论文摘要
细胞分裂素(cytokinin,CK)在植物生长发育和环境胁迫响应中发挥重要作用。本论文利用细胞分裂素相关突变体ipt1 3 5 7、ahk2和ahk3研究CK在拟南芥硒胁迫响应中的作用。主要研究结果如下:1.对CK缺乏突变体ipt1 3 5 7和CK受体单一功能缺失突变体ahk2和ahk3进行鉴定,证明实验所用突变体均为纯合突变体。利用这些突变体研究CK在拟南芥硒盐胁迫响应中的作用,发现亚硒酸盐胁迫下,突变体ipt1 3 5 7的根长和鲜重显著大于野生型,对亚硒酸盐耐受;突变体ahk2和ahk3的根长和鲜重明显小于野生型,对亚硒酸盐敏感。2.异戊烯基转移酶(isopentenyltransferase,IPT)是CK合成的关键酶,所以IPT1,IPT3,IPT5和IPT7四基因功能缺失突变体ipt1 3 5 7体内的CK含量明显低于野生型;亚硒酸盐胁迫下,ahk2和ahk3体内的CK含量高于野生型;另外,外源细胞分裂素(6-BA)处理后,这些突变体的生长明显被抑制,且ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫的耐受性消失,说明CK负调控拟南芥亚硒酸盐耐受。进一步利用qRT-PCR检测CK合成基因IPT1、CK受体基因AHK2、AHK3、AHK4以及CK信号途径反应调节因子ARR3、ARR5和ARR7基因的转录水平,结果表明,硒处理降低了内源CK含量,可能与ARR3、ARR5和ARR7的负反馈调控有关。3.利用ICP-MS对植株体内的硒(Selenium,Se)含量进行测定,发现亚硒酸盐胁迫下,与野生型相比,ipt1 3 5 7体内的Se含量积累较少,ahk2和ahk3体内Se含量积累较多,推测ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫耐受可能与其体内较低的Se含量有关。进一步检测了与亚硒酸盐吸收相关的磷转运体PHT1;1、PHT1;8、PHT1;9和PHT2;1的基因表达,发现亚硒酸盐胁迫下,ipt1 3 5 7突变体中PHT1;1和PHT1;8基因的转录水平显著低于野生型,PHT2;1的转录水平较高,说明ipt1 3 5 7在硒胁迫下降低了Se的吸收,促进了Se的转运。ahk2和ahk3在硒胁迫下PHT1;1、PHT1;8和PHT1;9的转录水平均高于野生型,PHT2;1的表达水平与野生型无显著差异,所以ahk2和ahk3积累较高水平的硒,对亚硒酸盐胁迫敏感。这些结果表明内源CK可以增加亚硒酸盐的吸收和积累。4.硒代半胱氨酸甲基转移酶(selenocysteine methyltransferase,SMT)和硒代半胱氨酸裂解酶(selenocysteine lyase,SL)在硒的代谢解毒过程中发挥重要作用。RT-PCR和qRT-PCR分析表明,SL的转录水平在各突变体植株中并未呈现显著变化;亚硒酸盐胁迫下,ipt1 3 5 7中SMT的转录水平显著升高,明显高于ahk2和ahk3突变体,说明CK可以降低突变体对亚硒酸盐的代谢解毒能力。5.在培养基中加入谷胱甘肽(GSH)合成抑制剂BSO后,ipt1 3 5 7对亚硒酸盐胁迫的耐受性消失,而ahk2和ahk3对亚硒酸盐的敏感性并未受到影响;另外硒盐胁迫下ipt1 3 5 7体内具有更高的GSH含量和更高的GSH1基因表达,说明GSH是ipt1 3 5 7硒耐受所必需要的。进一步检测了这些突变体的抗氧化酶活性,发现硒胁迫下ipt1 3 5 7中的抗坏血酸过氧化物酶(APX)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)、过氧化氢酶(CAT)活性明显高于野生型,而这些酶活性在ahk2和ahk3突变体中都较低,说明CK可以降低突变体的抗氧化能力。综上所述,细胞分裂素通过增加硒吸收和积累、降低硒代谢解毒和抗氧化能力负调控拟南芥硒胁迫响应。
论文目录
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 曹海梅
导师: 江力
关键词: 细胞分裂素,拟南芥
来源: 合肥工业大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学,生物学
单位: 合肥工业大学
分类号: Q943.2
总页数: 74
文件大小: 9182K
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