导读:本文包含了冷诱导基因论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:柑橘,cor8基因,遗传转化,瞬时表达
冷诱导基因论文文献综述
姜航[1]（2016）在《柑橘冷诱导基因低温响应及转化柠檬》一文中研究指出本课题组已经从耐寒性柑橘枳中克隆获得一个与低温锻炼有关的基因,并将其命名为Ptcor8。同时发现该基因在金柑、柠檬等柑橘种类中具有高度同源性,而且该同源基因表达与柑橘抗寒能力大小呈现相同趋势,枳最耐寒,能耐受-26℃低温,柠檬最不耐寒,枳中的表达量是柠檬的25倍。另外研究比对不同柑橘种类中同源基因启动子的序列发现,枳启动子与柠檬启动子的同源性为88.17%,并且枳启动子含有3个与逆境响应相关的特有调控元件。于是构建了含有启动子和cor8基因的融合植物表达载体,用农杆菌介导的瞬时表达法,将含有不同载体的菌液注射到墨西哥莱檬叶片中,进行瞬时表达,发现枳启动子对低温响应的敏感度更高。在此条件下,将pPtcor8::Ptc-or8::YFP, pPtcor8::Clcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP3个植物表达载体转入到不耐寒的柠檬,并对柠檬遗传转化条件进行优化,筛选出最佳组合的再生条件和筛选压,最终得到了转基因植株本研究取得了以下主要结果：1、将构建好的4个植物表达载体(35S::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Ptcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP,pPtcor8::Clcor8::YFP)采用农杆菌介导的瞬时表达法注射墨西哥莱檬叶片,YFP报告基因的荧光检测说明枳的启动子比柠檬启动子在低温下更敏感。2、对柠檬遗传转化条件进行优化,在再生培养基中不同浓度的6-BA,卡那霉素以及除草剂进行筛选,得出了再生培养基为MT+0.75 mg/L 6-BA,添加75 mg/LKan或者10mg/LBastao3、将pPtcor8::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Clcor8::YFP, pClcor8::Ptcor8::YFP3个植物表达载体转入到不耐寒的柠檬,得到含有ppPtcor8::Ptcor8::YFP抗性芽34个,pClcor8::Ptcor8::YFP抗性芽48个,pPtcor8::Clcor8::YFP抗性芽29个,通过报告基因的荧光检测得到成功转入pPtcor8::Ptcor8::YFP, pPtcor8::Ptcor8::YFP, pClcor8:: Ptcor8::YFP,pPtcor8::Clcor8::YFP的柠檬植株分别是3株,4株,2株；并移栽于温室大棚。(本文来源于《湖南农业大学》期刊2016-06-01）
何姣[2]（2015）在《冰岛虞美人（Papaver nudicaule）不同品种耐寒性评价及其冷诱导基因PnDREB1的克隆》一文中研究指出本试验以冰岛虞美人不同品种为实验材料,研究人工模拟低温对植株叶片形态及生理、生化指标的影响,采用主成分分析法和隶属函数法对其耐寒性进行综合评价。同时根据其他植物中已知冷诱导转录因子DREBl的保守序列,设计引物,从冰岛虞美人克隆获得PnDREB1的全长序列,并对其进行生物信息学分析和低温诱导表达分析。获得以下主要研究结果：1冰岛虞美人.不同品种耐寒性评价以‘香槟气泡’、国产品种、 ‘仙境’、 ‘花匠’4个品种成熟植株为试验材料,研究低温环境对植株叶片形态、电导率、MDA等11个形态、生理、生化指标的影响。结果表明：(1)不同低温(3、0、-3、-6、-9℃)处理24h,4个品种冰岛虞美人相对电导率随温度降低呈上升趋势, ‘香槟气泡’、国产品种、‘仙境’、‘花匠’的低温半致死温度分别为-7.7℃、-5.2℃、-1.9℃、-4.5℃。(2)-3℃处理0、24、48、72h时,4个品种冰岛虞美人叶片均出现不同程度的冻害,72h后冻害指数分别为0.30、1.46、2.34、1.67；随低温胁迫时间的延长,植株MDA含量均呈先下降后上升的变化趋势；‘香槟气泡’可溶性蛋白含量先降后升,其他叁种则先升后降；‘花匠’脯氨酸含量持续上升,其他叁种则先升后降；‘香槟气泡’SOD活性持续上升,其他叁种植株先升后降；4个品种冰岛虞美人叶片POD活性先升后降,CAT活性呈“上升-下降-上升”的变化趋势,APX活性先升后降,GR活性与ASA含量均先降后升。说明4个品种冰岛虞美人对低温均有一定的适应性,但不同品种对低温的适应性调节存在明显差异。(3)用主成分分析法和隶属函数法对MDA、可溶性蛋白、脯氨酸等9个生理、生化指标进行分析,得出4个品种冰岛虞美人耐寒性强弱顺序为：‘香槟气泡’>国产品种>‘花匠’>‘仙境’,该结果与各品种低温半致死温度排序及冻害指数排序基本一致,可为冰岛虞美人耐寒指标确定、品种筛选提供科学依据。2.冰岛虞美人PnDREB1基因的克隆及序列分析通过RI-PCR法从冰岛虞美人品种‘香槟气泡’中分离出一个新的DREB1转录因子,命名为PnDREB1。该基因序列全长1035bp,无内含子,开放阅读框(ORF)长699bp,编码232个氨基酸残基,预测蛋白分子量为26.3kDa,含有1个由58个氨基酸组成的AP2/ERF结构域,且在N-端含有一个富含碱性氨基酸区域,推测为核定位信号(NLS):PKR(K)K(P)AGRxKFxETRHP,结构域下游含有DSV(A)WR序列,这两段多肽序列均属于DREB1/CBF基因家族的特征序列。该基因编码的蛋白质与荷花DREB1B、梅花DREB1B、菊花DREB1、沙梨DREB、拟南DREB1D等具有高度同源性。系统进化树分析显示,冰岛虞美人PnDREBl属于DREB/CBF转录因子家族中的A-1亚组,与菊花DREB1亲缘关系最近。生物信息学预测分析表明,冰岛虞美人PnDREB1基因编码的蛋白属于亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽,可能位于叶绿体或细胞核中。二级结构及叁级结构预测显示,该蛋白含有1个α-螺旋,3个β-折迭和多个β-转角。半定量RT-PCR分析表明,低温处理前,冰岛虞美人叶片内PnDREB1基因表达水平很低,几乎检测不到。-3℃处理后,PnDREB1转录水平随处理时间的延长呈先上升后下降的变化趋势,在处理8h时其相对表达量达到最大值。(本文来源于《四川农业大学》期刊2015-06-01）
姜航,胡威,屈汉金,周潇,张凤[3]（2015）在《冷诱导基因转化柠檬的研究》一文中研究指出将包含载体p Ptcor∷8Ptcor8∷YFP的农杆菌EHA105转入到不抗寒的柠檬中,并对转化体系进行了优化。研究结果表明,再生培养基中的6-BA的浓度,卡那霉素(Kan)浓度以及除草剂(Basta)的浓度对柠檬的转化效率有明显影响;再生培养基配方为MT+0.5 mg/L 6-BA,添加75 mg/L kan或10 mg/L Basta时能够有效筛选到抗性芽,并获得了3株转基因柠檬植株,YFP阳性率为3.6%。(本文来源于《湖南农业科学》期刊2015年05期）
谭克,赵福顺,吴慧杰,宋述尧[4]（2015）在《冷诱导基因转录因子CBF1转入黄瓜的研究》一文中研究指出以抗冷性强的黄瓜"山东5号"为试材,研究冷诱导转录因子CBF1基因对黄瓜抗冷性的影响。从"山东5号"黄瓜基因组DNA中扩增并克隆了冷诱导转录因子CBF1基因,将其与CaMV 35S启动子和Nos终止子融合后构建成植物表达载体pROK2-CBF1。通过花粉管通道法转化黄瓜植株,获得了具有卡那霉素抗性的黄瓜再生植株。结果表明:CBF1基因已整合到黄瓜基因组中,转基因植株胁迫期间可溶性糖含量、幼苗含水量显着高于对照;MDA含量、叶片电解质渗透率显着低于对照,黄瓜已具备了较强抗冷性。(本文来源于《北方园艺》期刊2015年09期）
周潇,姜航,屈汉金,邓子牛,A·Gentile[5]（2015）在《柑橘冷诱导基因及其启动子表达载体构建与瞬时表达分析》一文中研究指出【目的】以YFP为报告基因,构建柑橘冷诱导基因及其启动子的植物表达载体。【方法】克隆获得枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8,柠檬中同源基因Clcor8及其启动子p Clcor8;双酶切含启动子的克隆载体和植物表达原始载体p1D4,连接获得含启动子的中间载体;再双酶切含冷诱导基因的克隆载体和中间载体,连接后获得重组质粒;通过冻融法将重组质粒导入农杆菌EHA105中。【结果】构建了p1D4/p Ptcor8-Ptcor8::YFP,p1D4/p Ptcor8-Clcor8::YFP和p1D4/p Clcor8-Ptcor8::YFP 3个融合表达载体,瞬时表达发现3个融合基因均可在冰糖橙叶片中表达。【结论】3个融合表达载体的成功构建为下一步转化柠檬,分析枳冷诱导基因Ptcor8及其启动子p Ptcor8的功能奠定了基础。(本文来源于《果树学报》期刊2015年03期）
王北艳,殷奎德[6]（2013）在《转rd29A-ICE1冷诱导基因水稻提高抗寒性研究》一文中研究指出本研究以pCAMBIA1300质粒为基础,构建了植物冷诱导表达载体pCAMBIA1300-rd29A-ICE1,利用农杆菌介导法导入粳稻品种空育131中。PCR、RT-PCR和Southern杂交检测结果表明,ICE1基因已经成功整合到水稻基因组中,并正常表达。与对照相比,低温处理后超表达ICE1基因的水稻转基因株系存活率和脯氨酸含量明显增加,丙二醛含量积累速率明显下降,提高了抗低温胁迫能力。(本文来源于《核农学报》期刊2013年06期）
顾立江[7]（2013）在《沙冬青温度相关基因表达谱分析及冷诱导基因AmDUF1517的克隆与功能研究》一文中研究指出温度是影响植物生长发育的重要环境因子之一，也是影响农作物产量的重要因素之一。沙冬青是我国温带荒漠的常绿灌木，在长期的逆境适应中形成了独特的耐受机理，具有抗旱、抗寒、耐高温、抗贫瘠等优良性状，是开展植物抗逆研究的理想材料。本文以蒙古沙冬青为材料，在已建立的沙冬青逆境转录表达谱的基础上，筛选与温度相关基因并进行功能鉴定研究，旨在为抗性育种提供新的基因资源。取得以下进展：1.对沙冬青温度诱导表达谱进行了验证，筛选了温度相关基因。对已经建立的沙冬青温度相关转录表达谱进行生物信息学分析，挑选温度相关上调表达的基因片段（Transcript DerivedFragments，TDFs），从中选择43条温度诱导表达TDFs开展表达谱分析验证。共确定温度诱导表达TDFs16条：其中2条TDFs与信号转导相关，3条与细胞代谢相关，4条与光合和能量相关，2条与转录表达调控相关，1条与细胞逆境防御相关，4条功能未知。克隆获得其中3个基因的全长cDNA序列，通过与GenBank已知序列比对，参考其各自相似性高的序列分别命名为AmRubiscoActivase、AmDUF1517和class II small AmHSP。选择冷诱导基因AmDUF1517为进一步研究的目标基因。2.对AmDUF1517基因特征分析表明：AmDUF1517开放阅读框906bp，编码301个氨基酸，其C-端与拟南芥的DUF1517保守区域（DUF1517superfamily）氨基酸序列高度同源，基因内含有一个969bp的内含子。染色体步移技术克隆得到长度约1.0kp的AmDUF1517启动子序列，生物信息学分析明确转录起始位点上游-127bp到-78bp处有典型真核生物启动子序列特征，TATAbox在启动子上游约-50bp处，明确了AmDUF1517基因的序列特征并有效验证基因序列全长的完整性。利用Southern印记杂交技术，初步确定AmDUF1517基因在沙冬青基因组中为单一拷贝。亚细胞定位发现AmDUF1517定位在叶绿体上。实时荧光定量PCR发现AmDUF1517在低温4℃处理后，表达量上升，在处理初期，表达量曲线出现两个高峰。分别用乙烯、NaCl、脱落酸、抗坏血酸、赤霉素、水杨酸和茉莉酸甲酯处理沙冬青幼苗，发现乙烯、水杨酸和赤霉素能使AmDUF1517的表达量与对照相比提高到2倍或以上，NaCl提高到2.5倍。3.过量表达AmDUF1517基因的拟南芥和拟南芥DUF1517突变体回复实验初步验证了AmDUF1517基因功能。构建植物表达载体转化野生型拟南芥和拟南芥DUF1517突变体，获得突变体351、353、357和361的转基因株系，以及野生型拟南芥的转基因植株系。分别测定4℃2h前后各拟南芥株系的电解质渗漏率、游离脯氨酸含量、可溶性糖含量和丙二醛含量，发现除了回复突变体351-AmDUF1517的各项生理指标与其对应的突变体一致，其他回复突变体植株均发生了显着变化，均表现出对冷胁迫的抗性显着增加。野生型拟南芥，从可溶性糖和游离脯氨酸含量上表现出其转基因株系的抗性增强，其他生理指标没有表现出其转基因株系抗性的变化。4.盐胁迫和干旱胁迫下比较拟南芥的发芽率，发现同种处理下野生型、过表达型、突变体和回复突变体之间没有显着差异。-20℃冷胁迫2h后一周恢复实验发现，3d（冷处理时）拟南芥幼苗冷胁迫后，突变体根长显着短于野生型、过表达型和回复突变体，而10d拟南芥幼苗的根长之间没有显着差异，但是突变体的须根系较其他叁种株系显着增加，突变体有些叶片出现失绿现象。这些结果说明突变体的抗寒力低于其他叁种拟南芥株系。通过拟南芥叶片原生质体抗寒实验（-20℃2h），发现与野生型和突变体相比，外源基因AmDUF1517提高了过表达型和回复突变体叶绿体膜结构的稳定性。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2013-06-01）
张宇,石凤翎,高霞,蔡丽艳[8]（2013）在《扁蓿豆冷诱导基因转录差异cDNA-AFLP反应体系的构建》一文中研究指出以0℃低温处理3～5叶期扁蓿豆的幼苗嫩叶为试验材料,对影响其cDNA-AFLP反应体系的各个关键因子进行探讨和优化,建立适宜的扁蓿豆cDNA-AFLP扩增体系,并对扁蓿豆冷诱导的差异表达进行检测。结果表明,利用MseⅠ/EcoRⅠ分步酶切连接,以4μl稀释20倍的预扩产物作为模板、1.6μl dNTP、0.4μlTaq DNA酶、2μl10×PCR Buffer获得的选择性扩增效果较好,条带清晰稳定。应用该反应体系扩增出的扁蓿豆冷诱导差异片段有五种表达类型,为扁蓿豆抗寒基因转录水平差异表达的研究奠定了基础。(本文来源于《中国草地学报》期刊2013年02期）
张宇,石凤翎,云娜,高霞,伊风艳[9]（2013）在《扁蓿豆冷诱导基因差异表达分析》一文中研究指出以直立型扁蓿豆幼苗为试验材料,采用cDNA-AFLP技术分析扁蓿豆在低温胁迫诱导下的基因表达差异。结果显示,利用筛选的64对引物组合,对0℃低温处理3～5叶期扁蓿豆幼苗的叶片cDNA进行扩增,共获得549条差异表达的转录衍生片段(TDFs)。选取上调表达较好的43条片段进行克隆、测序、Blastx比对和功能分析,其中32个TDFs的蛋白序列与基础代谢、信号转导、转录因子、防御等功能有关,11个TDFs为假设蛋白、未知蛋白或没有找到一致序列。利用荧光定量PCR对3种不同上调表达差异片段进行验证,结果可从数值上更准确地显示差异片段在低温胁迫过程中的相对表达量。(本文来源于《西北植物学报》期刊2013年01期）
卢双楠,李粲,滕峥,刘开雨,刘芳[10]（2012）在《高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建》一文中研究指出【目的】利用载体重组技术分别将高山离子芥冷诱导基因(Cbcor15a)和报告基因eGFP插入载体pCambia1300-bar,并引入玉米泛素基因启动子UBi-1代替载体本身启动子CaMV35s,重组为适合甘蔗转基因的二元植物表达载体pCambia1300-cbcor15a-bar。【方法】参照pCambia1300-bar载体多克隆位点和基因Cbcor15a、eGFP和启动子UBi-1的核苷酸序列设计引物,通过载体重组技术将基因和启动子分别插入相应的位点。利用基因枪分别将pCambia1300-bar载体和重组载体导入洋葱表皮细胞,用荧光显微镜和激光共聚焦显微镜观察。【结果】与导入pCambia1300-bar载体的洋葱表皮细胞相比较,导入重组载体pCambia1300-cbcor15a-bar的洋葱表皮细胞内有强烈的绿色荧光信号。【结论】重组甘蔗转基因二元植物表达载体启动子Ubi-1能够调控下游冷诱导基因Cbcor15a和报告基因eGFP的正常高效表达,为外源基因Cbcor15a转化甘蔗提供保障。(本文来源于《南方农业学报》期刊2012年09期）
冷诱导基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本试验以冰岛虞美人不同品种为实验材料,研究人工模拟低温对植株叶片形态及生理、生化指标的影响,采用主成分分析法和隶属函数法对其耐寒性进行综合评价。同时根据其他植物中已知冷诱导转录因子DREBl的保守序列,设计引物,从冰岛虞美人克隆获得PnDREB1的全长序列,并对其进行生物信息学分析和低温诱导表达分析。获得以下主要研究结果：1冰岛虞美人.不同品种耐寒性评价以‘香槟气泡’、国产品种、 ‘仙境’、 ‘花匠’4个品种成熟植株为试验材料,研究低温环境对植株叶片形态、电导率、MDA等11个形态、生理、生化指标的影响。结果表明：(1)不同低温(3、0、-3、-6、-9℃)处理24h,4个品种冰岛虞美人相对电导率随温度降低呈上升趋势, ‘香槟气泡’、国产品种、‘仙境’、‘花匠’的低温半致死温度分别为-7.7℃、-5.2℃、-1.9℃、-4.5℃。(2)-3℃处理0、24、48、72h时,4个品种冰岛虞美人叶片均出现不同程度的冻害,72h后冻害指数分别为0.30、1.46、2.34、1.67；随低温胁迫时间的延长,植株MDA含量均呈先下降后上升的变化趋势；‘香槟气泡’可溶性蛋白含量先降后升,其他叁种则先升后降；‘花匠’脯氨酸含量持续上升,其他叁种则先升后降；‘香槟气泡’SOD活性持续上升,其他叁种植株先升后降；4个品种冰岛虞美人叶片POD活性先升后降,CAT活性呈“上升-下降-上升”的变化趋势,APX活性先升后降,GR活性与ASA含量均先降后升。说明4个品种冰岛虞美人对低温均有一定的适应性,但不同品种对低温的适应性调节存在明显差异。(3)用主成分分析法和隶属函数法对MDA、可溶性蛋白、脯氨酸等9个生理、生化指标进行分析,得出4个品种冰岛虞美人耐寒性强弱顺序为：‘香槟气泡’>国产品种>‘花匠’>‘仙境’,该结果与各品种低温半致死温度排序及冻害指数排序基本一致,可为冰岛虞美人耐寒指标确定、品种筛选提供科学依据。2.冰岛虞美人PnDREB1基因的克隆及序列分析通过RI-PCR法从冰岛虞美人品种‘香槟气泡’中分离出一个新的DREB1转录因子,命名为PnDREB1。该基因序列全长1035bp,无内含子,开放阅读框(ORF)长699bp,编码232个氨基酸残基,预测蛋白分子量为26.3kDa,含有1个由58个氨基酸组成的AP2/ERF结构域,且在N-端含有一个富含碱性氨基酸区域,推测为核定位信号(NLS):PKR(K)K(P)AGRxKFxETRHP,结构域下游含有DSV(A)WR序列,这两段多肽序列均属于DREB1/CBF基因家族的特征序列。该基因编码的蛋白质与荷花DREB1B、梅花DREB1B、菊花DREB1、沙梨DREB、拟南DREB1D等具有高度同源性。系统进化树分析显示,冰岛虞美人PnDREBl属于DREB/CBF转录因子家族中的A-1亚组,与菊花DREB1亲缘关系最近。生物信息学预测分析表明,冰岛虞美人PnDREB1基因编码的蛋白属于亲水性蛋白,无跨膜结构,无信号肽,可能位于叶绿体或细胞核中。二级结构及叁级结构预测显示,该蛋白含有1个α-螺旋,3个β-折迭和多个β-转角。半定量RT-PCR分析表明,低温处理前,冰岛虞美人叶片内PnDREB1基因表达水平很低,几乎检测不到。-3℃处理后,PnDREB1转录水平随处理时间的延长呈先上升后下降的变化趋势,在处理8h时其相对表达量达到最大值。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
冷诱导基因论文参考文献
[1].姜航.柑橘冷诱导基因低温响应及转化柠檬[D].湖南农业大学.2016
[2].何姣.冰岛虞美人（Papavernudicaule）不同品种耐寒性评价及其冷诱导基因PnDREB1的克隆[D].四川农业大学.2015
[3].姜航,胡威,屈汉金,周潇,张凤.冷诱导基因转化柠檬的研究[J].湖南农业科学.2015
[4].谭克,赵福顺,吴慧杰,宋述尧.冷诱导基因转录因子CBF1转入黄瓜的研究[J].北方园艺.2015
[5].周潇,姜航,屈汉金,邓子牛,A·Gentile.柑橘冷诱导基因及其启动子表达载体构建与瞬时表达分析[J].果树学报.2015
[6].王北艳,殷奎德.转rd29A-ICE1冷诱导基因水稻提高抗寒性研究[J].核农学报.2013
[7].顾立江.沙冬青温度相关基因表达谱分析及冷诱导基因AmDUF1517的克隆与功能研究[D].中国农业科学院.2013
[8].张宇,石凤翎,高霞,蔡丽艳.扁蓿豆冷诱导基因转录差异cDNA-AFLP反应体系的构建[J].中国草地学报.2013
[9].张宇,石凤翎,云娜,高霞,伊风艳.扁蓿豆冷诱导基因差异表达分析[J].西北植物学报.2013
[10].卢双楠,李粲,滕峥,刘开雨,刘芳.高山离子芥冷诱导基因转化甘蔗二元植物表达载体构建[J].南方农业学报.2012