论文摘要
目的 NS0宿主细胞残留DNA检测（定量PCR-Taqman探针法）方法的验证。方法针对小鼠骨髓瘤细胞（NS0）基因组重复序列设计合成多对引物、探针,通过实验优选最佳的引物探针组合;应用所建立的前处理试剂盒（磁珠法）对供试品中宿主细胞残留DNA进行富集纯化;根据《国际人用药品注册技术协调会（ICH）》及《中国药典》通则9101的要求,应用所建立的NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量限的方法学验证。应用NS0细胞生产的单克隆抗体工艺中间品及原液,验证所建立试剂盒对实际生产样品的检测性能,并组织5个独立实验室进行协作标定。结果 NS0细胞DNA检测（Taqman法）正向引物序列:CCCCTTCAGCTCCTTGGGTA、反向引物序列:GCCTGGCAAATACAGAAGTGG、荧光探针序列:FAM-AGGGCCCCCAATGGAGGAGCT-TAMRA; NS0细胞DNA标准曲线在3 fg·μL-1～300 pg·μL-1内,线性良好（r2> 0. 99）;对6个浓度梯度检测的准确度偏差均<15%;定量限为3 fg·μL-1;内部参考品DNA标定结果为30μg·m L-1;精密度良好（RSD≤30%）;能特异性地检测NS0细胞DNA,对大肠杆菌DNA、人类基因组DNA（人肾上皮293T细胞）、CHO（中国仓鼠卵巢）细胞DNA无扩增反应。另外,对于生产工艺中间品及原液的检测回收率均在70%～130%,RSD均<15%。5个独立实验室间协标检测数据RSD均<30%。结论自主研发NS0宿主细胞DNA残留检测试剂盒（定量PCR-Taqman探针法）特异性强、灵敏度高、准确度好,能够满足NS0宿主DNA残留检测要求。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 武刚,付志浩,杨志行,崔永霏,张荣建,宗伟英,王兰
关键词: 标准品,宿主细胞残留检测,探针法,方法验证
来源: 中国药学杂志 2019年24期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 药学
单位: 中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室,中国科学院上海生命科学研究院湖州营养与健康创新中心
基金: 国家“重大新药创制”科技重大专项项目资助(2018ZX09736008),中国医学医科院-中央级公益性科研院所基本科研业务费专项课题项目资助(2017PT31041)
分类号: R917
页码: 2001-2009
总页数: 9
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标签：标准品论文; 宿主细胞残留检测论文; 探针法论文; 方法验证论文;