金钱鱼催乳素基因SaPRL的克隆及原核表达

金钱鱼催乳素基因SaPRL的克隆及原核表达

论文摘要

金钱鱼(Scatophagus argus)对水环境的盐度变化具有很强的适应能力。为了解该鱼的催乳素基因(SaPRL)在其渗透压调节过程中所起到的作用,本研究采用RACE技术,对SaPRL基因进行了全长cDNA序列的克隆及序列分析。结果表明,SaPRL的cDNA序列全长为1 550 bp,可编码212个氨基酸,具有与其他物种共同的保守区域Growth hormone like superfamily;在氨基酸序列上,它与黑棘鲷(Acanthopagrus schlegelii)的催乳素基因(PRL)相似性较高,达82%,而与人(Homo sapiens)的PRL的相似性仅为39%。用半定量法(sq-PCR)进行组织分布分析显示,在盐度为2.5%的海水中,金钱鱼SaPRL基因主要于脑和垂体中有高丰度表达。此外,SaPRL主要分布在金钱鱼脑组织的脑膜中。最后,本研究成功构建了SaPRL-pET28a(+)原核表达质粒,当在含该质粒的宿主菌中加入1 mmol/L的IPTG并以32℃诱导4h后,能获得大量融合蛋白的表达;该诱导条件下的蛋白主要以包涵体形式存在,且于4 mol/L尿素中的溶解度最大。上述研究结果,为探讨SaPRL基因在金钱鱼盐度适应过程中的作用机理提供了重要的基础资料。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 SaPRL基因的序列分析
  •   1.2 SaPRL的组织分布分析
  •   1.3 SaPRL在脑中的组织定位
  •   1.4 SaPRL-pET28a (+) 原核表达质粒的构建
  •   1.5 SaPRL重组蛋白诱导表达条件的优化及鉴定
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 实验动物、菌株及质粒
  •   3.2 主要试剂
  •   3.3 总RNA的提取及c DNA合成
  •   3.4 SaPRL基因的克隆
  •   3.5 序列分析
  •   3.6 SaPRL的组织分布分析
  •   3.7 SaPRL于金钱鱼脑中的免疫组化定位分析
  •   3.8 SaPRL-pET28a (+) 原核表达质粒的构建
  •   3.9 SaPRL重组蛋白的诱导表达
  •   3.1 0 SaPRL重组蛋白表达产物的Western blotting分析
  • 作者贡献
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 梁雪梅,余琳,张俊彬

    关键词: 金钱鱼,催乳素,基因克隆,序列分析,原核表达

    来源: 基因组学与应用生物学 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 水产和渔业

    单位: 上海海洋大学水产与生命学院,深圳大学生命与海洋科学学院

    基金: 中国国家科学技术部项目(项目编号:DF)资助

    分类号: S917.4

    DOI: 10.13417/j.gab.038.004875

    页码: 4875-4884

    总页数: 10

    文件大小: 3509K

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