针对PEDV N蛋白和PDCoV N蛋白单克隆抗体的制备

论文摘要

猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）和猪德尔塔冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是当前猪病毒性腹泻的重要病原,感染后仔猪出现呕吐、腹泻等症状,具有高致病性和高死亡率的特点。2010年PEDV变异株在中国大规模流行,至今仍未得到有效控制;新现PDCoV在香港最先被发现,2014年美国首次从腹泻猪群中检出PDCoV,随后亚洲地区多个国家相继暴发疫情,对于该病尚无良好的防控制剂,上述两种猪腹泻冠状病毒使养猪业遭受巨大的经济损失。冠状病毒N蛋白相对保守,是病毒自身的优势抗原,常作为感染早期精准诊断的最佳靶标。本研究通过IPTG低温诱导原核表达PEDV N蛋白和PDCoV N蛋白,镍柱纯化的两种N蛋白分别免疫BALB/c小鼠,经眼眶静脉丛采血并收集血清,建立间接ELISA（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay）方法;待血清效价高于1:10,000时,将脾细胞与SP2/0细胞融合获得杂交瘤细胞。采用间接ELISA方法和细胞表面荧光免疫吸附（cell surface-fluorescence immunosorbent assay,CSFIA）法进行筛选,分别获得一株针对PEDV N蛋白的杂交瘤细胞株,分泌的单克隆抗体（Monoclonal antibody,MAb）命名为3D3和1B1,比较后发现,CSFIA筛选的1B1比3D3抗体效价高10倍;同时,通过间接ELISA方法筛选获得两株针对PDCoV N蛋白的杂交瘤细胞株,分泌的MAb命名为2G12和2E2。间接免疫荧光试验表明,3D3和1B1均能特异性结合PEDV;2G12能与PDCoV发生特异性结合。Western blotting试验也表明,3D3和1B1能与PEDV和重组表达PEDV N蛋白反应;2G12和2E2能与PDCoV和重组表达PDCoV N蛋白反应。综上可知,本试验制备具有良好反应性的抗PEDV N和抗PDCoV N蛋白的MAb,能为后续PEDV和PDCoV诊断试剂盒开发提供技术支撑,也可以在PEDV N和PDCoV N蛋白功能研究中发挥重要作用。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 罗素贤

导师: 唐玉新

关键词: 单克隆抗体,细胞表面荧光免疫吸附,酶联免疫吸附试验

来源: 江西农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 江西农业大学

基金: 国家重点研发专项基金项目(No.2017YFD0500600),江西省自然科学基金(No.2018ACB21027和No.20161BAB214169),江西省教育厅科技项目(No.GJJ150388)

分类号: S852.651

DOI: 10.27177/d.cnki.gjxnu.2019.000169

总页数: 43

文件大小: 3477K

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标签：单克隆抗体论文;  细胞表面荧光免疫吸附论文;  酶联免疫吸附试验论文;