导读:本文包含了嵌合抗体论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗体,病毒,基因工程,转基因,细小,基因,免疫。
嵌合抗体论文文献综述
梁振鑫,刘芳,张玮,刘庆友,李力[1]（2019）在《抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证》一文中研究指出目的:构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体并制备和验证抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型。方法:利用PCR法扩增出抗人p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L,然后分别将嵌合抗体重链基因H和嵌合抗体轻链基因L连接到乳腺特异性表达质粒pBC1,从而构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L。分别将抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26乳腺特异表达载体pBC1-H和pBC1-L线性化,然后使用原核显微共注射法获得8只转基因FVB小鼠,通过鼠尾直接PCR鉴定其转基因阳性。通过RT-PCR、荧光定量PCR鉴定转基因小鼠乳腺组织中抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达。使用小鼠乳汁采集器收集其乳汁并通过Western blot和夹心ELISA等实验鉴定抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26是否获得表达。结果:经测序验证,抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的嵌合重链基因H和嵌合轻链基因L分别与乳腺特异表达质粒pBC1正确正向连接。鼠尾直接PCR结果显示所获8只转基因FVB小鼠均为转基因双阳性小鼠,且抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的重链基因H和轻链基因L在它们的后代中稳定遗传,它们的后代中转基因小鼠双阳性率约为30%; RT-PCR和荧光定量PCR的结果显示,转基因双阳性小鼠及其双阳性后代的乳腺组织中存在抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的mRNA表达; Western blot和ELISA等实验结果显示,转基因双阳性小鼠乳汁中存在抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26的蛋白质表达,而且抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26与羊抗人κ链抗体和羊抗人Ig G Fc-HRP抗体均能特异性结合。结论:成功构建抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因动物乳腺特异性表达载体pBC1-H和pBC1-L和制备了抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器模型,为今后抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因牛乳腺生物反应器的研究奠定了理论和技术基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年08期）
薛雨佳,宋彩玲,赵爽爽,李彤彤,王文静[2]（2019）在《抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定》一文中研究指出为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb (3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55 ku、轻链为25 ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb 3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年06期）
阮菲儿[3]（2019）在《抗H7N9亚型流感病毒神经氨酸酶嵌合抗体的制备及初步鉴定》一文中研究指出目的:制备靶向H7N9神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)的嵌合抗体,对其功能特性进行初步鉴定,为H7N9的预防控制提供理论依据。方法:根据鼠源抗N9 MAb原始信息,挑选8株特异性靶向流感病毒A/Anhui/1/2013(H7N9)NA的杂交瘤细胞株,使用基因工程技术对其进行人源化改造并获得嵌合抗体,通过ELISA,BLI,FACS,HI,NI,微量中和实验,ADCC,空斑实验及竞争ELISA一系列实验技术对获得嵌合抗体活性及功能进行鉴定。结果:获得了叁株特异性抗H7N9亚型流感病毒N9嵌合抗体1E2,3E3及5D1,对AH-N9蛋白的EC50值分别为0.048μg/ml,0.028μg/ml和0.675μg/ml;其中1E2和3E3对AH-N9蛋白具有极强的亲和力,KD值达p M;1E2和3E3具有相似的抗原结合部位并与5D1的抗原识别表位不同;叁株嵌合抗体都能不同程度抑制NA酶活及耐药N9神经氨酸酶活,其中3E3 NA酶活抑制能力最强,体外细胞实验中只有1E2和3E3两株嵌合抗体可以抑制病毒释放,阻止病毒进一步感染细胞,其中3E3对病毒的抑制性最强。结论:本研究构建的叁株嵌合抗体均能特异性识别A/Anhui/1/2013(H7N9)的N9蛋白,具有较强的NA酶活抑制,为防控和治疗H7N9禽流感以及抗体药物的制备建立了一定的理论基础。(本文来源于《南昌大学》期刊2019-05-01）
黄子逸,陈晨,彭雪楠,申春苹,朱一蓓[4]（2019）在《丁酸钠联合Feed促进293F细胞表达PD-1嵌合抗体》一文中研究指出目的:探讨丁酸钠和CHO CD Efficient Feed(以下简称Feed)对293F细胞表达程序性死亡受体-1(PD-1嵌合抗体产量的影响。方法:采用无血清培养基,通过哺乳动物293F细胞瞬时表达抗人PD-1嵌合抗体;在细胞对数生长期添加不同浓度丁酸钠(0,0. 5,1,2,4 mmol/L)处理293F细胞,连续培养7 d,分别在第1,3,5天添加Feed。同时,每24 h对培养细胞进行取样,自动细胞计数仪检测细胞总量和活性,流式细胞术检测细胞周期。结果:丁酸钠联合Feed可有效提高293F细胞表达PD-1嵌合抗体,最高表达量为57.4 mg/L,是对照组产量的近8倍;丁酸钠可抑制细胞过度增殖,并阻滞细胞周期G_1期,同时添加Feed可增加抗体产量。结论:丁酸钠控制293F细胞适度增殖,Feed则有利于提高细胞活力,两者作为细胞培养的有效补充剂可显着提高PD-1嵌合抗体的产量。(本文来源于《江苏大学学报(医学版)》期刊2019年02期）
赵丹,邱冬,韩德敏,刘永杰[5]（2019）在《H_3N_2亚型犬流感病毒鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的制备与活性分析》一文中研究指出[目的]为减少鼠源单克隆抗体的异源性在犬临床治疗中引起的宿主免疫排斥反应,针对H_3N_2亚型犬流感病毒(CIV),制备具有犬源抗体恒定区基因(Fc)的鼠/犬嵌合抗体。[方法]从产生具有良好中和活性CIV单抗的鼠源杂交瘤细胞株中扩增抗体重链和轻链可变区基因,通过重迭延伸PCR(SOE-PCR)获得单链抗体基因(scFv)片段,同时从犬外周血单核细胞中扩增得到犬源抗体Fc片段;分别构建单链抗体与嵌合抗体表达载体,通过大肠杆菌表达、纯化后调整蛋白浓度为1 mg·mL~(-1),检测单链抗体与嵌合抗体的ELISA和血凝抑制(HI)效价,并分析其对病毒感染细胞的中和活性。[结果]获得的H_3N_2亚型CIV鼠源scFv的相对分子质量为45×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶640(1.56μg·mL~(-1))和1∶160(6.25μg·mL~(-1)),中和效价为1∶160(6.25μg·mL~(-1));鼠/犬嵌合抗体scFv-Fc的相对分子质量为80×10~3,ELISA及HI效价分别为1∶2 560(0.39μg·mL~(-1))和1∶640(1.56μg·mL~(-1)),中和效价为1∶40(25μg·mL~(-1))。[结论]成功制备了H_3N_2亚型CIV鼠/犬嵌合抗体,为犬流感的临床治疗提供了物质基础。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2019年03期）
薛雨佳[6]（2018）在《抗猫细小病毒基因工程嵌合抗体研究》一文中研究指出猫细小病毒(Feline parvovirus,FPV),又名猫泛白细胞减少症病毒,属细小病毒科、细小病毒属成员。可引起猫及猫科动物的泛白细胞减少症,表现为高热、顽固性呕吐、腹泻、脱水及白细胞严重减少,常造成幼猫的感染和高死亡率。目前临床对猫细小病毒及犬细小病毒的主要的治疗手段依赖于大量注射抗病毒单克隆抗体。鼠源单抗在用于异种动物治疗上通常不能有效激活补体和Fc受体相关的效应系统,并且能诱发抗鼠抗体,使得疗效降低并加重了动物免疫系统的负担。本研究开发的基因重组嵌合抗体,用抗猫、犬细小病毒的单克隆抗体的可变区替换犬天然抗体的可变区,使重组嵌合抗体在保留单克隆抗体的高亲和力的基础上实现犬源化的改造,达到减少抗体免疫原性的目的,提高抗体在临床上的疗效。本研究通过聚乙二醇法融合FPV免疫小鼠脾脏的细胞与SP2/0细胞,通过免疫荧光(IFA)鉴定、中和实验鉴定,获得一株单克隆抗体3A8,经鉴定该单抗具有与FPV和CPV的中和活性。同时研究并分析了犬天然抗体的可变区、恒定区的位置和次级的结构和分区。克隆单克隆抗体可变区基因及犬抗体的恒定区基因,嵌合两部分基因得到重组抗体基因。将重组抗体基因克隆至真核表达载体pFastBac-Dual杆状病毒穿梭载体质粒,转化DH10Bac感受态,再通过提取重组杆粒DNA,转入昆虫细胞进行真核表达。并对表达的重组嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western-blot、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验和免疫荧光实验对表达的嵌合抗体进行鉴定。通过上述实验后验证了经昆虫细胞真核表达的重嵌合抗体,其重链大小为55kDa、轻链大小为25kDa。该重组嵌合抗体保留了来源于单克隆抗体的对FPV、CPV的中和活性,同时其恒定区部分成功犬源化。说明本研究实现了在保留单克隆抗体中和活性的基础上对单抗犬源化的改造,从而达到了减少抗体用于异种动物免疫源性的目的。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2018-06-01）
江东健[7]（2018）在《抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的构建、表达及其在生物传感器中的应用研究》一文中研究指出Cry1Ac是一种广泛存在于土壤中的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体蛋白,对不同种类的昆虫具有杀虫活性,被称为杀虫晶体蛋白(ICP,Insecticidal Crystal Protein)。目前,Cry1Ac已被广泛应用于转基因农作物生物害虫的防治领域。建立农作物转基因成分的快速、灵敏的分析方法是食品安全研究领域的一个重要方向。本研究的出发点在于构建可应用于食品安全分析领域的RBL细胞传感器,针对RBL细胞传感器的核心元件IgE制备困难这个关键科学问题,以Cry1Ac蛋白为研究对象,在获得特异性结合Cry1Ac蛋白的纳米抗体(VHH)的前期工作基础上,通过基因工程技术,将纳米抗体作为核心识别元件,与鼠源IgE的Fc片段进行嵌合,构建抗Cry1Ac的VHH-Fc嵌合的IgE抗体,以期将来IgE嵌合抗体作为IgE传统抗体的替代物,应用于RBL细胞传感器体系,本研究的主要结果如下:1.通过基因工程技术,将抗Cry1Ac纳米抗体N24、N72分别通过柔性Linker F(GGGGSGGGGSGGGGS)和刚性Linker R(PAPAP)与IgE的Fc(C?2C?3C?4)片段进行嵌合,构建了基于纳米抗体为核心识别元件的IgE嵌合抗体表达载体(pPIC9K-N72-F-Fc、p ET25b-N72-F-Fc、p ET25b-N72-R-Fc及p ET25b-N24-R-Fc),测序结果表明编码抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的外源基因均以正确的序列分别插入到pPIC9K和pET25b(+)载体中,未发现碱基突变。2.将pPIC9K-N72-F-Fc表达载体转化至真核表达系统Pichia pastoris GS115,进行IgE嵌合抗体的表达。经甲醇诱导,提取培养基上清,双抗夹心(Double-Antibody Sandwich,DAS)ELISA鉴定以及SDS-PAGE电泳分析,结果显示:在预期的表达上清中未检测到明显的目的蛋白条带,以及ELISA鉴定与BSA、OVA阴性对照的OD值无明显差异,未检测到N72-F-Fc嵌合抗体的表达。3.将3种IgE嵌合抗体表达载体(pET25b-N72-F-Fc、pET25b-N72-R-Fc及pET25b-N24-R-Fc)转化至原核表达系统E.coli.Rosetta(DE3),在30℃,180 r/min,0.1 mM IPTG的条件下诱导表达10 h,经Ni~(2+)亲和柱纯化后得到3种较高纯度的IgE嵌合抗体(N72-F-Fc、N72-R-Fc及N24-R-Fc)。4.将N72-F-Fc、N72-R-Fc及N24-R-Fc经变性、纯化、复性后,通过ELISA分析IgE嵌合抗体末端信号及识别Cry1Ac抗原的结合性能,结果表明IgE嵌合抗体的His信号标签和IgE-Fc片段均保留了活性,N24-R-Fc与Cry1Ac的结合性能较强且特异性良好。建立了以N24-R-Fc作为捕获抗体,8A8作为检测抗体检测Cry1Ac的DAS-ELISA标准曲线,线性检测范围为3.9-125 ng/mL,最低检测限LOD为2.58 ng/mL。初步分析了不同浓度的N24-R-Fc嵌合抗体经5μg/mL的Cry1Ac抗原诱导下,对RBL-2H3细胞活化脱颗粒的影响,结果显示:随着N24-R-Fc浓度的增加,RBL-2H3细胞脱颗粒程度逐渐增强,在20、30、40、50μg/mL的N24-R-Fc抗体条件下,RBL-2H3细胞脱颗粒β-HEX的释放率分别为11%、18.7%、28.3%、33.3%,初步表明N24-R-Fc嵌合抗体可作为传统的IgE抗体替代物,应用于RBL细胞传感器体系。5.分别将N24-R-Fc嵌合抗体、抗Cry1Ac单克隆抗体(8A8)作为识别元件,建立了Cry1Ac的非标记阻抗型免疫传感器,结果显示:基于N24-R-Fc、8A8的Cry1Ac阻抗免疫传感器线性范围分别为1.95-62.5 ng/mL、0.98-125 ng/mL,最低检测限分别为1.85 ng/mL、0.80 ng/mL。采用基于N24-R-Fc的Cry1Ac非标记阻抗免疫传感器对玉米进行加标回收实验,回收率为87.32-116.11%,变异系数CV均小于12%,结果表明该方法具有良好的准确性。(本文来源于《南昌大学》期刊2018-05-31）
朱莹,王婧,沈立军,王志遥,颜天铭[8]（2017）在《B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样肾炎的免疫干预效应》一文中研究指出目的探讨在诱导c GVHD小鼠狼疮样肾炎模型并通过各项指标鉴定其造模成功的基础上,运用自行研制的B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/CD28共刺激信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法将6~8周龄雌性(C57BL/6×BALB/c)BCF1小鼠随机分为4组,模型组于0、3、7和11 d经眼眶静脉注射100μL雌性亲代BALB/c小鼠脾脏细胞107/只。抗体干预组在造模后第1、3、5、8、15、30及60天分别经眼眶静脉注射100μL B7-1人-鼠嵌合抗体(克隆号2B11)200μg/只,环磷酰胺(CTX)干预组在末次注射淋巴细胞后第1、3、5、8、15天分别腹腔注射100μL CTX 2.5 mg/只。按照上述时间点分析小鼠抗ds DNA抗体、ANA及尿蛋白含量,12周时处死小鼠观察肾脏组织HE染色、免疫复合物(IC)沉积等情况。结果模型组100%小鼠出现蛋白尿,尿蛋白含量为++~++++,抗体干预组12周时仅有30%的小鼠出现蛋白尿,尿蛋白含量为+~++;12周时与模型组相比,抗体干预组小鼠血清抗ds DNA抗体阳性率由50%降至0;抗体干预组ANA阳性率由90%降至40%,且荧光面积与荧光亮度均下降;HE染色镜下观察,抗体干预组肾小球囊腔大小较为均一,炎性细胞浸润减少;直接免疫荧光法可见抗体干预组肾小球血管襻IC沉积减少。结论 B7-1人-鼠嵌合抗体可通过阻断或削弱B7/CD28共刺激信号通路,减少自身抗体和IC生成,逆转狼疮肾炎的病理损伤,提示该自行研制的B7-1人-鼠嵌合抗体对狼疮肾炎具有潜在的防治作用。(本文来源于《实用药物与临床》期刊2017年12期）
张龙真,郭佳,顾华,房健民[9]（2017）在《重组抗c-Met嵌合抗体的构建及其利用慢病毒快速表达》一文中研究指出文章采用兼并引物逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)从特异性分泌抗人c-Met阻断型单克隆抗体的杂交瘤细胞株3E1D7中扩增抗体重、轻链可变区基因(V_H和V_L)。通过重迭延伸PCR(splice overlap extension PCR,SOE-PCR)方法分别将鼠源V_H与人IgG1的重链恒定区基因Cγ1相连,鼠源V_L与人IgG1的轻链恒定区基因Cκ相连获得嵌合抗体重链基因(H)和轻链基因(L)。将嵌合抗体重、轻链基因连接到慢病毒表达载体中,经双酶切和测序鉴定成功构建了慢病毒表达质粒pRRL-CMV-ch3E-H和pRRL-CMVch3E-L。磷酸钙法转染293T细胞,表达的嵌合抗体经Protein A Sepharose 4B亲和层析柱纯化,通过SDSPAGE检测抗体的完整性,ELISA法检测嵌合抗体的特异性抗原结合活性及人源性。感染慢病毒的293T细胞上清纯化后,经SDS-PAGE分析,可见25kDa嵌合抗体轻链和50kDa的嵌合抗体重链蛋白。且纯化后的嵌合抗体能够与c-Met抗原特异性结合成功获得重组抗人c-Met嵌合抗体,该抗体减少了鼠源成分,降低了免疫原性,利用慢病毒可以快速获得大量重组抗体蛋白,为该抗体药物的体内外评估奠定基础。(本文来源于《合肥工业大学学报(自然科学版)》期刊2017年06期）
谢伟强[10]（2016）在《抗HTNV中和性鼠/人嵌合抗体基因向植物转化研究》一文中研究指出在由农杆菌介导的叶盘法转化烟草的研究中,将含有重组质粒的农杆菌过夜培养后按1∶100接种于新鲜的LB培养液中培养6h至OD600≈0.6时,取菌液经梯度稀释后分别对大小约0.5cm2的烟草叶片进行不同时间浸染。结果表明,用经20倍稀释后的菌液浸染的烟草叶片其转化率达97%以上,且不同时间浸染的处理间无显着差异,培养基中激素浓度以6-BA 1.5mg/L IAA 0.5mg/L为宜。(本文来源于《安徽农学通报》期刊2016年23期）
嵌合抗体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为降低单克隆抗体(MAb)在犬体内的免疫原性,本研究克隆了具有中和猫、犬细小病毒(FPV、CPV)活性的MAb (3EB)的轻、重链可变区基因及犬天然抗体(NAb)轻、重链恒定区基因,通过融合PCR获得鼠-犬嵌合抗体基因。构建能够表达嵌合抗体的重组质粒,经昆虫杆状病毒表达系统对重组嵌合抗体进行表达。SDS-PAGE和western blot试验显示鼠-犬嵌合抗体重链为55 ku、轻链为25 ku。间接免疫荧光试验显示该嵌合抗体能够与抗犬IgG和FPV特异性结合。上述结果表明,嵌合抗体保留了原MAb 3EB对病毒特异结合能力的基础上,将鼠源恒定区替换为犬源NAb的恒定区。病毒中和试验表明嵌合抗体保留了3EB对FPV、CPV的中和活性。本研究首次通过昆虫杆状病毒表达系统表达了抗FPV、CPV的嵌合抗体,降低了原MAb的免疫原性,对FPV、CPV病临床治疗用抗体药物的研制具有重要指导意义。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
嵌合抗体论文参考文献
[1].梁振鑫,刘芳,张玮,刘庆友,李力.抗p185~(erbB2)人鼠嵌合抗体ChAb26转基因小鼠乳腺生物反应器的制备与验证[J].中国生物工程杂志.2019
[2].薛雨佳,宋彩玲,赵爽爽,李彤彤,王文静.抗猫细小病毒嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达与鉴定[J].中国预防兽医学报.2019
[3].阮菲儿.抗H7N9亚型流感病毒神经氨酸酶嵌合抗体的制备及初步鉴定[D].南昌大学.2019
[4].黄子逸,陈晨,彭雪楠,申春苹,朱一蓓.丁酸钠联合Feed促进293F细胞表达PD-1嵌合抗体[J].江苏大学学报(医学版).2019
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[7].江东健.抗Cry1Ac蛋白IgE嵌合抗体的构建、表达及其在生物传感器中的应用研究[D].南昌大学.2018
[8].朱莹,王婧,沈立军,王志遥,颜天铭.B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠慢性移植物抗宿主病(cGVHD)狼疮样肾炎的免疫干预效应[J].实用药物与临床.2017
[9].张龙真,郭佳,顾华,房健民.重组抗c-Met嵌合抗体的构建及其利用慢病毒快速表达[J].合肥工业大学学报(自然科学版).2017
[10].谢伟强.抗HTNV中和性鼠/人嵌合抗体基因向植物转化研究[J].安徽农学通报.2016
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