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纳米乳和乙二醇壳聚糖佐剂对EV71病毒样颗粒免疫效果的影响

2020-12-08阅读(338)

纳米乳和乙二醇壳聚糖佐剂对EV71病毒样颗粒免疫效果的影响

论文摘要

本文采用溶解度更高的乙二醇壳聚糖（Glycol Chitosan,GCS）,以EV71病毒样颗粒（EV71VLP）作为抗原详细考察了乙二醇壳聚糖对其免疫原性的影响,并考察纳米乳佐剂及其联合乙二醇壳聚糖对EV71VLP免疫效果的改善作用。本实验探究了盐酸法降解乙二醇壳聚糖的方法步骤,总结出了简便有效的降解流程,并且对产物进行了分子量及脱乙酰度的检测,为将来需要使用到低分子量乙二醇壳聚糖的实验提供了大量的参考依据。使用盐酸降解法在50℃水浴条件下,4M HCl分别降解0h、1h、4h、24h,透析后冻干后制备获得不同分子量的乙二醇壳聚糖,并用凝胶色谱系统检测了上述乙二醇壳聚糖的分子量,分别为265kDa、109kDa、51kDa、12kDa。免疫实验结果表明,取不同浓度的乙二醇壳聚糖与EV71 VLP抗原用柠檬酸缓冲液混合,通过肌肉注射免疫ICR小鼠,免疫剂量为每只小鼠4μgEV71 VLP,1mg、0.5mg、0.1mg,注射体积为100μl,于第零周和第三周进行免疫。其中佐剂组在ICR小鼠体内较单独EV71VLP组均引起较高的抗体水平,且免疫反应类型均属于Th2偏向型体液免疫。一免后第1周中高剂量组较低剂量组产生更高的抗体水平。第1-9周中高剂量组抗体滴度水平略高于低剂量组。二免后中高剂量组的抗体水平较低剂量组提高幅度更大。取分子量分别为265kDa、109kDa、51kDa、12kDa的乙二醇壳聚糖与EV71 VLP抗原用柠檬酸缓冲液混合,通过肌肉注射免疫ICR小鼠,不同分子量的乙二醇壳聚糖在肌肉注射免疫后在ICR小鼠体内引起的抗体强度相当。在纳米乳佐剂和纳米乳联合乙二醇壳聚糖的免疫实验中,第一次和第二次肌肉注射免疫后,单独的纳米佐剂组的IgG抗体水平与注射柠檬酸缓冲液的阴性对照组之间均存在显著性差异,表明在ICR小鼠体内诱导产生了一定水平的IgG抗体。在联合实验中,二免诱导产生抗体水平方面,所有佐剂组优于单独EV71组,联合佐剂组优于其它组,可迅速产生较高的抗体水平。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第一章 前言
  •   1.1 EV71 疫苗研究进展
  •     1.1.1 手足口病和EV71 病毒
  •     1.1.2 EV71 灭活疫苗
  •     1.1.3 减毒活疫苗
  •     1.1.4 亚单位疫苗
  •     1.1.5 病毒样颗粒疫苗
  •     1.1.6 DNA疫苗
  •   1.2 EV71 疫苗佐剂研究概述
  •     1.2.1 疫苗佐剂
  •     1.2.2 铝盐佐剂
  •     1.2.3 油乳佐剂
  •     1.2.4 其它无机佐剂
  •   1.3 壳聚糖的结构与应用
  •     1.3.1 壳聚糖的佐剂机制
  •     1.3.2 乙二醇壳聚糖的结构
  •     1.3.3 乙二醇壳聚糖的性质
  •     1.3.4 不同分子量乙二醇壳聚糖的制备方法
  •   1.4 立题依据、研究意义及实验设计
  •     1.4.1 立题依据及研究意义
  •     1.4.2 实验设计
  • 第二章 乙二醇壳聚糖作为佐剂对EV71VLP免疫效果的影响
  •   2.1 实验材料
  •     2.1.1 实验仪器
  •     2.1.2 实验试剂
  •     2.1.3 实验动物
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 不同分子量乙二醇壳聚糖的制备
  •     2.2.2 降解后不同分子量乙二醇壳聚糖的性质检测
  •     2.2.3 免疫方案
  •     2.2.4 抗体滴度的检测
  •     2.2.5 抗体分型的检测
  •   2.3 实验结果
  •     2.3.0 乙二醇壳聚糖降解制备结果与分子量表征
  •     2.3.1 傅里叶红外光谱FTIR检测结果
  •     2.3.2 不同浓度乙二醇壳聚糖免疫组抗体滴度
  •     2.3.3 不同浓度乙二醇壳聚糖免疫组抗体分型
  •     2.3.4 不同分子量乙二醇壳聚糖免疫组抗体滴度
  •     2.3.5 不同分子量乙二醇壳聚糖免疫组抗体分型
  • 第三章 鲨烯纳米乳佐剂对EV71VLP免疫效果的影响
  •   3.1 实验材料
  •     3.1.1 实验仪器
  •     3.1.2 实验试剂
  •     3.1.3 试剂配方
  •     3.1.4 实验动物
  •   3.2 实验方法
  •     3.2.1 BCA法检测EV71 VLP抗原浓度
  •     3.2.2 HPLC 检测纳米乳组分和动态光散射仪检测纳米乳的表征
  •     3.2.3 免疫实验
  •     3.2.4 尾静脉取血收集小鼠血清
  •     3.2.5 抗体滴度的检测
  •     3.2.6 抗体分型的检测
  •   3.3 实验结果
  •     3.3.1 鲨烯纳米乳制剂表征
  •     3.3.2 抗体滴度评价
  • 第四章 MF59/GCS联合佐剂对EV71VLP免疫效果的影响
  •   4.1 实验材料
  •     4.1.1 实验仪器
  •     4.1.2 实验试剂
  •     4.1.3 实验动物
  •   4.2 实验方法
  •     4.2.1 GCS和 MF59 的稳定性检测
  •     4.2.2 免疫实验
  •     4.2.3 割尾静脉取血以及血清制备
  •     4.2.4 抗体滴度的检测
  •     4.2.5 抗体分型的检测
  •   4.3 实验结果
  •     4.3.1 稳定性
  •     4.3.2 ELISA检测结果
  •     4.3.3 抗体分型检测结果
  •     4.3.4 中和抗体结果
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 潘雪

    导师: 陈妍

    关键词: 佐剂,乙二醇壳聚糖,分子量,免疫原性

    来源: 吉林大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 吉林大学

    分类号: R392

    总页数: 66

    文件大小: 4182K

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