细胞分裂素在拟南芥硒胁迫响应中的作用研究

细胞分裂素在拟南芥硒胁迫响应中的作用研究

论文摘要

细胞分裂素(cytokinin,CK)在植物生长发育和环境胁迫响应中发挥重要作用。本论文利用细胞分裂素相关突变体ipt1 3 5 7、ahk2和ahk3研究CK在拟南芥硒胁迫响应中的作用。主要研究结果如下:1.对CK缺乏突变体ipt1 3 5 7和CK受体单一功能缺失突变体ahk2和ahk3进行鉴定,证明实验所用突变体均为纯合突变体。利用这些突变体研究CK在拟南芥硒盐胁迫响应中的作用,发现亚硒酸盐胁迫下,突变体ipt1 3 5 7的根长和鲜重显著大于野生型,对亚硒酸盐耐受;突变体ahk2和ahk3的根长和鲜重明显小于野生型,对亚硒酸盐敏感。2.异戊烯基转移酶(isopentenyltransferase,IPT)是CK合成的关键酶,所以IPT1,IPT3,IPT5和IPT7四基因功能缺失突变体ipt1 3 5 7体内的CK含量明显低于野生型;亚硒酸盐胁迫下,ahk2和ahk3体内的CK含量高于野生型;另外,外源细胞分裂素(6-BA)处理后,这些突变体的生长明显被抑制,且ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫的耐受性消失,说明CK负调控拟南芥亚硒酸盐耐受。进一步利用qRT-PCR检测CK合成基因IPT1、CK受体基因AHK2、AHK3、AHK4以及CK信号途径反应调节因子ARR3、ARR5和ARR7基因的转录水平,结果表明,硒处理降低了内源CK含量,可能与ARR3、ARR5和ARR7的负反馈调控有关。3.利用ICP-MS对植株体内的硒(Selenium,Se)含量进行测定,发现亚硒酸盐胁迫下,与野生型相比,ipt1 3 5 7体内的Se含量积累较少,ahk2和ahk3体内Se含量积累较多,推测ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫耐受可能与其体内较低的Se含量有关。进一步检测了与亚硒酸盐吸收相关的磷转运体PHT1;1、PHT1;8、PHT1;9和PHT2;1的基因表达,发现亚硒酸盐胁迫下,ipt1 3 5 7突变体中PHT1;1和PHT1;8基因的转录水平显著低于野生型,PHT2;1的转录水平较高,说明ipt1 3 5 7在硒胁迫下降低了Se的吸收,促进了Se的转运。ahk2和ahk3在硒胁迫下PHT1;1、PHT1;8和PHT1;9的转录水平均高于野生型,PHT2;1的表达水平与野生型无显著差异,所以ahk2和ahk3积累较高水平的硒,对亚硒酸盐胁迫敏感。这些结果表明内源CK可以增加亚硒酸盐的吸收和积累。4.硒代半胱氨酸甲基转移酶(selenocysteine methyltransferase,SMT)和硒代半胱氨酸裂解酶(selenocysteine lyase,SL)在硒的代谢解毒过程中发挥重要作用。RT-PCR和qRT-PCR分析表明,SL的转录水平在各突变体植株中并未呈现显著变化;亚硒酸盐胁迫下,ipt1 3 5 7中SMT的转录水平显著升高,明显高于ahk2和ahk3突变体,说明CK可以降低突变体对亚硒酸盐的代谢解毒能力。5.在培养基中加入谷胱甘肽(GSH)合成抑制剂BSO后,ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫的耐受性消失,而ahk2和ahk3对亚硒酸盐的敏感性并未受到影响;另外硒盐胁迫下ipt1 3 5 7体内具有更高的GSH含量和更高的GSH1基因表达,说明GSH是ipt1 3 5 7硒耐受所必需要的。进一步检测了这些突变体的抗氧化酶活性,发现硒胁迫下ipt1 3 5 7中的抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、过氧化氢酶(CAT)活性明显高于野生型,而这些酶活性在ahk2和ahk3突变体中都较低,说明CK可以降低突变体的抗氧化能力。综上所述,细胞分裂素通过增加硒吸收和积累、降低硒代谢解毒和抗氧化能力负调控拟南芥硒胁迫响应。

论文目录

  • 致谢
  • 摘要
  • abstract
  • 第1章 绪论
  •   1.1 细胞分裂素
  •     1.1.1 细胞分裂素及其合成途径
  •     1.1.2 细胞分裂素信号转导途径
  •   1.2 硒
  •     1.2.1 硒及其分布现状
  •     1.2.2 硒污染的危害
  •     1.2.3 硒污染的治理
  •   1.3 植物硒胁迫耐受的研究进展
  •     1.3.1 植物逆境响应特性
  •     1.3.2 植物体硒的吸收及其同化机制
  •     1.3.3 植物对硒盐胁迫的响应机制
  •   1.4 植物抗氧化研究
  •     1.4.1 活性氧的产生与危害
  •     1.4.2 抗氧化作用
  •   1.5 本研究的目的及意义
  • 第2章 材料与方法
  •   2.1 实验材料
  •   2.2 实验试剂
  •     2.2.1 常用分子生物学试剂盒
  •     2.2.2 常用生化试剂
  •     2.2.3 常用溶液与试剂的配制方法
  •   2.3 所用实验仪器与设备
  •   2.4 实验方法
  •     2.4.0 灭菌方法
  •     2.4.1 植物的培养
  •     2.4.2 根长和鲜重的统计与分析
  •     2.4.3 Se含量的测定
  •     2.4.4 CK含量的测定
  •     2.4.5 GSH含量的测定
  •     2.4.6 GSH-PX酶活的测定
  •     2.4.7 APX酶活的测定
  •     2.4.8 POD酶活的测定
  •     2.4.9 CAT酶活的测定
  •     2.4.10 总RNA的提取(Trizol法)
  •     2.4.11 DNA的提取
  •     2.4.12 全基因组c DNA的合成
  •     2.4.13 qRT-PCR
  •     2.4.14 RT-PCR
  •     2.4.15 琼脂糖凝胶电泳
  •     2.4.16 PCR引物
  •     2.4.17 常用软件
  •     2.4.18 实验数据处理与分析
  • 第3章 实验结果与分析
  •   3.1 突变体鉴定
  •     3.1.1 ipt1357的鉴定
  •     3.1.2 ahk2和ahk3的鉴定
  •   3.2 突变体对硒胁迫响应
  •     3.2.1 ipt1357对亚硒酸盐胁迫耐受
  •     3.2.2 ahk2和ahk3对亚硒酸盐胁迫敏感
  •   3.3 CK负调控硒胁迫响应
  •     3.3.1 CK含量测定
  •     3.3.2 外源CK对ipt1357硒胁迫的影响
  •     3.3.3 外源CK对ahk2和ahk3硒胁迫的影响
  •     3.3.4 IPT1表达分析
  •     3.3.5 CK受体基因AHK2、AHK3、AHK4表达分析
  •     3.3.6 CK信号途径反应调节因子基因表达分析
  •   3.4 CK增加硒吸收和积累
  •     3.4.1 Se含量测定
  •     3.4.2 磷转运体基因表达分析
  •   3.5 CK降低硒代谢解毒能力
  •   3.6 突变体ipt1357对硒胁迫耐受与GSH有关
  •     3.6.1 BSO对突变体硒胁迫的影响
  •     3.6.2 GSH含量测定
  •     3.6.3 突变体植株中GSH1基因表达分析
  •   3.7 CK降低抗氧化能力
  • 第4章 讨论与展望
  • 参考文献
  • 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况
  •   发表的学术论文及专利
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 曹海梅

    导师: 江力

    关键词: 细胞分裂素,拟南芥

    来源: 合肥工业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学,生物学

    单位: 合肥工业大学

    分类号: Q943.2

    总页数: 74

    文件大小: 9182K

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