表达并降低其生物活性已成为研制治疗RA新药的主要途径。为了确定依博素治疗类风湿性关节炎的作用机理,本论文在细胞水平开展了其对炎症细胞因子IL-1β、IL-6及TNFα分泌表达及信号传导途径的作用。本课题从Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎模型(CIA)大鼠,成功分离获得滑膜细胞株(FLS),建立了细胞培养条件；采用该细胞株及人急性单核细胞白血病细胞株(THP-1)开展了本项研究。在CIA-FLS细胞和THP-1细胞中,采用荧光标记底物,分别证明了依博素对IL-1β转化酶(ICE)和TNFa转化酶(TACE)活性的抑制作用；采用实时定量PCR (real-time PCR)确定了依博素对上述炎症细胞因子mRNA表达水平的降低作用；利用酶联免疫吸附方法(ELISA)及Western blotting检测,证明依博素对3种炎症细胞因子的抑制作用,上述结果证明依博素分别作用各细胞因子基因转录水平和转录后蛋白水平,从而抑制了上述细胞因子的分泌表达。在CIA-FLS细胞中,研究了依博素对炎症细胞因子IL-1β、IL-6及TNFa信号传递途径的作用。Western blotting检测表明,依博素通过降低磷酸化p38、JNK1和JNK2蛋白水平,分别抑制IL-1β和1NFa的MAPK/AP-1信号传导途径；采用Western blotting分析显示,依博素抑制磷酸化IKKa和IKKβ、磷酸化IκB和细胞核NF-κB的蛋白水平；凝胶迁移实验(EMSA)证明依博素可有效抑制细胞核NF-κB与DNA的结合；采用免疫荧光检测法证明依博素对NF-κB进入细胞核有明显抑制作用,上述实验分别证明依博素对IL-1β和TNFa的IKK/NF-κB信号传导途径抑制作用显着。采用Western blotting分析方法,确定了依博素能有效降低细胞磷酸化JAK2、STAT1和STAT3蛋白水平,免疫荧光检测法表明其对STAT3进入细胞核有一定的抑制作用,上述实验证明了依博素能抑制IL-6的JAK/STAT信号传导途径。采用ELISA分析证明,在IL-1β和TNFa分别诱导下,依博素可以降低CIA-FLS细胞基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3和化学趋化因子IL-8、RANTES的分泌水平。综上所述,本研究首次在细胞水平证明,依博素对炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNFa的表达水平及信号传导途径均有显着抑制作用,在其作用下上述炎症因子表达水平下降,生物活性降低,因此可以缓解类风湿性关节炎症状,达到治疗的作用。本研究结果为依博素抗炎作用机理提供了充实可靠的实验证据,为治疗类风湿性关节炎新药研究奠定了相关理论基础。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2013-08-01）
张洋,郭连宏,李元[5]（2013）在《依博素对THP-1细胞炎症细胞因子的作用》一文中研究指出在THP-1细胞中,研究依博素对炎症细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的作用,以探讨其抗炎作用机制。采用荧光标记底物,证明了依博素对IL-1β转化酶(ICE)和TNFα转化酶(TACE)活性的抑制作用;应用实时定量PCR(real-time PCR)确定了依博素对上述炎症细胞因子mRNA表达水平的降低作用;利用酶联免疫吸附方法 (ELISA)及Western blotting检测证明,依博素对3种炎症细胞因子分泌水平的抑制作用。上述结果表明,在THP-1细胞中,依博素可通过抑制ICE酶和TACE酶活性、降低炎症细胞因子mRNA合成作用而使各炎症细胞因子的生成量下降。本研究在细胞水平初步考察了依博素的抗炎作用机制,为治疗类风湿性关节炎新药研究奠定了相关基础。(本文来源于《药学学报》期刊2013年05期）
白利平,谢鸿观,单俊杰,姜蓉,张洋[6]（2009）在《糖基转移酶基因双敲除对依博素生物合成的影响》一文中研究指出以往研究已确定链霉菌胞外多糖依博素的生物合成基因簇(ste),ste15和ste22分别编码葡萄糖糖基转移酶和鼠李糖糖基转移酶。现通过基因同源重组双交换,在ste15基因缺失突变株Streptomyces sp.139(ste15-)基础上,再进行ste22基因阻断,经Southern杂交验证,得到了ste15和ste22双基因缺失突变株Streptomycessp.139(ste15-ste22-),并对该菌株进行了基因互补研究。双基因缺失株产生的胞外多糖与依博素相比,葡萄糖与鼠李糖含量明显降低,分子量下降,生物活性明显变弱。基因互补株产生的胞外多糖中葡萄糖与鼠李糖含量基本恢复至依博素水平,生物活性也显着提高。因此,进一步阐明了ste15和ste22基因参与了依博素生物合成中葡萄糖和鼠李糖重复单元序列的形成过程,在依博素的生物合成中起重要作用,变株产生的依博素新衍生物体内外生物学活性正在深入研究中。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2009年06期）
李晓华[7]（2009）在《依博素生物合成基因ste8及ste9的生物功能和ste15表达产物的酶学性质研究》一文中研究指出链霉菌139(Streptomyces sp.139)能分泌一种新型胞外多糖依博素(Ebosin),药效学研究表明其在体内具有明显的抗类风湿性关节炎作用,有可能发展成为新型药物。依博素的生物合成基因簇(ste)已被克隆和鉴定,它包含27个完整的开放阅读框架(stel-ste27)。本实验室已对其中多个重要功能基因进行了深入研究,本文的研究对象为ste8、ste9和ste15基因。生物信息学分析表明ste8基因的编码产物含有链长决定蛋白Wzz结构域,Wzz结构域参与脂多糖的生物合成并起着链长决定的作用。为了确定该基因在依博素生物合成中的功能,采用基因同源重组双交换的策略对ste8进行了基因的敲除,获得了ste8基因阻断株Streptomyces sp.139(ste8~-)。和依博素相比,基因阻断株产生的多糖EPS-8m中岩藻糖、木糖和葡萄糖含量降低明显;对IL-1R拮抗活性显着降低。出现了两个不同分子量的新多糖,Mp分别为40.03×10~4和2.57×10~4,显着低于依博素分子量,基本验证了ste8在依博素生物合成中对多糖链长起控制作用。根据基因同源性分析,ste9基因的编码产物含有链长决定蛋白Wzz的结构域,可能对多糖链长也起决定的作用。采用同前方法获得了ste9基因阻断株Streptomycessp.139(ste9~-)。基因阻断株产生的多糖EPS-9m中岩藻糖、木糖和葡萄糖含量降低明显。部分IL-1R拮抗活性丧失。也出现了两种新多糖,Mp分别为41.85×10~4和1.4061×10~4,均明显低于依博素的分子量,说明ste9在依博素生物合成中对多糖链长也起控制作用。对ste8和ste9进行了基因双敲除,EPS 8-9m中岩藻糖、木糖和葡萄糖降低比较明显;对IL-1R的拮抗活性较低。EPS 8-9m含两个不同分子量的新多糖,Mp分别为41.37×10~4和1.4×10~4,均大大低于依博素,结果进一步确定了ste8和ste9在依博素生物合成中对多糖链长起控制作用。为研究Ste15的生物化学性质,在大肠杆菌中成功克隆表达了ste15基因,采用连续偶联分光光度法,确定了该蛋白为葡萄糖糖基转移酶,该酶能从UDP-葡萄糖转移葡萄糖至细胞膜的葡萄糖接受体,在依博素生物合成中重复单元增长链的延长中起重要作用。本研究首次确定了ste8和ste9在依博素生物合成中对多糖链长起主要作用。获得的依博素新衍生物将为多糖结构与活性关系研究奠定基础,并可能对新多糖药物发展起推动作用。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2009-06-01）
常明[8]（2009）在《依博素生物合成基因ste7、ste26和ste27性质功能的研究》一文中研究指出链霉菌(Streptomyces)是在工业上常用的微生物之一,能产生大量的次级代谢物,主要有抗生素等,然而有关链霉菌胞外多糖的研究除本实验室外国内外尚未见报道。本研究室自行构建了以基因重组白细胞介素-1(Interleukin-1,IL-1)可溶性受体为靶位的受体拮抗剂筛选模型,获得了一种由链霉菌139产生的新型胞外多糖(Exopolysaccharide,EPS)依博素,经药效学研究证明依博素对类风湿性关节炎有明显疗效,有可能发展成为临床治疗类风湿性关节炎的新药。依博素生物合成基因簇(ste)包含27个完整开放阅读框(ORF),已对不同基因的功能进行深入研究。本文选择了ste7、ste26和ste27基因作为研究对象。根据同源性分析发现,ste7基因编码的蛋白与不同来源的糖基转移酶具有很高的同源性。为了确定ste7编码产物的生化性质,本研究在大肠杆菌中克隆表达了Ste7,对表达产物进行纯化,酶学性质研究证明Ste7为岩藻糖基转移酶,能够催化GDP-岩藻糖中的岩藻糖转移到单糖延长链受体上,在依博素生物合成中起重要作用。该酶的Km值为36.87±3.04μM。为了解ste26在依博素生物合成中的作用,对ste26进行了同源重组双交换基因阻断实验,获得了基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26~-)。与依博素相比,基因突变株产生的多糖衍生物EPS-26m的单糖组分不同程度有所变化;对IL-1R拮抗活性分析显示,EPS-26m的活性没有发生明显变化,但EPS-26m的峰位分子量明显低于依博素。据此推测ste26可能在依博素生物合成过程中起修饰作用。同源性分析显示ste26基因编码蛋白与乙酰转移酶具有很高的同源性。为了解ste26编码蛋白的生化性质,我们在大肠杆菌中对ste26进行了克隆和表达,对表达产物进行纯化,酶学性质研究证明Ste26为精胺/精脒乙酰转移酶,能够催化乙酰辅酶A(AcCoA)中的乙酰基转移到精胺、精脒和多聚赖氨酸上,具有一定的底物特异性。其中精胺是最适底物,酶的Km为72.14±7.39μM、最适温度为37℃、最适pH为7.5。为了研究ste27在依博素生物合成中的作用,对ste27进行了基因阻断实验,获得了基因突变株Streptomyces sp.139(ste27~-),其产生的多糖衍生物EPS-27m的单糖组分有所变化;与依博素相比,EPS-27m对IL-1R的拮抗活性没有发生明显变化;此外EPS-27m的峰位分子量明显低于依博素。综上所述,ste27基因的敲除对依博素生物合成有所影响,但未导致其衍生物丧失活性,因此推测ste27可能在依博素生物合成中可能起修饰基因作用。同源性分析显示ste27基因编码蛋白与乙酰转移酶具有很高的同源性。为了解ste27编码蛋白的生化性质,我们在大肠杆菌中对ste27进行了克隆和表达。酶学性质研究证明Ste27为精胺/精脒乙酰转移酶,能够催化AcCoA中的乙酰基转移到精胺、精脒、多聚赖氨酸和6-磷酸葡糖胺上,具有一定的底物特异性。其中精脒是最适底物,酶的Km为58.97±2.47μM、最适温度为28℃、最适pH为7.5。为了获得新型胞外多糖衍生物,更加深入了解ste26和ste27在依博素生物合成中的作用,我们利用同源重组双交换法对ste26和ste27进行了双敲除,经Southernblot验证,获得了双基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26~-27~-)。与依博素相比,双基因缺失株Streptomyces sp.139(ste26~--27~-)产生的胞外多糖衍生物EPS-26m27m中的鼠李糖,岩藻糖,木糖和葡萄糖组分都明显下降,对IL-1R的拮抗活性降低,峰位分子量也明显低于依博素。EPS-26m27m作为依博素新衍生物,需对其体内外活性进行深入研究。综上所述,本文通过对ste7、ste26和ste27基因的功能和性质及ste26-ste27基因的双敲除研究,有效地确定了各基因在依博素生物合成中的作用。为依博素生物合成途径的研究和获得具有生物活性的新型胞外多糖衍生物奠定了基础。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2009-05-01）
白利平,姜蓉,单俊杰,郭连宏,张洋[9]（2009）在《ste7与ste15双基因敲除对依博素生物合成的影响》一文中研究指出【目的】研究ste7和ste15基因双敲除对依博素生物合成的影响。【方法】通过基因同源重组双交换,对ste15基因缺失突变株Streptomyces sp.139(ste15-)再进行ste7基因的敲除,经Southern杂交验证,获得了ste7和ste15双基因缺失变株Streptomyces sp.139(ste7-ste15-)。对该突变株进行了基因互补。气相色谱分析ste7和ste15双基因缺失突变株及互补株产生的胞外多糖单糖组分,排阻色谱测定衍生物的重均分子量,ELISA法测定衍生物的IL-1R拮抗活性,并与依博素进行比较分析。【结果】获得ste7和ste15双基因缺失株Streptomyces sp.139(ste7-ste15-)及互补株。双基因缺失株产生的胞外多糖与依博素相比,葡萄糖与岩藻糖含量明显降低,分子量变小,生物活性明显下降。基因互补株产生的胞外多糖中葡萄糖与岩藻糖含量恢复。【结论】ste7和ste15基因编码产物参与了依博素生物合成中单糖重复单元序列的形成过程,在依博素的生物合成中起重要作用;变株产生的依博素新衍生物体内外活性有待进一步研究。(本文来源于《微生物学报》期刊2009年04期）
王岚[10]（2008）在《依博素生物合成基因ste5、ste22的克隆、表达和功能研究》一文中研究指出链霉菌(Streptomyces)是工业重要微生物之一,能产生大量的次级代谢物,主要有抗生素等,然而有关链霉菌胞外多糖的研究除本实验室外国内外尚未见报道。本研究室自行构建了以基因重组白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)可溶性受体为靶位的受体拮抗剂筛选模型,获得了一种由链霉菌139产生的新型胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)依博素,经药效学研究证明依博素对类风湿性关节炎有明显疗效,并且毒性较低,已申报临床研究,有可能发展成为临床治疗类风湿性关节炎的新药。我室已确定了由27个开放阅读框架(ORF)构成的依博素生物合成基因簇(ste)。为了阐明依博素生物合成途径,研究依博素结构与生物活性关系并获得新型依博素衍生物,已对不同基因功能进行了深入研究,本文的研究对象为ste5和ste22基因。根据基因同源性分析,ste5基因编码的蛋白可能是引导糖基转移酶,在依博素生物合成中启动第一步反应。为了解ste5在依博素生物合成中的功能,通过同源重组双交换对ste5进行了基因阻断研究,获得了基因缺失突变株Streptomyces sp.139(ste5),其产生的多糖EPS-5m单糖组分中半乳糖含量明显下降,全部丧失对IL-1R的拮抗活性,同时EPS-5m的分子量较依博素明显降低。为了确定ste5编码产物性质,在大肠杆菌成功进行了基因克隆表达,并纯化了重组蛋白,其分子量为54KD。酶学活性研究证明Ste5为半乳糖糖基转移酶,能够催化1-磷酸半乳糖由UDP-半乳糖转移到Streptomyces sp.139细胞膜脂质载体上,形成磷酸糖脂,从而作为引导糖基转移酶启动了依博素的生物合成,因此ste5是依博素的关键的生物合成基因。为了证实ste22基因编码产物性质,以pBV220为载体,在大肠杆菌成功进行了基因克隆表达,并纯化了重组蛋白Ste22,其分子量为35KD。酶学活性研究证明Ste22为鼠李糖糖基转移酶,能够催化鼠李糖基由TDP-L-rhamnose转移到多糖重复单元增长链,形成糖苷键,在依博素生物合成中具有重要作用。本文有效确定了ste5和ste22基因在依博素生物合成中的作用,为通过组合生物学:途径研究多糖结构与生物活性关系,获得具有生物活性的新结构多糖奠定了较好的基础。上述研究均未见国内外报道。(本文来源于《中国协和医科大学》期刊2008-10-01）
依博素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的依博素是由链霉菌产生的一种新型胞外多糖,具有显着抗类风湿性关节炎的作用,我们研究已确定了该多糖的生物合成基因簇(ste)。为了对依博素结构进行改造以提高其生物活性,对其生物合成基因ste22进行了异源置换研究。方法采用PCR扩增方法从乳酸菌获得了编码葡萄糖糖基转移酶的基因gtf,通过基因同源重组双交换,从链霉菌中置换了ste22基因。采用白细胞介素-1合成酶活性测定方法及小鼠巴豆油急性炎症模型,初步确定了基因置换株的依博素衍生物生物活性。结果获得了葡萄糖糖基转移酶基因置换株Streptomyces sp.139(gtf-22),产生了依博素新衍生物EPS-22g。研究表明该衍生物与依博素相比,葡萄糖比例从2.14%显着上升到48.64%,体外活性实验显示,其对炎症细胞因子白细胞介素-1合成关键酶ICE抑制率高于依博素,小鼠巴豆油急性炎症体内活性分析结果证明,该衍生物抑制活性亦高于依博素。结论采用异源基因置换生物合成基因的方法改造依博素产生菌,可能是获得生物活性较好新多糖衍生物的一种有效手段。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
依博素论文参考文献
[1].白利平,姜蓉,郭连宏,张洋,李元.ste3与ste4基因双敲除对依博素生物合成的影响[J].中国生物工程杂志.2015
[2].郭连宏,张洋,鲍勇刚,白利平,姜蓉.依博素生物合成基因ste22的异源置换研究[J].中国医药生物技术.2015
[3].郭连宏,张洋,赵宏阳,仲伟潭,张雪霞.依博素检测方法的研究[J].中国新药杂志.2015
[4].张洋.依博素抗炎作用机理的研究[D].北京协和医学院.2013
[5].张洋,郭连宏,李元.依博素对THP-1细胞炎症细胞因子的作用[J].药学学报.2013
[6].白利平,谢鸿观,单俊杰,姜蓉,张洋.糖基转移酶基因双敲除对依博素生物合成的影响[J].中国生物工程杂志.2009
[7].李晓华.依博素生物合成基因ste8及ste9的生物功能和ste15表达产物的酶学性质研究[D].中国协和医科大学.2009
[8].常明.依博素生物合成基因ste7、ste26和ste27性质功能的研究[D].中国协和医科大学.2009
[9].白利平,姜蓉,单俊杰,郭连宏,张洋.ste7与ste15双基因敲除对依博素生物合成的影响[J].微生物学报.2009
[10].王岚.依博素生物合成基因ste5、ste22的克隆、表达和功能研究[D].中国协和医科大学.2008