重组R/Q亚型人血清对氧磷酶1的制备和两者解毒效应比较

重组R/Q亚型人血清对氧磷酶1的制备和两者解毒效应比较

论文摘要

目的通过基因重组的方法制备人血清对氧磷酶1的R/Q亚型同工酶(rhPON1R/Q192),并比较两种酶作为有机磷中毒解毒剂的效果差异。方法通过昆虫杆状病毒蛋白表达体系获得rhPON1R/Q192。将30只60日龄的雄性昆明种小鼠随机分成染毒对照组、染毒治疗A组、染毒治疗B组,每组10只。将对氧磷按2倍LD50(1.72 mg/kg)的剂量,对各组小鼠采用经口灌胃的方式染毒。而后立即将纯化的rhPON1R192和rhPON1Q192作为解毒剂,按10 U/kg的剂量采用腹腔注射方式分别予A、B染毒治疗组小鼠。连续观察12 h,记录并比较各组小鼠中毒指标的差异,评价rhPON1R/Q192的解毒效果。结果通过基因重组的方法可以大量获得具有对氧磷水解活性的rhPON1R/Q192,其中rhPON1R192的产率为8.34%,比活性为1 552.31 U/mg;rhPON1Q192的产率为10.60%,比活性为581.60 U/mg。对照组小鼠在观察期内均出现了中毒症状,死亡率为100%。染毒治疗A、B组小鼠出现中毒症状、De Bleeker评分达到3分及死亡时间均明显延迟(P<0.05);两组的死亡率分别是10%和20%,较对照组明显下降(P<0.05)。A组的各项指标均明显好于B组(P<0.05)。结论通过基因重组方法获取的rhPON1R/Q192,可用作对氧磷中毒的解毒剂,且R亚型同工酶解毒效果更好。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 构建对氧磷酶1的R/Q亚型同工酶(rhPON1R/Q192)基因序列的质粒表达系统
  •       1.2.1.1 目的基因序列合成
  •       1.2.1.2 目的基因片段鉴定和分离
  •       1.2.1.3 线性载体的制备和鉴定
  •       1.2.1.4 连接载体和目的基因
  •       1.2.1.5 目标基因的载体转化至感受态细胞
  •       1.2.1.6 提取目的基因的杆粒DNA
  •     1.2.2 rhPON1R/Q192的表达和鉴定
  •       1.2.2.1 IPLB-SF21 细胞的培养和转染
  •       1.2.2.2 目标蛋白的获取及鉴定
  •     1.2.3 目的蛋白的纯化
  •     1.2.4 rhPON1R/Q192活性检测
  •   1.3 实验动物分组
  •   1.4 中毒指标观察
  •   1.5 统计分析
  • 2 结果
  •   2.1 基因质粒连接产物的鉴定
  •   2.2 病毒感染IPLB-SF 21细胞的镜检结果
  •   2.3 目标蛋白的检测
  •     2.3.1 SDS-PAGE
  •     2.3.2 Western blot
  •     2.3.3 活性检测
  •   2.4 rhPON1R/Q192解毒效果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 崔玥,韩朗

    关键词: 对氧磷酶,基因重组,对氧磷中毒,基因多态性

    来源: 中国工业医学杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

    专业: 有机化工,药学

    单位: 沈阳医学院附属中心医院急诊科,中国医科大学附属盛京医院

    基金: 沈阳医学院科技基金项目(编号:20161017)

    分类号: R943;R96

    DOI: 10.13631/j.cnki.zggyyx.2019.06.002

    页码: 438-442+445+513

    总页数: 7

    文件大小: 10416K

    下载量: 14

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