导读:本文包含了定点突变论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:突变,环糊精,层析,杆菌,水稻,杀虫,环氧化物。
定点突变论文文献综述
韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋[1]（2019）在《定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定》一文中研究指出为提高胰高血糖素样肽-2(GLP-2)生产效率以适应畜牧生产应用的需求,本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2。用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点,合成基因序列,通过KpnⅠ和XhoⅠ双酶切位点连接到pET-40b(+)构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白。优化后最适表达条件为:菌液D_(600 nm)值为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5 h;最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白,本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年11期）
刘华清,孙庆山,杨绍华,周淑芬,王锋[2]（2019）在《利用基因组编辑技术定点突变IPA1基因创制水稻新株型材料》一文中研究指出【目的】水稻株型改良是提高水稻产量的一个有效途径。水稻理想株型基因IPA1是一个调控水稻株型的关键基因,利用基因组编辑技术(TALENs技术)定点突变水稻IPA1基因,了解IPA1基因不同序列变异的株型效应,为进一步利用IPA1基因创制实用型水稻新株型材料奠定基础。【方法】利用TALENs技术定点突变优良恢复系明恢86的IPA1基因,通过测序鉴定突变体,种植于标准小区,调查分析其株型相关性状。【结果】利用TALENs技术获得了8种不同序列突变的水稻ipa1突变体,并通过转基因植株自交结合PCR分析筛选到去除了TALENs表达框,获得4种不含外源转基因成分的纯合突变体材料(IPA1基因表达区分别缺失2、4、16、23 bp)。表型分析发现,IPA1基因突变能够显着改变水稻的株高、有效穗数、穗长及穗粒数等性状。与野生型比较,缺失移码突变体株高降低7.9%～11.4%,有效穗数增加46.9%～68.4%,穗长短24.2%～29.3%,穗粒数减少31%～34%,结实率和千粒重差异不明显。【结论】利用TALENs技术定点突变水稻IPA1基因能够明显改变水稻株高、有效穗数、穗长及穗粒数等主要性状,产生水稻新株型。(本文来源于《福建农业学报》期刊2019年08期）
汤宏赤,莫莉,闭海,林丽华,郭媛[3]（2019）在《环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究》一文中研究指出本研究对具有大分子水解能力的环糊精水解酶cds1-3的蛋白结构进行分析,选取底物通道相关氨基酸进行定点突变。通过比较突变酶和野生酶的功能差异,定位决定cds1-3特殊功能的氨基酸。采用sybyl 1.2进行蛋白质底物结合分析,选取和多聚体形成、底物结合以及底物通道相关的氨基酸Glu66、Pro48、Phe289为突变位点,反向PCR构建pSE380/E66G、pSE380/P48H、pSE380/F289A表达质粒并进行表达,获得酶活突变体并与原始酶进行底物特异性比较分析。其结果显示,突变酶E66G降解大分子底物木薯淀粉和支链淀粉的相对酶活力分别提高26.96%和23.15%,而对小分子底物普鲁兰糖的水解能力下降13.14%。因此,cds1-3是一个能水解大分子底物的特殊环糊精水解酶,氨基酸Glu66是cds1-3水解大分子支链淀粉的关键氨基酸之一。(本文来源于《广西科学》期刊2019年04期）
张楷,刘蔚,刘小凤,陈瑶生,刘小红[4]（2019）在《利用CRISPR/Cas9系统构建人HPRT1基因定点突变细胞株》一文中研究指出Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase1 (HPRT1)基因突变会导致次黄嘌呤和鸟嘌呤代谢异常,严重的代谢障碍被称为Lesch-Nyhan综合征,表现为智力低下,行为上出现强迫性自我毁伤,并伴随痛风或肾结石等症状。HPRT1基因具有多种突变模式,近年来对其突变谱的研究表明该基因具有一些"突变热点"。本研究选取了导致翻译提前终止的热点突变c.508C>T突变和c.151C>T突变,在HEK293T和HeLa细胞中,以单链寡核苷酸(single-stranded oligo-deoxyribonucleotides, ssODN)作为同源重组模板,利用CRISPR/Cas9技术构建了这两种突变的单克隆细胞株,发生定点突变的效率分别为16.3%和10%。进一步通过Westernblot检测点突变的单克隆细胞的HPRT1蛋白表达水平,通过6-TG毒性实验检测点突变的单克隆细胞的次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性,结果表明纯合突变的单细胞克隆不能正常表达HPRT1蛋白,其次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性丧失;杂合突变的单细胞克隆的HPRT1蛋白表达量降低,仍具有部分次黄嘌呤/鸟嘌呤磷酸核糖转移酶活性。HPRT1基因定点突变细胞模型的建立可为今后建立其他HPRT1基因突变的细胞系或动物模型提供借鉴,为研究Lesch-Nyhan致病机制提供基础。(本文来源于《遗传》期刊2019年10期）
刘明,孙海燕,李海涛,高继国[5]（2019）在《苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11蛋白定点突变对甜菜夜蛾和棉铃虫杀虫活性的影响》一文中研究指出营养期杀虫蛋白(vegetative insecticidal proteins, Vips)与杀虫晶体蛋白相比,在氨基酸序列进化上没有同源性,杀虫作用位点上也无竞争关系。由于Vips蛋白结构尚未解析,其杀虫作用机制的研究相对滞后。为明确影响苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt) Vip3Aa11蛋白杀虫活性的关键氨基酸,本研究对Vip3Aa11中3个氨基酸位点进行定点突变,构建3个突变体蛋白G200S、F442S、S726T,并对其进行甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)及棉铃虫(Heliothis armigera)的杀虫活性测定。结果显示,突变体蛋白S726T对甜菜夜蛾的杀虫活性是野生型Vip3Aa11的4倍,对棉铃虫的杀虫活性没有显着变化;其他突变体蛋白对甜菜夜蛾及棉铃虫的杀虫活性均无显着变化。Vip3Aa11与各突变体蛋白对胰蛋白酶的敏感性一致。二级结构预测表明突变体蛋白S726T的构象发生了α-螺旋后移,说明S726T突变体引起的杀虫活性提高可能与蛋白结构的空间细微变化有关。本研究比较了Vip3Aa11与各突变体蛋白之间的杀虫活性差异,并初步分析了差异产生的原因,为研究Vip3Aa类蛋白的结构和杀虫机理提供了参考依据。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年07期）
阚婷婷,宗迅成,苏永君,王婷婷,李闯[6]（2019）在《定点突变改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化特性》一文中研究指出环氧化物水解酶能够对外消旋环氧化物进行动力学拆分保留单构型的环氧化物。测定了菜豆环氧化物水解酶(Pv EH1)针对苯基缩水甘油醚及其甲基衍生物的催化特性,并基于分子对接及多序列比对分析确定7个突变位点,通过单点和组合突变对Pv EH1进行改造,以期改善Pv EH1对邻甲基苯基缩水甘油醚(1a)的催化特性。底物谱分析表明Pv EH1对1a的催化活性(157.2U/g湿细胞)和对映选择性(E=5.6)最高。单点突变结果显示E.coli/pveh1~(L105I)和E.coli/pveh1~(V106I)对1a的催化活性和对映选择性均有明显提高;L105I和V106I位组合突变菌株E.coli/pveh1~(L105I/V106I)的催化活性(493.8U/g湿细胞)是E.coli/pveh1的3.1倍,对映选择性(E=8.3)也提高至E.coli/pveh1的1.5倍。纯化后Pv EH1~(L105I/V106I)的催化活性为17.6U/mg,是Pv EH1的1.5倍,对1a的催化效率提高至Pv EH1的2.1倍。SDS-PAGE分析表明提高了蛋白质的可溶性表达量。利用E.coli/pveh1~(L105I/V106I)全细胞催化100mmol/L 1a水解动力学拆分获得手性纯(R)-1a(ee>96%)的产率和时空产率分别为31.2%和5.12g/(L·h),因此,在手性纯(R)-1a的制备中,E.coli/pveh1~(L105I/V106I)是一种颇具潜力的生物催化剂。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年06期）
吴清清[7]（2019）在《利用CRISPR/Cas9系统编辑水稻淀粉合成相关的SSIIIα与PPDK的定点突变研究》一文中研究指出水稻是世界上主要的粮食作物,也是基因组研究的模式植物之一。成熟水稻种子的胚乳中,淀粉是主要的储藏物质。人在食用稻米之后,淀粉进入人体,血糖会急剧上升,会对糖尿病患者造成严重的身体负担。因此,关于改变水稻种子中淀粉含量的研究日渐成为科研人员的重要目标。本实验利用CRISPR/Cas9系统对水稻淀粉合成相关的基因进行定点编辑,得到以下结论:1.利用CRISPR/Cas9技术,我们成功地对水稻2个淀粉合成相关的基因SSⅢa(LOC_Os08g09230)以及PPDK(LOC_Os05g33570)进行基因的定点编辑。2.研究得到以下结果:SSⅢa得到3种类型的纯合突变体:(1)两个碱基AG的缺失;(2)一个碱基A的插入;(3)在靶点附近缺失347bp同时插入9bp(TGAGCTAAG)。PPDK得到3种类型的纯合突变体:(1)一个碱基T的插入;(2)叁个碱基(GGG)缺失;(3)一个碱基A的缺失。3.对得到的纯合突变体进行转录水平的表达量分析,我们发现突变体编辑基因的表达量都低于野生型粳稻品种(嘉花1号),而与淀粉合成相关的其它基因的表达量则出现不同程度的变化。ppdk突变体的有关淀粉合成的基因表达量存在5-10倍的下调,而ssⅢa突变体的SSⅠ及SSⅡ基因存在上调现象,而其他相关基因表达量降低或没有明显变化。4.对突变体成熟种子横切面进行冷场发射电子扫描显微镜观察,发现ppdk突变体以及ssⅢa-1突变体的淀粉颗粒形态和大小发生了明显的变化,并且千粒重也有了明显的降低。而ssⅢa-2突变体则没有观察到明显变化。5.对突变体进行I-KI染色,发现ppdk突变体较野生型颜色变浅,而ssⅢa突变体的颜色则变化不明显。6.对突变体种子中抗性淀粉含量的检测发现ppdk突变体的变化不明显,而ssⅢa突变体的抗性淀粉含量出现了大幅度提高。本研究利用CRISPR/Cas9技术成功对水稻淀粉合成相关基因进行了定点编辑,为运用CRISPR/Cas9技术对功能型水稻的研究提供了实验基础。(本文来源于《上海师范大学》期刊2019-05-01）
梅雪娇[8]（2019）在《基因定点突变和适配体小肽对拟穴青蟹主要过敏原的影响》一文中研究指出蟹类等甲壳类水产品作为联合国粮农组织公布的八大类过敏食物之一,由其引起的食物过敏反应通常伴随终身,对过敏患者的生活造成严重影响。本文针对拟穴青蟹中(Scylla paramamosain)主要过敏原原肌球蛋白(tropomyosin,TM)和精氨酸激酶(arginine kinase,AK)的抗原表位进行深入研究,通过基因定点突变和适配体小肽技术降低TM和AK的致敏性,得到的低致敏性蛋白可望用于水产品过敏患者的免疫治疗。本研究对TM和AK构象表位中关键氨基酸和半胱氨酸进行基因定点突变,构建重组表达载体pET-28a-mTM/mAK,在E.coli BL21(DE3)菌株中诱导表达得到TM的2种可溶性多突变体蛋白,分别命名为mTM1(TM/_(R90A-E164A-Y267A))和mTM2(TM/_(N132A-M171A-Y267A));AK的3种包涵体突变蛋白,分别命名为mAK1(AK/_(C201A))、mAK2(AK/_(K33A-T174A))和mAK3(AK/_(T174A-C201A))。采用兔抗青蟹TM/AK的IgG多克隆抗体进行Western blot鉴定,确定重组表达产物为目标蛋白。圆二色谱和表面疏水性结果显示,与重组TM(rTM)相比,mTMs均具有典型的α-螺旋结构,其二级结构没有产生明显变化,叁级结构发生明显改变。与rTM相比,mTM1的IgE免疫结合活性显着降低18.1%,而mTM2的免疫结合活性没有明显改变。与重组AK(rAK)相比,mAKs的二级结构和叁级结构都明显改变,尤其是mAK3的结构变化最显着,α-螺旋含量显着降低22.7%;此外,mAK1、mAK2和mAK3的IgE结合活性分别降低52.9%、41.1%和70.6%。建立树突状细胞(dendritic cells,DCs)吞噬模型和BALB/c小鼠敏化模型对突变型蛋白进行体内外实验分析,结果显示,DCs对rTM和mTMs的吞噬能力没有明显变化;在AK组实验中,DCs对mAK1和mAK3的吞噬能力显着高于rAK和mAK2。在小鼠实验中,相较于PBS组,实验组小鼠血清中特异性IgG抗体水平极显着上升,脾脏淋巴细胞中的IL-4细胞因子水平也显着上升。分析TM和AK的蛋白酶酶切位点和线性表位,采用分子对接技术筛选能够特异性结合TM和AK线性表位的适配体小肽。经兔抗青蟹IgG抗体检测,TM的12个适配体小肽对rTM和mTMs均有抑制作用,其中,适配体小肽5对rTM、mTM1和mTM2的抑制率分别达到29.7%、30.2%和31.1%。AK的IgG和IgE抑制性ELISA结果显示,5个适配体小肽对rAK和mAKs的免疫结合活性均有抑制作用,其中,适配体小肽3对rAK、mAK1、mAK2和mAK3的IgG免疫结合活性的抑制率分别是30.6%、25.8%、27.6%和23.5%,对rAK和mAKs的IgE免疫结合活性的抑制率分别是28.3%、25.2%、26.5%和21.7%。综上,通过TM和AK的分子改造,得到低致敏性的突变型蛋白和适配体小肽,有望降低甲壳类水产品主要过敏原的致敏性,并应用于水产品过敏疾病的免疫治疗。(本文来源于《集美大学》期刊2019-04-17）
花敬涵,杨静文,胡雪芹,张洪斌[9]（2019）在《蜡状芽孢杆菌环糊精糖基转移酶的基因克隆表达·酶学特性及定点突变研究》一文中研究指出研究克隆、表达了蜡状芽孢杆菌来源的环糊精糖基转移酶(cyclodextrin glycosyltransferase,CGTase,EC 2.4.1.19)基因,研究了其酶学性质,并在此基础上构建突变菌株以探究关键氨基酸位点与产物特异性的关系。结果表明,重组CGTase的最大比活力达5 292 U/mL,分子量约为68 kDa,最适温度和pH分别为55℃和8.5;以淀粉为底物催化合成的主要产物是β-环糊精(β-CD);通过序列对比选取了第47位氨基酸(Ala)进行定点突变,构建了A47R、A47M、A47S、A47Y。研究发现活性区域中第47位氨基酸对于产物特异性和产量具有一定的影响,其中亲水性氨基酸更利于CDs(尤其β-CD)的合成,这为酶法合成β-CD的工业应用提供了方法。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2019年05期）
刘明,孙海燕,郑树生[10]（2019）在《苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响》一文中研究指出为了寻找苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11中对杀虫活性有重要影响的氨基酸,为杀虫机理研究和改造杀虫蛋白提供理论依据,通过序列比对,利用PCR方法对Vip3Aa11中7个氨基酸位点进行定点突变,对各突变蛋白杀棉铃虫的生物活性进行测定。结果表明,获得的Vip3Aa11突变体I358V、I362M、K553I、I663T对棉铃虫的杀虫活性明显降低,而突变体I706N对棉铃虫的杀虫活性有所提高,各突变体对胰蛋白酶敏感性基本一致。说明第358位、362位、663位异亮氨酸及553位赖氨酸对Vip3Aa11杀棉铃虫活性有重要影响。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学学报》期刊2019年01期）
定点突变论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
【目的】水稻株型改良是提高水稻产量的一个有效途径。水稻理想株型基因IPA1是一个调控水稻株型的关键基因,利用基因组编辑技术(TALENs技术)定点突变水稻IPA1基因,了解IPA1基因不同序列变异的株型效应,为进一步利用IPA1基因创制实用型水稻新株型材料奠定基础。【方法】利用TALENs技术定点突变优良恢复系明恢86的IPA1基因,通过测序鉴定突变体,种植于标准小区,调查分析其株型相关性状。【结果】利用TALENs技术获得了8种不同序列突变的水稻ipa1突变体,并通过转基因植株自交结合PCR分析筛选到去除了TALENs表达框,获得4种不含外源转基因成分的纯合突变体材料(IPA1基因表达区分别缺失2、4、16、23 bp)。表型分析发现,IPA1基因突变能够显着改变水稻的株高、有效穗数、穗长及穗粒数等性状。与野生型比较,缺失移码突变体株高降低7.9%～11.4%,有效穗数增加46.9%～68.4%,穗长短24.2%～29.3%,穗粒数减少31%～34%,结实率和千粒重差异不明显。【结论】利用TALENs技术定点突变水稻IPA1基因能够明显改变水稻株高、有效穗数、穗长及穗粒数等主要性状,产生水稻新株型。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
定点突变论文参考文献
[1].韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋.定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定[J].中国畜牧兽医.2019
[2].刘华清,孙庆山,杨绍华,周淑芬,王锋.利用基因组编辑技术定点突变IPA1基因创制水稻新株型材料[J].福建农业学报.2019
[3].汤宏赤,莫莉,闭海,林丽华,郭媛.环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究[J].广西科学.2019
[4].张楷,刘蔚,刘小凤,陈瑶生,刘小红.利用CRISPR/Cas9系统构建人HPRT1基因定点突变细胞株[J].遗传.2019
[5].刘明,孙海燕,李海涛,高继国.苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11蛋白定点突变对甜菜夜蛾和棉铃虫杀虫活性的影响[J].农业生物技术学报.2019
[6].阚婷婷,宗迅成,苏永君,王婷婷,李闯.定点突变改善PvEH1对邻甲基苯基缩水甘油醚的催化特性[J].中国生物工程杂志.2019
[7].吴清清.利用CRISPR/Cas9系统编辑水稻淀粉合成相关的SSIIIα与PPDK的定点突变研究[D].上海师范大学.2019
[8].梅雪娇.基因定点突变和适配体小肽对拟穴青蟹主要过敏原的影响[D].集美大学.2019
[9].花敬涵,杨静文,胡雪芹,张洪斌.蜡状芽孢杆菌环糊精糖基转移酶的基因克隆表达·酶学特性及定点突变研究[J].安徽农业科学.2019
[10].刘明,孙海燕,郑树生.苏云金芽胞杆菌Vip3Aa11定点突变对棉铃虫杀虫活性的影响[J].黑龙江八一农垦大学学报.2019
论文知识图
