曾艳丽[1]2004年在《肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究》文中研究指明肝细胞癌是世界范围内常见的一种高度恶性且预后不良的肿瘤，具有侵袭性强，临床进展快，转移早，预后差的特点。而目前临床上对肝癌的早期诊断尚缺乏特异性的指标，因此，我所朱武凌博士采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)的方法，建立了肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)消减cDNA(complement deoxyribonucleic acid，cDNA)文库，以期在分子水平寻找与肝癌发生发展有关的新因素，从而为更深入的研究肝癌的发生机制，开展早期诊断并进行相关的基因治疗打下坚实的遗传学基础。对肝癌消减cDNA文库的34个阳性克隆采用Northern杂交、反转录PCR(reverse transcriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR)进行分析后发现，肝癌差异表达基因的序列表达标签(expressed sequence tag，EST)P02在肝细胞癌中高表达。对P02进行Blast同源性分析得知P02与人翻译调控肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein，TCTP)mRNA的碱基序列高度相似，且两者具有完全相同的开放读码框(open reading frame，ORF)，即两者编码的氨基酸完全相同，因此我们认为P02就是TCTP。但关于TCTP的功能目前尚存在诸多争议。原位分子杂交(in situ hybridization，ISH)是根据核酸碱基配对的原则，利用已知碱基序列并带有标记物的核酸作为探针，在一定条件下，在组织原位与待测核酸进行分子杂交形成杂交体，然后通过与标记物相应的检测系统，应用组织化学和免疫组织化学的方法检测带有标记物的郑州大学2004年硕士学位论文肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究核酸探针与待测核酸杂交体，从而达到在原位对组织细胞中的待测核酸序列进行定性、定位和相对定量的目的。它是研究基因(尤其是新基因)/EST及其表达活性的首选方法，它不仅具有良好的定位作用，而且具有更高的敏感性、科学性和可靠性等特点，已被越来越多的研究人员广泛的应用于基因(尤其是新基因)/EST功能的研究和测定。 研究目的:检测肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌和结肠癌组织及相应正常组织中的表达情况，明确该基因与这些消化系恶性肿瘤的相关性，以期为它们的早期诊断和治疗提供理论基础。 研究方法:(1)所用组织标本来源于郑州大学第一、二附属医院，郑州市第四人民医院，河南省肿瘤医院，其中肝癌13例，食管癌18例，胃癌16例，结肠癌9例。(2)从肝癌组织中抽取总RNA，经反转录PCR后得到P02的PCR产物，将P02的PCR产物进行纯化后，用随机引物延伸法对P02的PCR产物进行地高辛标记，应用斑点杂交检测探针灵敏度，然后用标记的P02探针对消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌和结肠癌组织及相应正常组织中的石蜡切片进行cDNA/mRNA原位杂交，以不加探针的原位杂交液作阴性对照。(3)统计数据采用SPSS 10.0统计软件进行分析。计数资料采用FISher精确概率法和多个独立样本的秩和检验，并以Q=0 .05作为显着性检验水准。 研究结果:(l)用斑点杂交法检测探针灵敏度达1.oPg，提示标记探针的灵敏性比较理想，可用于原位杂交。(2) P02在肝硬化组织中主要定位于肝细胞中，在肝细胞癌中主要定位于癌细胞的胞浆中，P02在肝硬化和肝癌组织中的阳性表达率分别为25%和92.3%，两者相比差异显着(尸<0.05)。(3) P02在正常食管、胃和结肠组织中主要定位于基底层细胞中，在食管癌、胃癌和结肠癌组织中则主要定位于癌细胞的胞浆中，统计学分析表明P02在食管癌、胃癌和结肠癌及相应正常组织中的阳性表达率亦具有显着性差异(尸<0.05)。(4)将P02在肝癌、食管癌、胃癌和结肠癌中表达的阳性率进行比较，结果发现除P02在肝癌与结肠癌组织中的表达存在着差异(尸<0.05)外，P02在其余癌组织中的表达两两相比均无明显差异(尸>.05)，说明肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中的表达具有一定的组织特异性，但这也可能与结肠癌样本数目太少有郑州大学2004年硕士学位论文肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究关，可进一步扩大样本数目进行研究证实。 结论:l、原位杂交方法可从形态学方面对新发现的基因/EST进行研究，它较RT一PCR法更可靠，更直观，更经济，并可对基因/EST做出定位分析。 2、使用原位杂交的方法确定肝癌消减cDNA克隆P02是肝细胞癌相关的差异表达基因的表达序列标签。 3、肝癌相关的cDNA片段P02在肝癌和肝硬化组织中的表达存在着差异，提示P02在肝癌的发生中起一定的促进作用。 4、肝癌相关的cDNA片段P02在消化系恶性肿瘤如食管癌，胃癌，结肠癌中亦存在着差异表达，提示P02在食管癌，胃癌，结肠癌的发生中也起一定的促进作用，有可能成为消化系恶性肿瘤早期辅助诊断和基因治疗的一个靶点。
曾艳丽, 段芳龄, 陈香宇, 李玉龙[2]2004年在《肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究》文中认为目的 探讨肝癌消减片段P0 2在消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌中的表达情况。方法 从肝癌组织中抽取RNA ,进行RT PCR ,然后对PCR产物进行探针标记 ,用此标记的探针对肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌及其相应的正常组织进行检测。结果 肝癌消减片段P0 2不仅在肝癌及肝硬化组织中存在着差异表达 ,而且在食管癌、胃癌、结肠癌及其相应的正常组织中也存在着差异表达。结论 肝癌消减片段P0 2在消化系恶性肿瘤如肝癌、食管癌、胃癌、结肠癌中均呈差异表达 ,提示肝癌消减片段P0 2与消化系恶性肿瘤的发生密切相关 ,有可能成为消化系恶性肿瘤检测的一个重要的标志物
佚名[3]2005年在《消化系统疾病》文中指出20050367 酒精性肝病的危险因素分析/鲁晓岚…//胃肠病学和肝病学杂志。-2004,13(2).-172～174 1270名饮酒者中共检出单纯酒精性肝病(ALD)患者83例,其中酒精性脂肪肝72例,酒精性肝炎6例,酒精性肝硬化4例。结果:①每日饮酒精≥40g,持续饮用5年以上,ALD患病率明显增加,最高的OR值(10.7)出现
参考文献：
[1]. 肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究[D]. 曾艳丽. 郑州大学. 2004
[2]. 肝癌消减片段P02在消化系恶性肿瘤中表达状况的研究[J]. 曾艳丽, 段芳龄, 陈香宇, 李玉龙. 胃肠病学和肝病学杂志. 2004
[3]. 消化系统疾病[J]. 佚名. 中国医学文摘.内科学. 2005