真核生物翻译起始因子-1A在小鼠植入前胚的表达和作用

论文摘要

目的:观察在小鼠植入前胚各个发育阶段中,真核生物翻译起始因子-1A（eukaryotic translation initiation factor-1A,eIF1A）的蛋白表达及mRNA水平变化,并利用RNA干扰技术特异性抑制eIF1A基因表达来进一步探讨eIF1A在小鼠植入前胚发育过程中的作用。方法:1.分别取KM雌性小鼠和雄性小鼠（♀KM×♂KM）交配所得的不同阶段的植入前胚。通过激光共聚焦扫描显微镜观察在植入前胚中不同阶段的eIF1A蛋白表达情况;2.用Real Time-PCR技术检测不同时期的植入前胚eIF1A mRNA的表达水平。3.收集KM小鼠1-细胞胚（hCG后18h）,置于KSOM培养液中培养3h,收集具有双原核的1-细胞胚,将其分成三个组,分别为KSOM空白对照组、negative-siRNA组（阴性对照组）和eIF1A-siRNA组,并进行显微注射,而后置于KSOM中继续培养。1)观察显微注射后的植入前胚发育情况;2)分别收集hCG50h后的KSOM空白对照组、negative-siRNA阴性对照组和eIF1A-siRNA组的2-细胞胚,并通过Real Time-PCR检测eIF1A和其他合子基因组激活标志基因MuERV-L、Zscan4d、Hsp70.1及干细胞转录因子Sox2、Oct4 mRNA的表达水平。3)分别收集hCG90h后的KSOM空白对照组、negative-siRNA阴性对照组和eIF1A-siRNA组桑葚胚,用免疫荧光染色观察CDX2、OCT4和SOX2蛋白表达情况。结果:1.免疫荧光染色结果显示,eIF1A蛋白在1-细胞胚开始定位于细胞核中,在2-细胞胚阶段核内染色最明显,而后核内表达开始减弱,胞质表达增强,至桑葚胚、囊胚阶段只在胞质中表达。2.利用Real-Time PCR技术检测eIF1AmRNA水平显示,eIF1A mRNA在1-细胞胚、2-细胞胚、4-细胞胚、8-细胞胚表达持续上升,在8-细胞胚时期达到最高,随后表达水平开始降低。3.体外培养结果发现eIF1A-siRNA注射后,相较于KSOM空白对照组、阴性对照组,eIF1A-siRNA囊胚过渡率明显降低（P<0.001）,且接近于30%的植入前胚被抑制在桑葚胚阶段（P<0.001）;Real-Time PCR结果显示,注射eIF1A-siRNA后,2-细胞胚阶段eIF1AmRNA水平明显低于KSOM空白对照组及阴性对照组（P<0.001）,而Hsp70.1mRNA水平也明显降低（P<0.01）。在桑葚胚阶段,eIF1A-siRNA组桑葚胚的CDX2蛋白表达也明显下调。结论:eIF1A在植入前胚8-细胞胚之前在细胞核中表达,在桑葚胚和囊胚期在细胞质中表达,表明其在植入前胚发育前期可能发挥转录调控作用,而在后期发挥翻译功能;通过将1-细胞胚显微注射eIF1A-siRNA后,可使细胞阻滞在桑葚胚阶段,说明eIF1A参与囊胚形成的调控;注射eIF1A-siRNA后发现,2-细胞胚合子基因组激活标志基因中Hsp70.1的表达下调,桑葚胚细胞中CDX2的蛋白表达明显降低,提示eIF1A可能通过调控合子基因组激活标志基因中Hsp70.1的表达,影响囊胚滋养外胚层分化,进而影响囊胚的形成。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 苏杨

导师: 王世鄂

关键词: 植入前胚,合子基因组激活,滋养外胚层

来源: 福建医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学,生物学

单位: 福建医科大学

基金: 国家自然科学基金资助项目(81671526),福建省科技创新联合资助项目(2017Y9114),福建医科大学启航基金项目(2017XQ2010,2016QH002)

分类号: Q75

DOI: 10.27020/d.cnki.gfjyu.2019.000202

总页数: 51

文件大小: 7524K

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标签：植入前胚论文;  合子基因组激活论文;  滋养外胚层论文;