导读:本文包含了烟草转化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:细叶百合,WRKY转录因子,克隆,烟草转化
烟草转化论文文献综述
杨柳慧[1]（2019）在《细叶百合LpWRKY20基因的克隆及其对烟草的遗传转化》一文中研究指出细叶百合(Lilium pumilum 花下垂、花被片反卷、花朵娇艳。是一种重要的观赏性花卉,是百合抗性育种的重要亲本。本研究从细叶百合转录组中筛选出WRKY转录因子家族,分析该家族在休眠解除过程中的表达情况;从中选取对休眠解除具有调控作用的基因,分析其对非生物胁迫的响应;克隆该基因并对其进行生物信息学分析;构建植物表达载体转化到烟草中;对转基因植株进行干旱胁迫,通过对干旱胁迫下的表型观察及生理指标测定,明确该基因是否具有抗旱功能。本文主要研究结果如下:1.通过分析细叶百合休眠解除转录组中的WRKY转录因子家族,从中共分离出了40个WRKY转录因子,其中GroupⅠ共有6个基因、GroupII共有28个基因、GroupⅢ有6个基因。随着休眠解除LpWRKY20基因的相对表达量逐渐升高,证明其参与了休眠解除的过程。2.在休眠过程中往往伴随着非生物的胁迫,荧光定量分析表明在不同的非生物胁迫中LpWRKY20表达量存在差异且在不同的组织器官中表达模式也不相同。干旱胁迫下LpWRKY20在鳞茎中出现了明显的上调表达,推测基因对干旱的响应较为敏感。3.该基因开放阅读框(ORF)为1899bp,预测编码632个氨基酸。保守结构域分析显示,LpWRKY具有两个高度保守的WRKY结构域属于GroupⅠ组基因。生物信息学分析显示蛋白相对分子量为68.36kDa,理论等电点为5.45,为亲水性蛋白,不含信号肽且没有跨膜结构;亚细胞定位预测显示该基因在细胞核中表达;蛋白二级结构主要以“mixed”型蛋白存在。4.用双酶切法构建pBI121-LpWRKY20-GFP植物表达载体,经农杆菌介导叶盘法将其转入烟草中并获得抗性植株。利用基因枪法将融合表达载体和pBI121-GFP植物表达载体轰入洋葱表皮细胞进行亚细胞定位分析,结果显示融合表达载体只在细胞核中表达。5.转基因植株在干旱胁迫中的SOD活性、CAT活性均高于对照,且随着时间的延长这种清除体内自由基的能力在显着升高,而MDA含量均低于对照,说明转基因植株细胞膜受损程度较低,其具有较强的自我修复能力。干旱条件下生理指标的变化反应了转基因植株抗性要强于对照,初步推断LpWRK具有抗旱的功能。(本文来源于《东北林业大学》期刊2019-06-01）
杨丽萍,王悦,徐亚男[2]（2019）在《烟草中稳定遗传转化的新技术》一文中研究指出农杆菌介导的植物稳定遗传转化技术已经在植物基因工程领域得到广泛应用.本文介绍了一种由农杆菌介导的新型植物遗传转化技术—发芽种子真空侵染法.应用此方法将表达载体p BI121-HC-Pro转化到烟草植株中,并优化了农杆菌的浓度及真空侵染的条件.半定量RT-PCR(Reverse transcription-PCR)方法检测结果表明这种转化方法可以使HC-Pro在烟草中表达,具有广泛的应用前景.(本文来源于《吉林师范大学学报(自然科学版)》期刊2019年02期）
Rana,Imtiaz,Ahmad[3]（2019）在《甜高粱遗传转化体系优化及烟草果胶质多糖修饰研究》一文中研究指出高粱是最难转化的作物之一。近年来,通过DNA直接导入法和农杆菌间接导入法,已成功转化这种特殊的单子叶作物。但低转化率仍然是高粱转化中急待解决的问题。通过优化转化体系中外植体来源、培养基、抗生素、农杆菌菌株和愈伤组织的侵染反应等,已建立了相对高效的农杆菌转化体系。适宜菌株的选择是遗传转化的关键因素之一;来源大田植株的未成熟胚的适应性远高于温室植株;用于侵染转化的农杆菌浓度过高,可能对外植体造成致命伤害;利用组织抗坏死处理和优化组织培养时间来降低酚类化合物;在组织培养的不同阶段,选择不同培养基容器有利于提高转化效率。总而言之,培养基成分、外植体来源和品种类型等,都是影响农杆菌介导转化的关键因素。在本研究中,我们利用未成熟的花序代替未成熟胚和成熟胚,来优化再生培养。从田间和温室分别选择5个当地基因型品种JR-105,Ji-2731,Keller,Mn-3025和Juti'an,并比较其农杆菌转化后的愈伤组织诱导率和再生率。结果表明,未成熟的花序比未成熟胚产生更多愈伤组织。但是,酚类物质的产生在整个再生阶段是一个严重的问题。综上所述,上述因素是影响遗传转化的关键因素。此外,研究结果显示高粱的农杆菌介导转化具有高度基因型依赖性,并且在中国本地高粱品种中不能实现遗传转化。病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)是基于瞬时表达的反向遗传工具,可用于研究参与某生物过程的未知基因的功能。VIGS是用于基因功能验证的最有效的技术之一,尤其对遗传修饰相对稳定的植物,如高粱和豆科植物。其中,UDP-D-葡糖醛酸4-差向异构酶(GAE)基因家族,定位于高尔基体,在果胶合成中参与UDP-D-GlcA和UDP-D-GalA的相互转化。本研究中我们优化了VIGS系统用于研究本氏烟NbGAE6的基因功能。结果表明,该基因的沉默导致初生细胞壁果胶成分中GalA单糖含量降低。并且间羟基联苯法和HPLC技术检测结果都一致表明经过VIGS处理后的GalA含量降低40%-50%。此外,qRT-PCR结果显示,NbGAE6在VIGS植株中表现为显着下调。因此,我们的实验证实了在烟草中通过敲除或沉默NbGAE6可以显着降低果胶质的含量。另一方面,我们利用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功的编辑栽培烟草中果胶相关基因NtabGAUT4和木质素相关基因NtabCCoAMT,编辑率分别为6.2%和9.4%。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
陆玉建,李震,张弘扬,姜翠凤,郝舒蕾[4]（2018）在《AtHKT1启动子转化本生烟草的初步研究》一文中研究指出HKT蛋白家族主要参与控制K+的吸收和K+/Na+的选择性运输,对提高植物抗胁迫能力具有重要的作用。为了研究At HKT1组织表达水平与植物耐盐性的关系,利用生物信息学技术对HKT类蛋白的同源性、At HKT1基因表达情况及其启动子顺式作用元件进行分析和预测,在此基础上将At HKT1启动子导入到本生烟草细胞中,根据GUS染色结果,分析At HKT1基因在本生烟草中的组织表达水平。生物信息学分析结果显示,拟南芥和小麦处于不同的进化分支,亲缘关系较远,提示At HKT1的功能可能与小麦中相应蛋白存在一定的差异。At HKT1基因在拟南芥许多器官和组织中都有丰富的表达,其中在叶、根和花中的表达量较高,证实At HKT1基因可能具有重要的生理功能。At HKT1启动子可能是一个逆境响应启动子,包含多种能够响应环境胁迫的重要元件。因此,At HKT1基因表达很可能受到环境胁迫的调控。GUS染色结果显示,转pHKT1-gus本生烟草幼苗叶、维管系统、根以及花的染色较深,进一步证实At HKT1在这些区域表达量较高。以上结果表明,At HKT1基因表达调控有利于实现Na+的转运,进而调节植物耐盐性。除此之外,还可能有其他一些未知的功能,这进一步增加了At HKT1功能的复杂性。目前,有关HKT类蛋白K+和Na+转运方式的机制并不明确,通过分析At HKT1基因在本生烟草中的表达水平,为进一步了解At HKT1基因的作用机制提供参考。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年S1期）
徐琳,张泽,吕贤哲,李肇通,黄惜[5]（2018）在《烟草NtD14基因的遗传转化及其功能》一文中研究指出D14是独脚金内酯信号传导关键基因。为了研究烟草D14基因(Nt D14)的功能,笔者利用同源克隆的方法克隆Nt D14基因,然后构建p CAMBIA1302-Nt D14植物过表达载体,通过农杆菌介导的叶盘转化法将其转化烟草。结果表明,过表达Nt D14基因烟草的株高低于野生型,叶片变短变小,但叶片长宽比无显着差异,转化株分枝数减少。ELISA分析发现,所有过表达Nt D14转基因株系生长素含量低于野生型,说明Nt D14基因转化烟草株高和叶片变小可能与生长素含量减低有关。此外,转基因株系的丙二醛(MDA)含量和过氧化氢酶(CAT)活性均显着高于野生型。转基因株系的过氧化物酶(POD)活性显着低于野生型,CAT和POD的含量成反比,但超氧化物歧化酶(SOD)的含量无显着性差异,说明过表达Nt D14基因影响烟草体内的氧化还原反应。(本文来源于《热带生物学报》期刊2018年04期）
孙红梅,陆鑫,赵文睿,刘慧,苏超[6]（2018）在《桑树MaCDSP32基因转化烟草的抗旱性研究》一文中研究指出为研究桑树基因MaCDSP32的功能,检测了该基因的干旱应答表达模式,利用转基因技术获得超表达转基因烟草,进行胁迫处理试验。结果表明,CDSP32蛋白位于叶绿体中,受到干旱胁迫时桑树叶片中CDSP32的丰度明显降低,复水后恢复。将全长编码基因MaCDSP32通过农杆菌介导的叶盘法转化本氏烟草,获得过表达转基因烟草材料。测定干旱处理后相关生理生化指标和基因表达变化,试验发现环境水分亏缺时,超表达植株气孔开度较大,失水速率较快,脯氨酸和甜菜碱含量减少,抗氧化酶CAT和APX活力显着降低,MDA含量显着增多。由此推测,CDSP32基因过表达破坏了细胞膨压维持稳定的能力,使细胞过氧化损伤程度加深,植株耐旱性降低,MaCDSP32基因为干旱负调控因子。(本文来源于《中国蚕学会2018年学术年会论文集》期刊2018-10-11）
陈建权,程晨,张梦恬,张向前,张尧[7]（2018）在《天山雪莲SiSAD基因与拟南芥AtFAB2基因转化烟草的抗寒性分析》一文中研究指出通过转基因烟草(Nicotiana tabacum)验证天山雪莲(Saussurea involucrata)?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥(Arabidopsis thaliana)中同源基因At FAB2的抗寒性功能。利用农杆菌介导法将植物表达载体PSi SAD:At FAB2和PSi SAD:Si SAD导入烟草,然后将2种转基因和野生型烟草分别置于20°C、10°C、5°C、0°C及-2°C下处理2小时,检测其相对电导率、丙二醛(MDA)含量、叶绿素荧光参数(Fv/Fm)及脂肪酸含量。将-2°C处理2小时后的植株置于25°C培养1周进行生长恢复实验。结果表明,生长恢复实验中转Si SAD基因烟草的恢复效果显着优于转At FAB2基因和野生型烟草。在0°C和-2°C处理2小时后,转Si SAD、At FAB2基因型和野生型烟草的相对电导率和丙二醛含量呈现显着递增趋势;转Si SAD、At FAB2基因型烟草的Fv/Fm显着高于野生型烟草,其中,转Si SAD基因烟草的Fv/Fm显着高于转At FAB2基因烟草。转At FAB2基因型和野生型烟草的油酸(C18:1)含量随着温度的降低逐渐升高后降低并在0°C时达到最高值;而转Si SAD基因型烟草C18:1含量持续升高,并在-2°C时达到最高值,其含量分别是转At FAB2基因型和野生型烟草的1.58倍和1.7倍。以上结果表明,天山雪莲?9硬脂酰-ACP脱饱和酶基因Si SAD与拟南芥中同源基因At FAB2均可以显着增强非低温驯化烟草的抗寒性,但是Si SAD基因效果显着优于At FAB2。(本文来源于《植物学报》期刊2018年05期）
陈文荣,陈侨月,尤式备,余颖,李永强[8]（2018）在《越橘VcLon2蛋白酶在转化烟草衰老中的作用》一文中研究指出植物衰老往往伴随着过氧化物酶体功能紊乱,Lon2蛋白酶对过氧化物酶体的功能和结构的维持具有重要作用,但目前未见其与衰老相关性的报道。从越橘(Vaccinium ssp.)中克隆了Lon2全长c DNA序列,命名为Vc Lon2(KX611379),并通过烟草中NbLon2基因沉默(Virus Induced Gene Silence,VIGS)技术处理和转VcLon2基因对该基因功能进行研究。结果表明,NbLon2沉默本氏烟植株矮小,叶片小且黄化严重,而VcLon2超表达本氏烟植株鲜绿且粗壮;NbLon2沉默植株叶绿素含量仅为对照的一半,H2O2含量及膜脂过氧化程度也显着高于对照,VcLon2超表达植株则相反。同时,抗氧化酶CAT基因的转录水平在本氏烟各株系中无显着差异,但NbLon2沉默植株内CAT酶活性仅为对照的62.62%,表明Lon2蛋白酶对过氧化物酶体内蛋白质结构和功能的维持发挥着重要作用。此外,NbLon2沉默植株蛋白羰基化程度显着高于对照,植物衰老标记基因SAG12表达量为对照的15 642.2倍。以上研究均表明,Lon2蛋白酶缺失显着加剧光合色素降解、破坏细胞膜系统、羰基化蛋白大量积累等;VcLon2蛋白酶对植物健康维系及衰老延缓等具有重要作用。(本文来源于《园艺学报》期刊2018年07期）
任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男[9]（2018）在《葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化》一文中研究指出葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。(本文来源于《植物保护》期刊2018年03期）
王栋鑫[10]（2018）在《农杆菌介导烟草和毛白杨的遗传转化技术》一文中研究指出为建立高效的农杆菌介导木质部特异启动子JCes AP系列缺失片段的遗传转化系统,本试验以烟草和叁倍体毛白杨无菌苗为试验材料,通过农杆菌介导法将前期构建的融合杨树木质部特异启动子缺失片段的植物表达载体转入烟草和杨树。对获得的抗性植株进行PCR检测和报告基因活性分析,从而检测转化效果。主要结果如下:(1)在烟草遗传转化过程中,确立了适宜的菌液浓度为OD600≈0.4~0.6,一般侵染时间为8~10min,共培养2d为宜。最佳分化培养基为MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,头孢噻肟钠的抑菌浓度为50mg/L,卡那霉素生根筛选过程中的适宜浓度为20mg/L,潮霉素生根筛选浓度为5mg/L。(2)采用注射法进行烟草瞬时转化,对烟草叶片进行GUS染色(p BI121)和GFP绿色荧光检测(p CAMBIA1302),结果表明携带不同缺失片段与GUS报告基因的转基因植物在不同部位均可以观察到蓝色;携带不同缺失片段与GFP报告基因的转基因植物在不同部位均可以观察到绿色荧光。说明启动子系列缺失片段均具有启动子活性。利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将融合启动子缺失片段的p BI121和p CAMBIA1302植物表达载体转化烟草。经过PCR检测和报告基因活性检测分析,结果表明不同目的基因已经整合到了烟草基因组中,获得稳定表达的转基因植株共24株,转化率达27%。(3)在毛白杨遗传转化过程中确定了菌液最佳侵染时间为3min,最适合的菌液浓度为OD600≈0.4,建立了最佳分化培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA,在筛选和生根过程中头孢噻肟钠的抑菌浓度为50mg/L,卡那霉素的适宜浓度为20mg/L。(4)采用瞬时转化方法对杨树叶片进行GUS染色,结果表明携带不同缺失片段的与GUS报告基因的转基因植物在相应部位均可以观察到蓝色,说明启动子系列缺失片段均具有启动子活性。利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法,将融合启动子缺失片段的p BI121植物表达载体对杨树进行遗传转化。经过PCR分子检测和GUS染色,结果表明ZU2、ZU3、ZU4、L2缺失片段已转入杨树,L3、L4基因获得的植株为假阳性植株,未转化到杨树中。共获得稳定表达的转基因植株17株,转化率达53%。(本文来源于《河北农业大学》期刊2018-06-03）
烟草转化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
农杆菌介导的植物稳定遗传转化技术已经在植物基因工程领域得到广泛应用.本文介绍了一种由农杆菌介导的新型植物遗传转化技术—发芽种子真空侵染法.应用此方法将表达载体p BI121-HC-Pro转化到烟草植株中,并优化了农杆菌的浓度及真空侵染的条件.半定量RT-PCR(Reverse transcription-PCR)方法检测结果表明这种转化方法可以使HC-Pro在烟草中表达,具有广泛的应用前景.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
烟草转化论文参考文献
[1].杨柳慧.细叶百合LpWRKY20基因的克隆及其对烟草的遗传转化[D].东北林业大学.2019
[2].杨丽萍,王悦,徐亚男.烟草中稳定遗传转化的新技术[J].吉林师范大学学报(自然科学版).2019
[3].Rana,Imtiaz,Ahmad.甜高粱遗传转化体系优化及烟草果胶质多糖修饰研究[D].中国农业科学院.2019
[4].陆玉建,李震,张弘扬,姜翠凤,郝舒蕾.AtHKT1启动子转化本生烟草的初步研究[J].华北农学报.2018
[5].徐琳,张泽,吕贤哲,李肇通,黄惜.烟草NtD14基因的遗传转化及其功能[J].热带生物学报.2018
[6].孙红梅,陆鑫,赵文睿,刘慧,苏超.桑树MaCDSP32基因转化烟草的抗旱性研究[C].中国蚕学会2018年学术年会论文集.2018
[7].陈建权,程晨,张梦恬,张向前,张尧.天山雪莲SiSAD基因与拟南芥AtFAB2基因转化烟草的抗寒性分析[J].植物学报.2018
[8].陈文荣,陈侨月,尤式备,余颖,李永强.越橘VcLon2蛋白酶在转化烟草衰老中的作用[J].园艺学报.2018
[9].任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男.葡萄病毒BCP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化[J].植物保护.2018
[10].王栋鑫.农杆菌介导烟草和毛白杨的遗传转化技术[D].河北农业大学.2018