徐朝霞[1]2004年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用及机制研究》文中指出牛磺酸(Taurine,又名二氨基乙磺酸)是体内一种β—氨基酸,属于非蛋白质氨基酸,主要分布在兴奋性较高的组织如神经系统、肌肉组织、视网膜及淋巴细胞和血小板中,在人体中起着重要的生理作用。作为内源性细胞保护剂,它是机体重要的抗病因子之一。牛磺酸是视网膜中含量最丰富的游离氨基酸,在视网膜中发挥抑制性神经调质作用,最新的研究表明牛磺酸可能会抑制谷氨酸的兴奋毒作用。有研究显示,糖尿病视网膜病变早期,在视网膜毛细血管病变发生之前视网膜中神经元和神经胶质细胞功能就发生了障碍,可表现为:Müller细胞中神经胶质原纤维酸性蛋白表达增加、谷氨酸转运蛋白功能障碍及谷氨酸受体NMDA亚型激活等,而视网膜中牛磺酸含量随糖尿病病程延长呈渐进性下降。本实验以链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠为模型,采用透射电镜、氨基酸分析、免疫组化、Western blotting、RT-PCR等技术方法,观察膳食添加牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜超微结构、氨基酸含量的影响及对神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸转运蛋白(GLAST)、谷氨酸受体NMDA亚型(NR1)、谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)表达的影响,旨在深入研究牛磺酸对糖尿病视网膜病变的影响及可能的分子机制。实验结果表明:(1)膳食添加1.2%牛磺酸可以明显改善糖尿病大鼠视网膜的组织病理学及超微结构改变;(2)糖尿病大鼠早期,视网膜中Glu和GABA的含量增加,Glu、GABA的免疫反应性增强,添加牛磺酸不但降低视网膜中Glu和GABA的含量,而且可明显减弱其分子表达。(3)1个月的糖尿病大鼠,视网膜中GFAP mRNA及其蛋白表达无明显改变,从2个月开始,视网膜中GFAP mRNA及其蛋白表达增强,且呈时间-效应关系;牛磺酸能够下调病程在2个月以上糖尿病大鼠视网膜中GFAP mRNA及蛋白表达。(4)自糖尿病大鼠1个月始,视网膜中GLAST mRNA表达减弱,NR1 mRNA表达增加,它们均呈时间-效应关系。牛磺酸能够上调1～3月的糖尿病大鼠视网膜GLAST mRNA的表达,下调1～3个月的糖尿病大鼠视网膜NR1 mRNA表达。上述结果提示:牛磺酸可改善糖尿病大鼠早期视网膜的组织病理学和超微结构改变,降低视网膜中Glu和GABA含量,通过下调GFAP蛋白及mRNA表达、上调GLAST
曾凯宏[2]2008年在《牛磺酸对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞改变的防护效应及防护机制研究》文中研究说明糖尿病(Diabetes mellitus, DM)的发病率在世界范围内呈快速增长的趋势。糖尿病视网膜病变(Diabetic retinopathy, DR)是糖尿病最为常见的严重并发症,是造成成年人失明的主要原因。DR的临床症状主要包括:视网膜血管渗透性增加、水肿以及内皮细胞增生等。目前,治疗DR最主要的方法是全视网膜光凝固法(Panretinal photocoagulation, PRP)。减少DR发病率的方法主要包括控制糖尿病患者血糖水平和血压。然而,一些患者尽管能很好的控制血糖水平和血压,但仍会发展成DR。因此寻找一种新的防治DR的方法已成为必需。长期以来,DR的防治重点是针对血管病变。然而,越来越多的研究发现,糖尿病患者眼底出现可测的微血管病变之前就出现了视网膜Müller细胞功能的改变,Müller细胞的改变先于血管改变,Müller细胞的改变最终导致视网膜微血管发生病变,并且随着微血管病变的出现,进一步发展。所以,从临床意义出发,对DR的防治重点应在视网膜血管病变之前。一些研究报道,Müller细胞凋亡、胶质原纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein, GFAP)在Müller细胞中过表达、Müller细胞中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)分泌增加和谷氨酸代谢异常可能是糖尿病引起视网膜功能损害的早期因素,这些因素继而引起视网膜内谷氨酸浓度增加,增加的谷氨酸浓度会过度刺激突触后神经元细胞膜上的谷氨酸受体,对神经细胞造成明显的毒性作用,并且谷氨酸浓度过高会加速视网膜微血管细胞的死亡,进而发展成临床可见的DR。近年来,对Müller细胞的研究主要集中在其转运和清除神经元释放的谷氨酸的能力上。谷氨酸转运体(Glutamate transporters, GLAST)、谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase, GS)以及谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase, GAD)是Müller细胞转运并降解谷氨酸的几个重要环节。Müller细胞通过其胞膜上的GLAST摄取神经元释放的谷氨酸,摄入的谷氨酸经Müller细胞内GS转化成无毒的谷氨酰胺,谷氨酰胺再运出细胞外提供给神经元合成谷氨酸。摄入Müller细胞的谷氨酸也可经细胞内的GAD降解成γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)。通过这种方式,视网膜神经递质池被重新补充,谷氨酸兴奋毒性受到抑制。牛磺酸是视网膜组织中含量较高的一种游离氨基酸。以往研究表明,牛磺酸在视网膜中具有多种复杂的生物学效应。与视网膜神经组织的发育、分化、正常结构及功能的维持、移植后的再生及一些视网膜疾病的发病机制都有密切的联系。视网膜是通过血-视网膜屏障来富集牛磺酸的,牛磺酸脂溶性差,通过细胞膜的速度较慢,但其在视网膜细胞内外的浓度差可达400:1,这是由于视网膜细胞上存在大量牛磺酸转运蛋白(Taurine transporter,TauT),所以牛磺酸能很快进入视网膜细胞,发挥其视觉保护作用。有实验证实,在高血糖患者体内,大量山梨醇聚集可引起体内代偿性的牛磺酸消耗增加,从而使视网膜色素上皮细胞、血小板、神经以及晶状体中牛磺酸含量降低。已经证实,糖尿病时细胞内牛磺酸缺乏是引起慢性细胞毒性的一个主要因素。临床研究发现,给胰岛素依赖型糖尿病病人膳食中补充牛磺酸,可使血浆和血小板中牛磺酸水平恢复正常,血小板聚集得到改善。另外,牛磺酸还可以降低糖尿病死亡率。尽管牛磺酸对糖尿病的防护效应已经得到证实,牛磺酸对糖尿病诱导的Müller细胞改变的防护作用没有报道。基于以上分析,我们推测,牛磺酸可能对糖尿病引起视网膜Müller细胞改变具有防护效应。本研究体内实验采用链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)诱导的Sprague-Dawley (SD)大鼠糖尿病模型,以牛磺酸强化的饲料对糖尿病大鼠进行营养干预。体外实验采用SD大鼠视网膜Müller细胞高糖模型,在培养介质中添加牛磺酸干预。通过HE染色、电镜、TUNEL、ERG、免疫组织化学、氨基酸分析、免疫细胞化学、激光共聚焦分析技术、流式细胞技术、RT-PCR、Western blotting、放射液闪等先进实验技术方法,在体内观察糖尿病诱导的大鼠视网膜结构和功能的改变及牛磺酸的防护效应,体外观察高糖诱导的Müller细胞形态和功能的改变及牛磺酸的防护效应,并在体内外进一步研究牛磺酸防护糖尿病和高糖引起的Müller细胞改变的分子机制。主要结果和结论如下:1. STZ诱导糖尿病12周后,大鼠视网膜内核层(Inner nuclear layer, INL)和神经节细胞层(Ganglion cell layer, GCL)细胞数显着减少,Müller细胞胞体出现肿胀。超微结构显示,Müller细胞核固缩,核电子密度增大,染色质边集,细胞空泡变性。5%牛磺酸干预后,以上病理改变和超微损伤明显减轻。但牛磺酸干预对血糖没有明显影响,提示牛磺酸对糖尿病大鼠早期视网膜病变的防护作用并非通过降低血糖来实现的。2.视网膜电图(Electroretinogram, ERG)检测结果显示,STZ诱导糖尿病8周后,大鼠视杆细胞反应a波、b波、最大反应b波、phot-ERG b波、OPs p4波的潜伏期明显延长,OPs Os1波的振幅明显降低。1%牛磺酸干预对以上各波的潜伏期无明显影响,但可增加OPs Os1波的振幅;5%牛磺酸干预可明显缩短视杆细胞反应a波、b波、最大反应b波、phot-ERG b波、OPs p4波的潜伏期,增加OPs Os1波的振幅。表明糖尿病早期即发生了视网膜神经功能损伤,牛磺酸对这一损伤具有明显的防护效应。3. STZ诱导糖尿病2周时,视网膜中即可见少量TUNEL阳性细胞。12周时,视网膜中可见大量TUNEL阳性细胞,阳性细胞占总细胞的33%左右,主要分布在外核层和内核层。1%和5%牛磺酸干预均使视网膜中TUNEL阳性细胞数明显减少。Müller细胞经25 mmol/L高糖培养后,细胞形态发生明显改变,存活率明显降低,细胞核中出现典型的凋亡小体。流式细胞分析结果表明,高糖培养使Müller细胞凋亡率明显增加(高糖组36.52% vs正常对照组0.34%)。在培养介质中加入0.1mmol/L、1mmol/L和10mmol/L牛磺酸可显着提高Müller细胞存活率,降低Müller细胞凋亡率(低、中、高剂量牛磺酸组Müller细胞凋亡率分别是:16.43%、3.75%和2.01%)。4. GFAP是胶质细胞反应性增生的标志物,VEGF是一种促新生血管形成的生长因子。体内STZ诱导糖尿病2、4、8和12周,大鼠视网膜GFAP、VEGF mRNA及蛋白水平呈时间依赖性上调。牛磺酸干预可有效拮抗GFAP、VEGF mRNA及蛋白表达上调。体外25 mmol/L高糖培养也使Müller细胞GFAP、VEGF mRNA及蛋白表达增加。1 mmol/L和10 mmol/L牛磺酸可有效抑制高糖诱导的GFAP、VEGF上调表达。体内外实验结果表明,牛磺酸可有效抑制糖尿病和高糖诱导的胶质细胞反应性增生、下调Müller细胞中VEGF的表达。5.糖尿病和高糖诱导Müller细胞中TauT表达抑制,引起TauT mRNA及蛋白表达明显下降。牛磺酸干预可上调Müller细胞中TauT的表达,提高细胞内外牛磺酸的转运能力,从而有效抑制糖尿病引起的视网膜中牛磺酸浓度降低。6. STZ诱导糖尿病引起视网膜内谷氨酸浓度显着升高。GLAST、GS和GAD是Müller细胞转运并降解谷氨酸的几个重要环节。糖尿病和高糖引起Müller细胞GLAST、GS和GAD mRNA及蛋白表达显着下降。高糖培养时,Müller细胞对L-[2,3-3H]-谷氨酸的摄取能力明显减弱。牛磺酸干预明显增加Müller细胞中GLAST、GS和GAD的表达,增强Müller细胞谷氨酸摄取能力,使视网膜中谷氨酸浓度明显降低,进而有效抑制糖尿病引起的谷氨酸兴奋毒性。综上所述,糖尿病和高糖诱导Müller细胞结构和功能发生异常改变,牛磺酸对上述异常改变具有防护效应。进一步研究发现。牛磺酸通过提高Müller细胞牛磺酸转运能力、谷氨酸转运及清除能力来维持视网膜牛磺酸浓度的稳态及内环境的稳定。该实验结果为牛磺酸用于糖尿病早期视网膜病变的防治提供重要的实验依据。
徐朝霞, 糜漫天, 许红霞[3]2005年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜的保护作用》文中认为目的探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及mRNA表达的影响。方法将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型随机分成1,2,3个月组,在普通饲料中加入1·2%牛磺酸进行营养干预,用免疫组化、RT-PCR及Westemblotting技术检测视网膜GFAPmRNA及其蛋白表达。结果1个月的糖尿病大鼠,视网膜中GFAPmRNA及其蛋白表达无明显改变,从2个月开始,视网膜中GFAPmRNA及其蛋白表达增强,且呈时间-效应关系;牛磺酸能够下调病程在2~3个月糖尿病大鼠视网膜中GFAPmRNA及蛋白表达。结论牛磺酸可能间接作用于GFAP,牛磺酸下调GFAP蛋白及mRNA表达,反映牛磺酸对糖尿病视网膜病变具有保护作用。
徐朝霞, 糜漫天, 许红霞[4]2004年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜GFAP mRNA及其蛋白表达的影响》文中提出目的探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)及mRNA表达的影响。方法将链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型随机分成1、2、3月组,在普通饲料中加入1.2%牛磺酸进行营养干预,用免疫组化、RT-PCR及Western blotting技术检测视网膜GFAP mRNA及其蛋白表达。结果1个月的糖尿病大鼠,视网膜中GFAP mRNA及其蛋白表达无明显改变,从2个月开始,视网膜中GFAP mRNA及其蛋白表达增强,且呈时间-效应关系;牛磺酸能够下调病程在2-3月糖尿病大鼠视网膜中GFAP mRNA及蛋白表达。结论牛磺酸可能间接作用于GFAP,牛磺酸下调GFAP蛋白及mRNA表达,反映牛磺酸对糖尿病视网膜病变具有保护作用。
曾凯宏, 许红霞, 张亚洁, 糜漫天, 陈芳[5]2008年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜损伤的防护效应》文中研究表明目的应用链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)诱导建立糖尿病大鼠动物模型,观察膳食中添加牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜损伤的影响。方法SD大鼠用链脲佐菌素诱导糖尿病,分为正常对照组、糖尿病组、1%牛磺酸干预糖尿病组、5%牛磺酸干预糖尿病组、胰岛素治疗糖尿病组。2个月后测定视网膜电图(electroretinograph,ERG),并应用免疫组织荧光双标化学技术检测视网膜中胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein,GFAP)、牛磺酸转运蛋白(taurine trans-porter,Taut)表达。结果视网膜电图结果显示:糖尿病组视杆细胞反应a波、b波、最大反应b波、phot-ERGb波、OPsp4波的潜伏期分别比正常对照组明显延长;OPsOs1波的幅值比正常对照组明显降低;5%牛磺酸干预可明显缩短以上各波的潜伏期,升高OPsOs1波的幅值。免疫荧光结果显示:与正常对照组相比,糖尿病组整个视网膜GFAP表达明显增加,其阳性表达主要出现在外核层、外网状层、内核层、内网状层,视网膜中Taut的表达明显减少,只在外界膜、外核层和外网状层有少量表达;1%牛磺酸和5%牛磺酸干预可降低糖尿病大鼠视网膜中GFAP的表达,增加视网膜中Taut的表达,呈剂量效应关系。结论膳食喂饲牛磺酸对糖尿病引起的视网膜损伤有一定的保护作用,其保护作用可能与降低视网膜中GFAP表达、增加Taut表达有关。
徐朝霞, 糜漫天, 许红霞[6]2004年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响》文中提出目的 观察糖尿病大鼠视网膜早期病变 ,探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响。方法 选择健康成年SD大鼠 5 0只 ,随机分成正常对照组 (CON)、糖尿病 1月组 (DM 1)、牛磺酸干预的糖尿病 1月组 (DM1+T)、糖尿病 3月组 (DM 3)、牛磺酸干预的糖尿病 3月组 (DM3+T)。一次性腹腔内注射链尿佐菌素 (STZ) ,建立糖尿病大鼠模型 ,在普通饲料中加入 1 2 %牛磺酸进行营养干预 ,对各组视网膜进行光镜HE染色及透射电镜观察。结果 视网膜HE染色显示 ,糖尿病组视网膜较正常对照组明显变薄 ,神经节细胞数明显减少。牛磺酸干预后视网膜厚度较糖尿病组增加 ,神经节细胞数相对增多。观察超微结构发现糖尿病大鼠感光细胞外段膜盘排列紊乱 ,膜盘间隙增大 ,严重者出现膜盘断裂、溶解 ;视杆内段线粒体等细胞器肿胀变性 ,内网状层轴突肿胀、空泡样变。牛磺酸干预后感光细胞外段膜盘排列明显变整齐 ,线粒体肿胀较轻 ,内网状层轴突肿胀较糖尿病组轻。结论 牛磺酸可明显改善糖尿病视网膜的超微结构改变
徐朝霞[7]2009年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸及γ-氨基丁酸的影响》文中研究表明目的探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)的影响,旨在评价牛磺酸对糖尿病视网膜病变的保护作用。方法将SD大鼠随机分成3组,即正常对照组、糖尿病组、牛磺酸干预糖尿病组。一次性腹腔内注射链脲佐菌素(STZ),建立糖尿病大鼠模型,在普通饲料中加入1.2%牛磺酸营养干预3个月后,用免疫组化及氨基酸分析法观察视网膜中Glu及GABA的浓度与表达。结果与正常对照组比较,糖尿病大鼠视网膜中牛磺酸浓度下降了6.8%,Glu和GABA的浓度分别增加了19.9%、81.6%(P<0.01),且免疫反应性增强。膳食补充牛磺酸后,与糖尿病组比较,大鼠视网膜中牛磺酸浓度增加了9.5%,而Glu和GABA的浓度分别降低了9.9%、29.2%(P<0.01),同时Glu及GABA的强阳性染色明显减弱。结论糖尿病大鼠,视网膜中Glu和GABA浓度增加,牛磺酸浓度下降。体外补充牛磺酸可能通过降低Glu和GABA浓度保护Mller细胞,从而减轻视网膜损伤。
李祖荣[8]2007年在《牛磺酸对糖尿病早期大鼠视网膜氧化损伤的保护作用》文中提出研究背景:糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是糖尿病(diabetic mellitus,DM)最重要的并发症之一,其病因和发病机制错综复杂。临床上防治DR以控制血糖、抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达、拮抗蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的活化、减少糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的生成及阻断多元醇代谢通路等为主要手段,但效果并不理想,目前尚缺乏根治性的疗法。近年研究表明,氧化应激(oxidative stress,OS)是DR不同发病机制共同的起始途径,为药物干预DR提供了思路,但对干预效果尚存在争议。本研究探讨牛磺酸(taurine,tau)早期干预防治DR的效果。目的:观察牛磺酸对DM早期大鼠视网膜氧化损伤的保护作用,探讨药物作用机制,为临床应用提供实验依据。方法:选择75只正常Wistar大鼠,随机分为正常对照组(normal control,CON组)、糖尿病组(diabetes group,DM组)、糖尿病牛磺酸治疗组(taurine-treated group,D+Tau组)和糖尿病维生素E治疗组(vitamin E-treated group,D+VE组)等4组。采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)的方法建立DM模型。将牛磺酸及维生素E用0.5%羧甲基纤维素钠分别配制成浓度为3%和1%的溶液。D+Tau组和D+VE组按10ml/kg体重分别给予牛磺酸和维生素E溶液灌胃,每日一次;CON组和DM组大鼠每日相同时间灌服相应体积的0.5%羧甲基纤维素钠,实验为期8周。采用葡萄糖氧化酶法测定血糖,苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和透射电镜观察视网膜形态学改变,化学比色法检测视网膜组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性,免疫组织化学染色观察视网膜组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthetase,iNOS)的表达情况。结果:经腹腔一次性注射STZ 60mg/kg后72小时,成功地建立了以高血糖为特征的Wistar大鼠DM模型,模型成功率为83.33%。治疗前DM组、D+Tau组及D+VE组血糖较CON组明显升高(P<0.01),但叁组间血糖无明显差异(P>0.05)。CON组、DM组和D+VE组大鼠治疗前、后血糖无明显改变(P>0.05);D+Tau组大鼠治疗后血糖明显低于治疗前水平(P<0.05)。治疗结束时,D+Tau组大鼠血糖低于DM组(P<0.05),但仍较CON组高(P<0.01);D+VE组与DM组相比未见明显差异。治疗8周后,与CON组比较,DM组大鼠视网膜感光细胞外节膜盘排列紊乱;内核层细胞和神经节细胞水肿,线粒体变性,细胞核固缩;神经纤维轴突水肿,胞器减少;毛细血管内皮细胞肿胀变形,管腔明显狭窄。D+Tau组较DM组视网膜超微结构改变明显减轻,主要表现为神经节细胞轻度变性,胞器水肿好转。D+VE组较DM组视网膜超微结构改变有所减轻,但仍较D+Tau组重,主要表现为内核层细胞和神经节细胞水肿,线粒体肿胀,可见空泡样变性。与CON组相比,DM组大鼠视网膜MDA含量升高了317.39%(P<0.01),SOD活性下降了25.42%(P<0.01)。与DM组比较,D+Tau组视网膜组织MDA含量降低了67.14%(P<0.01),SOD活性升高了25.10%(P<0.01);D+VE组视网膜组织MDA含量降低了30.40%(P<0.01),SOD活性升高了24.59%(P<0.01)。D+Tau组视网膜组织中MDA含量较D+VE组降低更为明显(P<0.01)。免疫组化染色显示,CON组大鼠视网膜内有极少量的iNOS阳性细胞,散在分布于神经节细胞层,阳性细胞平均数为1.75±0.72;与CON组相比,DM组大鼠视网膜内iNOS阳性细胞显着增多(P<0.01),阳性细胞主要集中于神经节细胞层,少量散在分布于内核层,阳性细胞平均数为25.20±0.84;与DM组相比,D+Tau组及D+VE组大鼠视网膜内iNOS阳性细胞数明显减少(P<0.01),阳性细胞仅存在于神经节细胞层,阳性细胞平均数分别为13.07±0.93和14.15±0.75,这两组间阳性细胞平均数比较无明显差别(P>0.05)。结论:氧化应激损伤参与了早期DR发病。牛磺酸具有一定的降低血糖、清除自由基和提高视网膜组织抗氧化的能力,对DM早期大鼠视网膜氧化损伤具有一定的保护作用。推测其可能机制为调节糖代谢紊乱、降低视网膜组织MDA含量、提高SOD活性以及下调视网膜组织iNOS蛋白的表达,从而改善视网膜组织的超微结构。
徐朝霞, 童琳琳, 牛艳昕, 罗信国[9]2006年在《牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响(英文)》文中指出背景:糖尿病视网膜病变是糖尿病普通的并发症,牛磺酸是视网膜中含量最丰富的游离氨基酸,它是视网膜再生和发育必需的营养因子,缺乏牛磺酸会引起视网膜结构和功能改变。目的:探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mR-NA及其蛋白表达的影响。设计:随机对照观察。单位:中国人民解放军第叁军医大学。材料:试验于2003-3/2003-12在第叁军医大学完成。选取封闭群SD大鼠54只,体质量为250g。将造模成功的糖尿病大鼠54只随机分为糖尿病1月组、牛磺酸干预糖尿病1月组、糖尿病2月组、牛磺酸干预糖尿病2月组、糖尿病3月组和牛磺酸干预糖尿病3月组6组,每组9只。同期选取正常对照组共15只。方法:动物单笼喂养,自由进食饮水,实验前禁食12h,用链脲佐菌素诱导糖尿病,用尿糖试纸测尿糖达(+++)以上,尾静脉采血测血糖浓度大于16.7mmol/L即为模型建立成功。采用免疫组化、RT-PCR和Westernblotting等技术方法,检测神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白的表达。观察牛磺酸对糖尿病视网膜病变大鼠神经元及神经胶质细胞的影响。主要观察指标:观察神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA和蛋白表达。结果:①免疫组化分析显示:糖尿病大鼠1个月时,牛磺酸即可抑制神经胶质原纤维酸性蛋白的免疫反应性,随着牛磺酸干预时间的延长,神经胶质原纤维酸性蛋白免疫反应性渐弱。②RT-PCR检测:2个月始,糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达开始增大,牛磺酸明显下调神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA的表达。③3个月的糖尿病组神经胶质原纤维酸性蛋白蛋白表达最强。牛磺酸干预糖尿病大鼠2个月时,神经胶质原纤维酸性蛋白表达减少。结论:牛磺酸可下调神经胶质原纤维酸性蛋白及mRNA表达,对糖尿病视网膜病变具有保护作用。
曾凯宏, 许红霞, 糜漫天, 张亚洁, 陈芳[10]2008年在《牛磺酸抑制糖尿病大鼠视网膜Muller细胞VEGF表达的研究》文中研究表明目的:进一步了解糖尿病引起视网膜受损的分子机制、探讨牛磺酸保护糖尿病大鼠视网膜损伤的可能机制。方法用链脲佐菌素诱导SD大鼠惠糖尿病,分为正常对照组、糖尿病组、1%牛磺酸干预糖尿病组、5%牛磺酸干预糖尿病组、胰岛素治疗糖尿病组。正常对照组、糖尿病组、胰岛素治疗组饲以基础饲料,牛磺酸干预组饲以基础饲料分别添加1%、5%牛磺酸的饲料喂养,胰岛素治疗组每天皮下注射20U/kg胰岛素。在第2周、1月、2月、3月取视网膜,用RT-PCR、免疫组织荧光化学、Western-blotting检测视网膜Muller细胞VEGF mRNA和蛋白表达情况。结果:经链脲佐茵素诱导患糖尿病2周后,SD大鼠视网膜Muller细胞VEGF mRNA和蛋白表达增加,且随病程的延长表达量有持续增加趋势(P<0.05)。患糖尿病3月后,整个视网膜中VEGF免疫染色明显增强,尤以外网状层(OPL)、内网状层(IPL)和视网膜外段变化最明显。牛磺酸干预糖尿病1月后。大鼠视网膜Muller细胞VEGF mRNA和蛋白的表达下调(P<0.05)。结论:牛磺酸抑制糖尿病患者视网膜Muller细胞VEGF的表达,减轻糖尿病引起的视网膜损害。
参考文献：
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[2]. 牛磺酸对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞改变的防护效应及防护机制研究[D]. 曾凯宏. 第叁军医大学. 2008
[3]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜的保护作用[J]. 徐朝霞, 糜漫天, 许红霞. 中国公共卫生. 2005
[4]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜GFAP mRNA及其蛋白表达的影响[C]. 徐朝霞, 糜漫天, 许红霞. 中国营养学会第九次全国营养学术会议论文摘要汇编. 2004
[5]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜损伤的防护效应[J]. 曾凯宏, 许红霞, 张亚洁, 糜漫天, 陈芳. 第叁军医大学学报. 2008
[6]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜超微结构的影响[J]. 徐朝霞, 糜漫天, 许红霞. 中国公共卫生. 2004
[7]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜谷氨酸及γ-氨基丁酸的影响[J]. 徐朝霞. 解放军预防医学杂志. 2009
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[9]. 牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜神经胶质原纤维酸性蛋白mRNA及其蛋白表达的影响(英文)[J]. 徐朝霞, 童琳琳, 牛艳昕, 罗信国. 中国临床康复. 2006
[10]. 牛磺酸抑制糖尿病大鼠视网膜Muller细胞VEGF表达的研究[J]. 曾凯宏, 许红霞, 糜漫天, 张亚洁, 陈芳. 现代生物医学进展. 2008