小分子化合物诱导体细胞重编程荧光蛋白追踪细胞系建立及鉴定分析

论文摘要

背景:体细胞重编程技术极大地促进了再生医学研究的发展,包括核移植和细胞融合,还有获得2012年诺贝尔奖的病毒载体介导的转录因子诱导重编程等方式,但是这些诱导方式存在着各种技术问题与潜在的安全问题,如操作方法复杂,诱导效率低,外源基因插入以及病毒重新激活等,这些都严重限制了体细胞重编程技术的进一步发展与应用。与上述体细胞重编程方法相比,小分子化合物诱导体细胞重编程拥有诸多优势,如原料容易合成与储备,作用可逆,诱导可以标准化控制,应用更为安全等。小分子化合物诱导获得的多能性干细胞（Chemically induced pluripotent stem cells,CiPS）可以避免病毒及转录因子给细胞带来的安全问题,更有利于走向临床的应用。目的:基于前期我们已经成功开发了一种操作简便、诱导过程条件均匀、所有成分明确、标准化的小分子化合物诱导方法,验证重编程起始细胞确为小鼠胚胎成纤维细胞（Mouse embryonic fibroblasts,MEFs）,进一步研究小分子化合物重编程机制。方法:本研究使用转基因小鼠构建FSP-tdTomato荧光蛋白追踪的成纤维细胞进行小分子化合物诱导重编程,获取了FSP-tdTomato的CiPS细胞系,并通过形态学分析,多能性基因mRNA、蛋白质的表达情况以及畸胎瘤实验等对其多能性进行鉴定。结果:本实验结果表明,小分子化合物处理tdTomato-MEFs 40天之后,出现核仁明显、核质比高、细胞呈圆形、团块状聚集的细胞克隆,并且高表达多能性基因,体内可分化为三个胚层组织。结论:以上结果表明tdTomato-MEFs可用于小分子化合物重编程为CiPSCs,并且具有与小鼠胚胎干细胞（mouse embryonic stem cells,mESCs）类似的多能性。该荧光蛋白追踪细胞系的建立将有利于小分子化合物重编程机制的进一步研究,并且该细胞系的进一步分化仍能保持荧光蛋白持续表达,可用于CiPSCs来源功能性细胞的移植追踪等研究。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 陈瑞平

导师: 朱平

关键词: 小分子化合物,细胞重编程,化合物诱导多能性干细胞,成纤维细胞特异性蛋白

来源: 华南理工大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 华南理工大学

分类号: R329.2

DOI: 10.27151/d.cnki.ghnlu.2019.002402

总页数: 43

文件大小: 3956K

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