重组酶等温扩增试纸条快速检测阪崎克罗诺杆菌

论文摘要

将重组酶聚合酶等温扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）与免疫层析试纸条（lateral flow strip,LF）相结合,建立一种阪崎克罗诺杆菌快速检测方法（RPA-LF）。将引物分别用生物素和地高辛修饰后进行RPA,产生生物素和地高辛标记的双链DNA产物,扩增产物与胶体金标记的地高辛抗体及试纸条上固定的链霉亲和素发生特异性结合,最终在试纸条上呈现肉眼可见的结果。灵敏度分析结果显示,该方法对纯培养目标菌的检测限为1.7×102 CFU/mL,特异性分析结果显示RPA-LF方法与其他常见病原菌无交叉反应。利用人工污染的食物样品评估RPA-LF检测效果,结果显示不同样品增菌4 h或6 h后,检测限达到1.7×100 CFU/g。利用20种实际样品作为检测对象、利用国标方法作为对照,评估方法的检测效果,结果显示本研究所建立的方法与国家标准检测方法获得一致的检测结果。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.2 仪器与设备

1.3 方法

1.3.1 菌株模板的制备

1.3.2 引物设计

1.3.3 胶体金试纸条制备

1.3.3. 1 胶体金标记抗体的制备

1.3.3. 2 胶体金试纸条的制备

1.3.4 RPA优化

1.3.4. 1 反应温度的优化

1.3.4. 2 反应时间的优化

1.3.5 胶体金试纸条的优化

1.3.5. 1 NC膜的选择

1.3.5. 2 样品展开液的优化

1.3.6 胶体金试纸条检测

1.3.6. 1 灵敏度检测

1.3.6. 2 特异性检测

1.3.7 模拟（增菌）样品检测

1.3.8 实际样品检测

2 结果与分析

2.1 RPA条件优化

2.1.1 反应温度优化

2.1.2 反应时间优化

2.2 胶体金试纸条优化

2.2.1 样品展开液的优化

2.2.2 NC膜优化

2.3 灵敏度与特异性分析

2.3.1 灵敏度分析

2.3.2 特异性分析

2.4 模拟（增菌）样品检测结果

2.5 实际样品检测结果

3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈纯阳,张宸宁,史爱莹,杜欣军,王硕

关键词: 重组酶聚合酶等温扩增技术,免疫层析试纸条,阪崎克罗诺杆菌,快速检测

来源: 食品科学 2019年24期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 省部共建食品营养与安全国家重点实验室天津科技大学食品科学与工程学院

基金: “十三五”国家重点研发计划重点专项（2018YFC1603800）

分类号: TS252.51

页码: 306-312

总页数: 7

文件大小: 1548K

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重组酶等温扩增试纸条快速检测阪崎克罗诺杆菌

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