副猪嗜血杆菌及巴氏杆菌双重荧光定量PCR检测方法的建立

副猪嗜血杆菌及巴氏杆菌双重荧光定量PCR检测方法的建立

论文摘要

为建立副猪嗜血杆菌(Hps)、多杀性巴氏杆菌(Pm)的双重荧光定量PCR检测方法,本研究基于Hps的Omp P2基因,Pm的PlpE基因设计两对特异性引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种同时检测Hps及Pm的双重荧光定量PCR方法。该方法能够特异性地检测Hps和Pm,其对重组质粒标准品的最低检测浓度分别为5.60×10~2拷贝/μL、7.58×10~2拷贝/μL。双重与单一荧光定量PCR最低检测限相同,且均是常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于2.5%。临床应用结果显示:该方法对阳性样品的检出率为53.57%,明显优于常规PCR和细菌分离鉴定。该方法能够用于两种疾病的同时检测和快速排查疾病。为两种疾病的防治提供有效检测工具。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 主要实验材料
  •   1.2 引物及Taq Man探针的设计与合成
  •   1.3 重组质粒标准品的构建与鉴定
  •   1.4 单一荧光定量PCR方法的优化及标准曲线的建立
  •   1.5 双重荧光定量PCR的优化及建立
  •   1.6 双重荧光定量PCR标准曲线的建立
  •   1.7 特异性试验
  •   1.8 敏感性试验
  •   1.9 重复性试验
  •   1.1 0 临床样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒标准品的构建与鉴定
  •   2.2 两株菌单一荧光定量PCR方法及标准曲线的建立
  •   2.3 双重荧光定量PCR方法的建立
  •   2.4 双重荧光定量PCR标准曲线的建立
  •   2.5 特异性试验结果
  •   2.6 敏感性试验
  •   2.7 重复性试验
  •   2.8 临床样品检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 姜睿姣,周丽军,邬旭龙,张鹏飞,罗梓丹,肖璐,王印,姚学萍,杨泽晓,罗燕

    关键词: 副猪嗜血杆菌,巴氏杆菌,双重荧光定量

    来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 四川农业大学动物医学院,动物疫病与人类健康四川省重点实验室

    基金: 国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项(CARS-SVDIP)

    分类号: S852.61

    页码: 489-494

    总页数: 6

    文件大小: 589K

    下载量: 166

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