论文摘要
NODAL（Nodal growth differentiation factor）是一种细胞因子,为研究其功能,需建立敲除NODAL基因的细胞系。构建了两种作用于不同靶位点的CRISPR/Cas9表达载体和一种打靶载体,并通过电转法导入三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231,经嘌呤霉素抗性筛选和挑单细胞克隆,再应用PCR和测序技术鉴定基因型,以及Western Blot检测蛋白表达。将等位基因同源重组鉴定为阳性的8个单细胞克隆再经非同源重组和大片段缺失基因型鉴定,仅一个单细胞克隆的靶位点发生移码突变,4个单细胞克隆的靶位点有大片段缺失发生,4个单细胞克隆的靶位点检测到野生型等位基因。蛋白表达检测结果显示,仅有2个单细胞克隆未检测到NODAL蛋白表达,3个单细胞克隆的NODAL蛋白表达降低,另外3个单细胞克隆的NODAL蛋白表达无明显变化。最终获得了基因型和蛋白表达鉴定为敲除NODAL基因的单细胞克隆,为进一步研究NODAL在乳腺癌细胞中的分子机制奠定了基础。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 李念峰,方天星,倪玉芳,曾凡才
关键词: 乳腺癌,基因敲除,基因
来源: 生物技术通报 2019年11期
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学
单位: 西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学实验室
基金: 四川省科技厅-泸州市-泸州医学院联合基金（LY-100）,四川省科技厅基金（2013SZZ001）
分类号: Q78
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0426
页码: 240-250
总页数: 11
文件大小: 5963K
下载量: 265
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