整合型1,2,4-丁三醇重组菌的构建及共底物发酵

整合型1,2,4-丁三醇重组菌的构建及共底物发酵

论文摘要

1,2,4-丁三醇(BT)是重要的非天然化学品.为构建整合型BT合成菌株,实现木糖、葡萄糖共底物发酵,通过Red系统将基因kivD、xdh整合至Escherichiacoli基因组的xylAB、ptsHI、ptsG、crr位点,并尝试利用廉价的乳糖替代IPTG诱导外源基因表达.结果表明,外源基因整合至xylAB后,生物量降低28%,重组菌Escherichia coli W021能够代谢木糖合成BT(0.7 g/L).添加葡萄糖为共底物后生物量提高36%,但碳分解代谢抑制作用限制了木糖的代谢,BT产量降低14%.进一步整合代谢基因至不同的磷酸转移酶系统(PTS)位点,其中整合至ptsHI基因后BT产量最高,达到2.8g/L.优化葡萄糖、木糖浓度后,BT产量提高到3.6 g/L,进一步优化乳糖替代IPTG后BT产量为1.9 g/L.最后经发酵罐优化,BT产量提高到3.9 g/L,转化率为0.3 mol/mol.本研究构建整合型菌株在廉价乳糖诱导下共底物发酵合成BT,为后续放大研究提供了借鉴.(图6表2参24)

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要试剂与仪器
  •   1.2 菌株与质粒
  •   1.3 引物
  •   1.4 培养基与培养方法
  •   1.5 整合质粒的构建
  •   1.6 整合菌株的构建
  •   1.7 乳糖诱导单因素条件优化
  •   1.8 检测方法
  • 2 结果与分析
  •   2.1 外源基因kivD、xdh整合入xylAB位点对菌体生长及BT合成的影响
  •   2.2 外源基因kivD、xdh整合入ptsHI、ptsG、crr位点对菌体生长及BT合成的影响
  •   2.3 乳糖诱导对工程菌E.coli W031生长及BT合成的影响
  •   2.4 乳糖诱导下的工程菌E.coli W031分批发酵
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 祖金珊,徐世文,陆信曜,宗红,诸葛斌

    关键词: 丁三醇,大肠杆菌,磷酸转移酶系统,混糖发酵,整合表达

    来源: 应用与环境生物学报 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,有机化工,一般化学工业

    单位: 江南大学糖化学与生物技术教育部重点实验室,江南大学工业生物技术教育部重点实验室生物工程学院工业微生物研究中心

    基金: 国家自然科学基金青年科学基金项目(21708016),国家轻工技术与工程一流学科自主课题(LITE2018-01)资助~~

    分类号: Q93;TQ920.6;TQ223.163

    DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.11006

    页码: 966-971

    总页数: 6

    文件大小: 1450K

    下载量: 102

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