启动子串联及改造提高FAD为辅基的葡萄糖脱氢酶在Bacillus subtilis中的表达

论文摘要

以黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide,FAD）为辅基的葡萄糖脱氢酶（glucose dehydrogenase with FAD,FAD-GDH,EC 1.1.99.10）,与辅基结合紧密,催化效率高,是临床检测血糖指标的新型诊断用酶。将Burkholderia cepacia的FAD-GDH基因（gdh）构建含单启动PHpaⅡ的穿梭质粒p MA5-1,在蛋白酶缺陷型菌株Bacillus subtilis WB600中表达。为了获得该酶的高效表达,采用启动子串联及改造策略考察产酶情况。将4种启动子(PamyQ’,P43,PgsiB,Popuaa)分别与质粒上自带的启动子PHpaⅡ串联,结果表明PHpaⅡ-PamyQ’串联组合获得的FAD-GDH胞内酶活最高,为2 497 U/L,是串联前单启动子的2.7倍。为了减少发酵过程中,葡萄糖和甘油对产酶的抑制作用,在串联组合的基础上删去PamyQ’启动子中与碳代谢调控蛋白结合的cre位点,使胞内产酶水平提高至3 626 U/L,说明cre位点的去除能够减少碳代谢产物对启动子转录的抑制。本研究为新型诊断用酶FAD-GDH的菌种改造和工业化生产应用提供参考与借鉴。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张玲,林荣,宋祖坤,王男,杨海麟

关键词: 黄素腺嘌呤二核苷酸,葡萄糖脱氢酶,枯草芽孢杆菌,串联启动子,位点

来源: 食品与发酵工业 2019年08期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

专业: 生物学

单位: 江南大学工业生物技术教育部重点实验室

基金: 江苏省产学研(BY2016022-40),国家轻工技术与工程一流学科自主课题资助(2018-23)

分类号: Q78

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018685

页码: 15-21

总页数: 7

文件大小: 1803K

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